張 艷 吳春麗 瞿 鑌 裘新民 梁麗貞 嚴(yán)永興

260例治療失敗梅毒患者血、腦脊液白細(xì)胞介素-6、10及腫瘤壞死因子-α檢測結(jié)果分析

張 艷 吳春麗 瞿 鑌 裘新民 梁麗貞 嚴(yán)永興

梅毒；白細(xì)胞介素-6；白細(xì)胞介素-10；腫瘤壞死因子-α

梅毒是由蒼白密螺旋體（treponema pallidum，TP）感染引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播性疾病。目前研究[1]發(fā)現(xiàn)梅毒感染后機(jī)體對梅毒螺旋體的免疫學(xué)效應(yīng)在疾病的發(fā)展、痊愈中起作用，T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子具有特定的免疫調(diào)節(jié)和殺傷功能，在機(jī)體抗梅毒螺旋體感染的過程中發(fā)揮著重要作用。近年來隨著梅毒發(fā)病率的升高，經(jīng)正規(guī)驅(qū)梅治療后，臨床治療效果不佳甚至治療失敗的報道增多[2-4]。本研究通過檢測260例治療失敗梅毒患者血清、腦脊液細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-6、10（IL-6、10）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，探討其病程中免疫應(yīng)答的變化，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年7月—2014年12月于本院皮膚科性病門診就診的梅毒患者312例，其中治療失敗梅毒患者260例，男93例，女167例，年齡19～72歲，平均（35.8±13.6）歲，病程0.7～2.4年，平均（1.33±0.82）年；梅毒治療后血清轉(zhuǎn)陰患者52例，男31例，女21例，年齡18～70歲，平均（32.2±14.7）歲，病程0.6～1.5年，平均（1.02±0.75）年。健康對照組為本院同期健康人群30名，男16名，女14名，年齡18～46歲，平均（28.6±9.5）歲，經(jīng)梅毒初篩的快速血漿反應(yīng)素實驗（RPR）、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）檢測均為陰性。260例治療失敗梅毒患者確診神經(jīng)梅毒41例，男25例，女18例；非神經(jīng)梅毒219例，男67例，女152例。其中有癥狀神經(jīng)梅毒22例（麻痹性癡呆6例，腦膜血管梅毒10例，視神經(jīng)梅毒2例，脊髓癆3例，胃腸危象1例），無癥狀神經(jīng)梅毒19例。所有梅毒患者、健康人群均排除艾滋病等其他感染性、自身免疫性疾病等可能性。三組人群一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：均曾有冶游史；具備梅毒臨床癥狀及體征；經(jīng)RPR、TPPA檢測均為陽性。梅毒治療失敗標(biāo)準(zhǔn)：按治療指南應(yīng)用長效青霉素或普魯卡因青霉素驅(qū)梅治療至少1個療程，治療后6個月復(fù)查RPR滴度不能下降4倍或升高，排除再感染者考慮治療失敗。梅毒治療后血清陰轉(zhuǎn)：符合梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)正規(guī)治療后第6個月隨訪復(fù)查血清RPR試驗陰轉(zhuǎn)且臨床癥狀和體征均消失的患者。神經(jīng)梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：無其他已知原因所致的符合神經(jīng)梅毒的臨床癥狀和體征；非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗：陽性；梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗：陽性；腦脊液檢查：白細(xì)胞計數(shù)≥10×106/L，蛋白量＞500mg/L，且無其他引起這些異常的原因；腦脊液性病研究實驗室試驗（VDRL）或熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）陽性。

1.2 方 法

1.2.1 血清檢測 IL-6、IL-10、TNF-α檢測采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗，試劑盒購于上海明啟生物科技有限公司。采集患者靜脈血2mL于無菌負(fù)壓干燥管中，靜置待血液凝固后，以3000r/min離心5min，分離血清，轉(zhuǎn)入Eppendorf管中，置于-20℃保存?zhèn)錅y。所有細(xì)胞因子檢測操作按說明書進(jìn)行，450nm測吸光度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。

1.2.2 腦脊液檢測 260例治療失敗梅毒患者均在簽署同意書后采集腦脊液標(biāo)本。常規(guī)腰穿，用無菌試管接取7mL腦脊液，分別作腦脊液IL-6、IL-10、TNF-α、RPR、TPPA、VDRL、FTA-ABS檢查。腦脊液IL-6、IL-10、TNF-α檢測方法同血清。RPR試劑盒由上海榮盛生物技術(shù)有限公司提供；TPPA試劑盒由日本富士株式會社提供；VDRL試劑盒由美國BD公司生產(chǎn)；FTA-ABS試劑盒由愛爾蘭 Trinity Biotech PLC生產(chǎn)。檢測參照試劑說明書和操作規(guī)程進(jìn)行。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，計量資料均以（±s） 表示，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗，多組間均數(shù)比較采用方差分析。計數(shù)資料采用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比較

治療失敗組患者血清IL-6、IL-10、TNF-α水平顯著高于治療后陰轉(zhuǎn)組（P＜0.01）及健康對照組（P＜0.01）；治療后陰轉(zhuǎn)組患者血清IL-6、IL-10、TNF-α水平高于健康對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 三組患者血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比較（pg/mL）

2.2 治療失敗梅毒患者血清、腦脊液IL-6、IL-10、TNF-α水平比較 神經(jīng)梅毒組患者血清、腦脊液IL-6、IL-10、TNF-α水平顯著高于非神經(jīng)梅毒組（P＜0.01）。見表2。

3 討論

梅毒的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，可累及多個組織和器官，也可長期處于隱性狀態(tài)。近年來有較多報道梅毒患者經(jīng)正規(guī)驅(qū)梅治療后，臨床治療效果不佳甚至治療失敗者。梅毒治療失敗的原因眾多，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累、機(jī)體免疫功能異常、人免疫缺陷病毒（HIV）感染或未及時治療等有關(guān)[6]，早期未經(jīng)治療的梅毒患者，15%～40%最終可發(fā)展為神經(jīng)梅毒，神經(jīng)梅毒的早期誤診和漏診率較高，臨床表現(xiàn)形式多樣，特異性癥狀少，以至被稱為“偉大的模仿者”[7]。我們前期研究[8]也發(fā)現(xiàn)經(jīng)正規(guī)驅(qū)梅治療失敗梅毒患者神經(jīng)梅毒發(fā)生率達(dá)15.8%，因此在臨床工作中應(yīng)重視治療失敗的梅毒患者，早期發(fā)現(xiàn)，早期積極采取有效治療手段，提高治愈率。

表2 治療失敗梅毒患者血清、腦脊液IL-6、IL-10、TNF-α水平比較（pg/mL）

有關(guān)梅毒的各類研究中，臨床免疫學(xué)是研究熱點之一，但在梅毒病程中，細(xì)胞免疫效應(yīng)發(fā)生著極其復(fù)雜的變化。研究[9]表明，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫對梅毒螺旋體十分重要，而細(xì)胞因子也在其中起重要作用，細(xì)胞因子是由免疫原、絲裂原或其他因子刺激細(xì)胞所產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì)，為細(xì)胞之間相互作用的信使，在梅毒免疫中發(fā)揮重要作用。機(jī)體感染梅毒螺旋體后，細(xì)胞因子IL-2、IL-12、干擾素-r（IFN-r）、IL-6、IL-10、TNF-α等作為機(jī)體免疫應(yīng)答的重要炎癥介質(zhì)參與了機(jī)體的病理生理反應(yīng)。如IL-2有助于增強(qiáng)梅毒患者的免疫性T淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞等分化增殖，在清除梅毒螺旋體過程中發(fā)揮重要作用[10]，梅毒患者血清中IL-6、IL-8及TNF-α水平顯著高于正常對照組，這些細(xì)胞因子是機(jī)體感染梅毒后的免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要炎癥介質(zhì)，參與了機(jī)體感染梅毒螺旋體后的病理、生理反應(yīng)[11]；IL-10可促進(jìn)Th 2型細(xì)胞因子模式的發(fā)展，參與免疫應(yīng)答，IL-12水平變化與梅毒患者的免疫功能狀態(tài)及病程密切相關(guān)[12]。其中輔助T細(xì)胞1（Th 1）型細(xì)胞因子，如IL-2、IL-12、IFN-r等，可促進(jìn)機(jī)體的細(xì)胞免疫；而輔助T細(xì)胞2（Th 2）型細(xì)胞因子IL-6、IL-10、TNF-α等，可抑制機(jī)體的細(xì)胞免疫[9]。Th2型免疫應(yīng)答與TP感染的病程進(jìn)展持續(xù)性和慢性有關(guān)，同時梅毒患者的免疫，早期以Th 1型免疫應(yīng)答為主，隨著病情進(jìn)展，Th 1型免疫應(yīng)答逐漸減弱，Th 2型免疫應(yīng)答占據(jù)優(yōu)勢，最終發(fā)生Th 1/Th 2免疫應(yīng)答失衡，即由Th 1 向Th 2方向漂移，Th 2型抑制性免疫應(yīng)答增強(qiáng)的同時抑制了Th 1型免疫反應(yīng)，這種免疫抑制現(xiàn)象的出現(xiàn)在降低機(jī)體清除TP能力的同時也影響梅毒的療效與預(yù)后[13]。因此臨床細(xì)胞因子的測定對于梅毒患者免疫狀態(tài)、病情判斷有一定的價值。本研究發(fā)現(xiàn)260例治療失敗組患者血清輔助T細(xì)胞2（Th2）型細(xì)胞因子IL-6、IL-10、TNF-α水平顯著高于治療后陰轉(zhuǎn)組（P＜0.01）及健康對照組（P＜0.01）；其中神經(jīng)梅毒患者血清、腦脊液輔助T細(xì)胞2（Th2）型細(xì)胞因子水平顯著高于非神經(jīng)梅毒患者組（P＜0.01）。表明治療失敗患者細(xì)胞因子IL-6、IL-10、TNF-α參與了梅毒的發(fā)病、發(fā)展過程，隨著病程進(jìn)展細(xì)胞免疫功能受到一定抑制。早期檢測、早期發(fā)現(xiàn)，一方面能夠使臨床對梅毒患者全身或局部的機(jī)體免疫狀況有正確的了解，另一方面也可以用于指導(dǎo)臨床對患者進(jìn)行有效治療。

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（收稿：2015-11-01 修回：2015-12-10）

杭州市第三人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（張艷、吳春麗、梁麗貞、嚴(yán)永興）、皮膚科（瞿鑌、裘新民）（杭州 310009）

嚴(yán)永興，Tel：13777478172