王 蓮，張榮泉

(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020)

仙鶴草不同提取物對腫瘤細胞作用的研究概況

王 蓮，張榮泉*

(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020)

本文綜述了近年來中藥仙鶴草不同提取部位的水提物、乙酸乙酯提取物、乙醚提取物、丙酮提取物及其成分 鞣酸、仙鶴草酚及多糖等在體外對腫瘤細胞的作用，提示該中藥對腫瘤細胞具有的較強的生物活性，抑制腫瘤細胞增殖，誘導(dǎo)細胞凋亡，而凋亡發(fā)生機制可能與Bcl-2和P53蛋白表達改變有關(guān)。今后應(yīng)加強生物體內(nèi)的藥效學(xué)和作用機理研究，為抗腫瘤新藥的開發(fā)提供依據(jù)。

仙鶴草，提取物，抑制腫瘤

仙鶴草為薔薇科植物龍芽草(AgrimoniaPilosaLedeb)的干燥地上部分[1]，性寒，味苦、澀，含有酯、酚、黃酮、皂苷、鞣質(zhì)、糖苷、揮發(fā)油及有機酸等成分，傳統(tǒng)主要用于治療咯血、尿血、便血、崩漏等各種出血癥[2]，有收斂止血、止帶止痢、活血調(diào)經(jīng)、補虛壯體等諸多功效[3]?，F(xiàn)代藥理研究證明其具有抗炎、止血、抗氧化、抗菌消炎、抗腫瘤、降血壓及血糖[4-9]等生物活性。尤其該中藥的其抗腫瘤作用尤為明顯，其不同提取物在體外對多種腫瘤細胞具有抑制或殺傷作用?，F(xiàn)就仙鶴草不同提取物對腫瘤細胞作用的研究概況綜述如下。

1 仙鶴草水提物的作用

鄒夏慧等[10]使用不同濃度仙鶴草水提液處理人肝癌細胞(SMMC-7721),采用MTT法檢測細胞活力，并計算其抑制率，觀察細胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果表明該水提液能夠明顯抑制SMMC-7721細胞增殖，誘導(dǎo)細胞凋亡，而細胞凋亡機制則可能與P53蛋白表達上調(diào)和Bcl-2蛋白表達下調(diào)有關(guān)。李紅枝等[11]以高、中、低3個劑量(4.0、2.0及1.0 mg/ml)的仙鶴草水溶性提取物給小鼠灌胃，連續(xù)30 d，觀察小鼠骨髓細胞微核實驗和睪丸染色體畸變實驗的抗突變作用，結(jié)果顯示該提取物對小鼠肉瘤(S180)、肝癌(H22)、宮頸癌(U14)、腦瘤(B22)、艾氏腹水癌(EAC)、黑素瘤(B16)和大鼠瓦克癌(W256)體外培養(yǎng)細胞均有較好抑制作用，殺死癌細胞的同時未損害正常細胞，可用于治療各種腫瘤。將仙鶴草注射液作用于胃癌(BGC-803)細胞和宮頸癌(HeLa)細胞，細胞抑制率分別達到61.9%和67.9%。流式細胞檢測結(jié)果顯示，仙鶴草注射液可干擾腫瘤細胞周期進程，阻滯腫瘤細胞由G1+G0期向S期和G2+M期轉(zhuǎn)化，對人腫瘤細胞具有生長抑制作用[12]。另有報道[13]，使用仙鶴草注射液治療小鼠前列腺移植瘤5周后，發(fā)現(xiàn)腫瘤瘤質(zhì)量降低，瘤體減小，腫瘤組織大片壞死，表明仙鶴草對前列腺實體性移植瘤具有明顯的抑制作用。

仙鶴草水提液抑制腫瘤作用機理可能與調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫蛋白作用有關(guān)。馬麗萍等[14]分別將0、2、4、8和16 g/L濃度的仙鶴草水提液作用于食管癌(Eca109)細胞，24、48和72 h后觀察其對Eca109細胞生長的抑制作用，并運用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測16 g/L水提液作用72 h對Eca109細胞Bcl-2、P53蛋白表達的影響。MTT法測定結(jié)果表明，在16g/L仙鶴草水提液作用48 h和72 h后，Eca109細胞生長明顯受抑；而免疫組化結(jié)果顯示16 g/L仙鶴草水提液作用72 h后，Eca109細胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達下調(diào)，P53蛋白表達上調(diào)。證實其誘導(dǎo)Eca109細胞凋亡的機制可能與下調(diào)Bcl-2蛋白表達及上調(diào)P53蛋白表達有關(guān)。而鄒夏慧等[15]亦以不同濃度的仙鶴草水提物細胞培養(yǎng)液處理肝癌(SMMC-7721)細胞，發(fā)現(xiàn)其作用48和72 h后，細胞呈現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變；20 mg/ml組的細胞凋亡率分別為19.5%和23.0%，40 mg/ml組分別為33.4%和42.7%；20 mg/ml組的Bcl-2蛋白陽性表達率分別為71.9%和58.5%，40 mg/ml組分別為47.9%和26.5%；20 mg/ml組的P53蛋白陽性表達率分別為22.9%和50.6%，40 mg/ml組分別為48.7%和83.7%。顯然水提液能較明顯地抑制SMMC-7721細胞增殖，誘導(dǎo)細胞凋亡，并呈現(xiàn)劑量、時間依賴性，凋亡發(fā)生機制可能與Bcl-2和P53蛋白表達改變有關(guān)。

2 仙鶴草乙酸乙酯提取物的作用

以不同質(zhì)量濃度的仙鶴草乙酸乙酯部位(0、50、100、150、200及250 μg/ml)作用于體外培養(yǎng)的人肝癌(HepG2)細胞，MTT法檢測其細胞生長抑制率；同時以流式細胞儀檢測細胞凋亡和腫瘤細胞內(nèi)活性氧(ROS)的變化；Fluo-3/AM熒光探針觀察腫瘤細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。檢測結(jié)果顯示該部位(總鞣質(zhì)質(zhì)量分數(shù)為19.91%)可顯著抑制HepG2細胞的生長，誘導(dǎo)細胞凋亡，其IC50為127.85 μg/ml。當作用48 h后，HepG2細胞數(shù)量明顯減少；在Fluo-3/AM熒光探針的作用下，具有較強綠色熒光；同時檢測出細胞內(nèi)ROS具有較明顯增加。結(jié)果表明，仙鶴草乙酸乙酯有效部位能夠抑制HepG2細胞的生長，誘導(dǎo)細胞凋亡，作用機制可能是與腫瘤細胞內(nèi)鈣離子的釋放和ROS的增加有關(guān)[16]。另有文獻[17]報道，使用不同濃度的仙鶴草乙酸乙酯提取物作用人肝癌(BEL-7402)細胞，72 h后細胞的生長增殖作用被抑制，并呈現(xiàn)劑量依賴性，作用較明顯，OD值與空白組相比，具有顯著性差異(P<0.05)，其IC50為89.277 μg/ml。

3 仙鶴草乙醚提取物的作用

將乙醚提取物與生理鹽水配制成1 g/L的混懸液，加入HeLa細胞培養(yǎng)基中，結(jié)果顯示，HeLa細胞明顯減少，提示其對HeLa細胞具有一定的抑制作用，其抑制率為35%[18]。

4 仙鶴草丙酮提取物的作用

仙鶴草丙酮提取物的正丁醇萃取層可顯著性抑制BEL-7402細胞生長，誘導(dǎo)細胞凋亡，IC50為107.54 μg/ml，作用48 h后，BEL-7402細胞數(shù)量明顯減少，使用Fluo-3/AM熒光探針進行檢測發(fā)現(xiàn)，其具有較強綠色熒光，同時檢測出細胞內(nèi)ROS明顯增加。結(jié)果表明，試驗樣品能夠抑制BEL-7402細胞生長，誘導(dǎo)細胞凋亡，而作用機制可能與細胞內(nèi)鈣離子釋放和ROS增加有關(guān)[19]。

5 仙鶴草不同成分對腫瘤細胞的作用

仙鶴草中的鞣酸成分可以抑制腫瘤細胞，增強免疫細胞活性，認為是仙鶴草中主要的抗腫瘤活性成分。有研究報道[20]，仙鶴草鞣酸能夠明顯抑制體外培養(yǎng)的人癌細胞裸鼠轉(zhuǎn)移瘤肺癌細胞株(SPC-A-1)、HeLa、人乳腺癌細胞株(MCF-7)和低分化胃黏液腺癌(Mgc803)，且對其中的HeLa作用最強，SPC-A-1次之，對HeLa 、SPC-A-1 及MCF-7的IC50分別為6.2、12.4及49.2 μg/ml，標志著仙鶴草有可能成為臨床上治療宮頸癌和肺腺癌的有效藥物。此外，仙鶴草酚對白血病細胞(K562)也具有明顯的抑制作用，MTT試驗及流式細胞術(shù)檢測結(jié)果皆表明仙鶴草酚對K562白血病細胞活性及細胞凋亡率具有一定的影響，仙鶴草酚(0、0.11、1.0 mg/ml)劑量依賴性地抑制了K562細胞活性，增加了其凋亡率(P<0.05)[21]。

研究發(fā)現(xiàn)，仙鶴草總多糖對腦膠質(zhì)瘤(U251)細胞株增殖具有明顯的體外抑制作用(P<0.01)，并表現(xiàn)出濃度依賴關(guān)系，IC50為1.35 g/L，U251細胞經(jīng)該多糖處理后顯示出典型的凋亡形態(tài)變化，推測其抗腫瘤機制可能與誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡有關(guān)[22]。仙鶴草素為一種丹寧酸。在腹水型和固體型嚙齒動物腫瘤實驗中發(fā)現(xiàn)，在MM2腫瘤細胞腹腔接種前后，其經(jīng)腹腔給予仙鶴草素的劑量超過10 mg/kg時，可幾乎完全抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的生長，延長了MM2腫瘤小鼠的壽命，甚至得以治愈。雖然其在體外對MM2細胞顯示出強烈的細胞毒性，但是通過向培養(yǎng)液中添加胎牛血清便能夠使其毒性減少至約初始活性的4%。另一方面，腹腔注射仙鶴草素亦增加了外圍白細胞的數(shù)量和單核細胞的比率。在腹腔注射丹寧酸的第4 d，附著細胞毒性的腹腔滲出細胞數(shù)量同樣增多；小鼠的脾臟增大，且脾臟細胞具有占用3H-胸苷的能力；而在未治療的小鼠中，仙鶴草素顯示出微弱的抗脾臟細胞直接遷移活動，表明了仙鶴草素是一種潛在的抗腫瘤丹寧酸，其可能是通過對腫瘤細胞和免疫細胞的作用而提高了宿主動物的免疫應(yīng)答[23]。

仙鶴草臨床主要用于治療腫瘤、糖尿病、婦科疾病、消化系統(tǒng)疾病以及泌尿系統(tǒng)疾病等[24-26]。本文綜述了仙鶴草的不同提取物、成分對不同的腫瘤細胞具有一定的抑制作用，作用濃度及其機理也闡述得較為清楚，為今后的深入研究打下了良好的理論基礎(chǔ)，但對其在動物體內(nèi)抗腫瘤作用的研究尚待加強。

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2016-03-15

*通訊作者：張榮泉，E-mail：zhangrongquan928@126.com。

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