章梅英

Coulter LH750血細(xì)胞分析儀有核紅細(xì)胞報(bào)警分析

章梅英

血細(xì)胞分析儀；有核紅細(xì)胞；血涂片鏡檢

有核紅細(xì)胞（nucleated red blood cell，NRBC）是骨髓紅系造血系統(tǒng)釋放到外周血中的幼稚紅細(xì)胞（外周血以中、晚幼紅為主）。除新生兒、胎兒外，正常人外周血中不會(huì)出現(xiàn)NRBC，常見于溶血性貧血、急、慢性白血病、紅白血病、髓外造血及嚴(yán)重缺氧等患者的病理性外周血涂片中[1]。Coulter LH750全自動(dòng)血液分析儀通過體積激光三維技術(shù)（VCS）從體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)及顆粒狀況區(qū)分細(xì)胞類型并結(jié)合電阻抗法，實(shí)現(xiàn)對(duì)NRBC的自動(dòng)化計(jì)數(shù)。我們通過分析Coulter LH750全自動(dòng)血液分析儀NRBC報(bào)警與血涂片染色人工鏡檢計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行比較，對(duì)NRBC自動(dòng)化檢測(cè)的可靠性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集紹興上虞區(qū)人民醫(yī)院2015年7月—2015年9月，通過Coulter LH750全自動(dòng)血液分析儀“CBC+DIFF”模式自動(dòng)化檢測(cè)有NRBC報(bào)警的293例住院患者的血常規(guī)標(biāo)本,男性176例，女性117例，年齡1.0天～92.0歲；其中成人組228例，年齡18～55歲，平均（31.97±11.54）歲;嬰兒組65例，年齡1～12個(gè)月，平均（4.28±3.67）個(gè)月.

1.2 儀器與試劑 美國(guó) Beckman Coulter公司LH750型全自動(dòng)血液分析儀及其配套試劑；日本OLYMPUS公司光學(xué)顯微鏡；EDTA-K2抗凝真空管。瑞氏染液及緩沖液按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[2]配制。

1.3 方 法

1.3.1 血細(xì)胞分析儀法 真空管采血1.8mL，于2h內(nèi)按照Coulter LH750的操作規(guī)程上機(jī)檢測(cè)，記錄NRBC報(bào)警的樣本信息、血紅蛋白（HGB）參數(shù)及提示。

1.3.2 血涂片鏡檢計(jì)數(shù)法 取儀器法NRBC報(bào)警的標(biāo)本按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》制備血涂片，行瑞氏染色15min后進(jìn)行顯微鏡鏡檢，計(jì)數(shù)100～200個(gè)白細(xì)胞時(shí)檢到的NRBC數(shù)，以XXNRBC/100WBC格式報(bào)告，此標(biāo)本的白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果通過校正公式予以校正后報(bào)告。

1.4 結(jié)果判斷 以儀器自動(dòng)化檢測(cè)NRBC報(bào)警為儀器檢測(cè)陽(yáng)性，血涂片鏡檢檢到NRBC為鏡檢陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，陽(yáng)性符合率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 儀器提示NRBC陽(yáng)性報(bào)警與鏡檢陽(yáng)性結(jié)果符合率比較 根據(jù)NRBC自動(dòng)化檢測(cè)計(jì)數(shù)值不同，將293例儀器報(bào)警結(jié)果分為低值（0＜NRBC≤2）、中值（2＜NRBC≤4）和高值（NRBC＞4）三組。高值組儀器檢測(cè)和血涂片鏡檢的陽(yáng)性符合率與其余兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.58，P＜0.01），中、低值組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.091，P＞0.05），見表1。

表1 儀器提示NRBC陽(yáng)性報(bào)警與鏡檢陽(yáng)性結(jié)果符合率比較（例）

2.2 年齡因素對(duì)NRBC儀器檢測(cè)和血涂片鏡檢陽(yáng)性符合率的影響 成人組儀器檢測(cè)NRBC陽(yáng)性228例，血涂片鏡檢陽(yáng)性119例，陽(yáng)性符合率52.2%；嬰兒組儀器檢測(cè)NRBC陽(yáng)性65例，血涂片鏡檢陽(yáng)性41例，陽(yáng)性符合率63.1%，兩組陽(yáng)性符合率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.42，P＞0.05）。

2.3 血紅蛋白（HGB）對(duì)NRBC儀器檢測(cè)與血涂片鏡檢陽(yáng)性符合率的影響 根據(jù)HGB值將293例標(biāo)本分為HGB≥90g/L和HGB＜90g/L兩組，HGB≥90g/L組儀器檢測(cè)NRBC陽(yáng)性137例，血涂片鏡檢陽(yáng)性56例，陽(yáng)性符合率40.9%；HGB＜90g/L組儀器檢測(cè)NRBC陽(yáng)性156例，血涂片鏡檢陽(yáng)性104例，陽(yáng)性符合率66.7%；二者儀器檢測(cè)和血涂片鏡檢的陽(yáng)性符合率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.48，P＜0.01）。

3 討論

除部分新生兒外周血中可有少量有核紅細(xì)胞出現(xiàn)外，NRBC一般僅在病理狀態(tài)下在外周血中被檢出，如強(qiáng)烈促紅細(xì)胞生成素刺激，造血功能嚴(yán)重不全,組織缺氧狀態(tài)等[3]，故NRBC的檢測(cè)有著重要的臨床意義。目前多數(shù)全自動(dòng)血液分析儀均能對(duì)外周血NRBC進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。Coulter LH750血細(xì)胞分析儀通過溶解紅細(xì)胞，同時(shí)使白細(xì)胞的固有特點(diǎn)如表面胞質(zhì)及細(xì)胞大小等仍保持與在人體內(nèi)相同的狀態(tài)，運(yùn)用VCS（體積、電導(dǎo)和光散射）技術(shù)從細(xì)胞體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、核漿比及顆粒狀況區(qū)分細(xì)胞類型，結(jié)合智能微數(shù)技術(shù)對(duì)NRBC進(jìn)行自動(dòng)識(shí)別及計(jì)數(shù)，并能夠根據(jù)結(jié)果自動(dòng)糾正所測(cè)得的白細(xì)胞數(shù)。白細(xì)胞校正公式為：校正后的的白細(xì)胞/L=校正前白細(xì)胞數(shù)乘以100除以100+Y（Y為白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)100個(gè)白細(xì)胞中有核紅細(xì)胞的數(shù)量）[4]。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)儀器NRBC計(jì)數(shù)為高值或HGB＜90g/L時(shí)，儀器檢測(cè)結(jié)果與血涂片鏡檢陽(yáng)性的符合率較高。故對(duì)于上述標(biāo)本，進(jìn)行有核紅細(xì)胞的手工復(fù)檢以確認(rèn)NRBC的存在顯得尤為重要。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程中遇到1例儀器檢測(cè)時(shí)因干擾而出現(xiàn)NRBC假陽(yáng)性的病例，此時(shí)NRBC的假陽(yáng)性嚴(yán)重影響其白細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，如不對(duì)其進(jìn)行鏡檢確認(rèn)并校正白細(xì)胞數(shù)，將直接影響到臨床的診斷與治療。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，成人樣本與嬰兒樣本的儀器檢測(cè)與血涂片鏡檢的陽(yáng)性符合率相近，提示Coulter LH750對(duì)不同年齡段患者血常規(guī)樣本NRBC的檢測(cè)無(wú)明顯差異。而在儀器NRBC計(jì)數(shù)處于中、低值和HGB＞90g/L時(shí)，儀器結(jié)果與鏡檢的陽(yáng)性符合率明顯下降，考慮主要原因是由于手工法鏡檢細(xì)胞數(shù)目（100～200個(gè)白細(xì)胞）偏少而儀器法細(xì)胞計(jì)數(shù)量更多，而血涂片上有核細(xì)胞分布不均勻、血涂片染色情況的好壞以及操作者對(duì)NRBC的辨認(rèn)的主客觀因素同樣會(huì)造成鏡檢出現(xiàn)陰性結(jié)果[5]。

綜上所述，Coulter LH750對(duì)NRBC的報(bào)警提示有較好的可靠性。可以在一定程度上代替標(biāo)本的顯微鏡檢查以減輕勞動(dòng)強(qiáng)度提高工作效率。但是值得關(guān)注的是，目前的檢驗(yàn)工作中存在依賴儀器檢測(cè)結(jié)果而忽視顯微鏡鏡檢的情況，從本研究結(jié)果中可以看出，對(duì)于部分NRBC計(jì)數(shù)值偏高（NRBC＞4）或紅細(xì)胞參數(shù)異常（HGB＜90g/L）的血標(biāo)本仍必須對(duì)其進(jìn)行血涂片鏡檢確認(rèn)。在日常檢測(cè)中，必須嚴(yán)格執(zhí)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)的復(fù)檢規(guī)則[6]，同時(shí)須對(duì)每份血標(biāo)本的三維散點(diǎn)圖及儀器的提示信息予以足夠的重視及研究，才能保證每個(gè)結(jié)果的真實(shí)可信。

［1］李智夏，鐵安.孕婦外周血胎兒有核紅細(xì)胞的分離與檢測(cè)［J］.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，1998，18（2）：111-114.

［2］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.第3 版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：128.

［3］鄧家棟.臨床血液學(xué)［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，2001：1171.

［4］Byeon Y，Ki CS，Han KH.Isolation ofnucleated red blood cells in maternal blood for Non-invasive prenatal diagnosis［J］.Biomed Microdevices，2015，17（6）：118.

［5］Cremer M，Roll S，Graf C，et al.Nucleated red blood cells as marker for an increased risk of unfavorable outcome and mortality in very low birth weight infants［J］.Early Hum Dev，2015，91（10）：559-563.

［6］中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志編輯委員會(huì).全國(guó)血液學(xué)復(fù)檢專家小組工作會(huì)議紀(jì)要暨血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)復(fù)檢規(guī)則釋義［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30（4）：380-382.

（收稿：2016-01-05 修回：2016-02-20）

淅江省紹興市上虞區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（上虞 312300）