覃軍，龔又明，鄭顯輝，鄧廣海

廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510120

嶺南特色炮天雄和傳統(tǒng)炮附片的成分比較

覃軍，龔又明，鄭顯輝，鄧廣海

廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510120

目的：比較炮附片與炮天雄有效成分和毒性成分的差異，從化學(xué)成分上闡述嶺南炮天雄物質(zhì)基礎(chǔ)，為其臨床應(yīng)用及后期研究提供參考依據(jù)。方法：采用HPLC法同時(shí)測(cè)定炮天雄和炮附片中6種單、雙酯型生物堿含量，比較兩者成分含量差異。實(shí)驗(yàn)采用Kromasil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-四氫呋喃（25∶15）、0.1 mol/L醋酸銨溶液為流動(dòng)相，采用梯度洗脫，流速：1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm，柱溫：30℃。結(jié)果：與傳統(tǒng)炮附片比較，嶺南特色炮天雄中單酯型生物堿含量較高，毒性成分雙酯型生物堿含量較低。結(jié)論：炮天雄是一種“低毒高效”嶺南特色的炮制品，具有一定的藥用價(jià)值。

炮天雄；炮附片；嶺南炮制；生物堿；含量測(cè)定；HPLC

炮天雄、炮附子均屬于毛茛科烏頭Acontum carmichaeli Debx.的子根的炮制品。其中，天雄是附子的飲片商品規(guī)格之一[1]，具有溫陽(yáng)、止痛、祛風(fēng)的功效，主要用于治療腎虧陽(yáng)虛、元陽(yáng)素虛[2]，同時(shí)是嶺南地區(qū)習(xí)用為溫陽(yáng)補(bǔ)腎的食療藥材，在嶺南、港澳，以及東南亞國(guó)家廣泛使用。與炮附片相比，炮天雄的制法雖與炮附片一樣需要砂燙，但炮天雄不用切片，并且兩者砂燙程度也不一樣，功效上，它的補(bǔ)陽(yáng)、補(bǔ)虛的保健功能較炮附子強(qiáng)[3～4]。那么兩種炮制品化學(xué)成分上是否有一定的區(qū)別，導(dǎo)致其臨床療效差別的物質(zhì)基礎(chǔ)是什么？炮天雄嶺南特色炮制品，目前關(guān)于其物質(zhì)成分和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面的研究仍然處于空白階段，多數(shù)廠家只能借用炮制工藝相似的炮附片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，難以保障其安全性。本文將對(duì)炮天雄和炮附片的物質(zhì)成分進(jìn)行研究，同時(shí)測(cè)定其有效成分和毒性成分含量，比較兩者成分差異，分析與總結(jié)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為臨床用藥提供理論指導(dǎo)，同時(shí)也為炮天雄的質(zhì)量控制提供一定參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 藥品與試劑 對(duì)照品苯甲酰新烏頭原堿(批號(hào)：111795-201102)，苯甲酰烏頭原堿(批號(hào)：111794-201102)，苯甲酰次烏頭原堿(批號(hào)：111796-201002)，新烏頭堿(批號(hào)：110799-201106)，次烏頭堿(批號(hào)：110798-201106)，烏頭堿(批號(hào)：110720-201111)均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定，純度均≥98%；炮附片、炮天雄均由廣州市藥材公司中藥飲片廠提供，經(jīng)廣東省中醫(yī)院主任中藥師林華鑒定為毛茛科烏頭Acontum carmichaeli Debx.的子根的炮制品；乙腈、四氫呋喃等試劑為色譜純(Tedia公司)，其他試劑均為分析純(廣州化學(xué)試劑廠)。

1.2 儀器與設(shè)備 Agilent 1260高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科公司)；BS110S型電子天平(賽多利斯有限公司)；HWS28型恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司)；RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)IKA)、SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵(上海一恒科技有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；以乙腈-四氫呋喃(25∶15)為流動(dòng)相A，0.1 mol/L醋酸銨溶液(每1000 mL加冰醋酸0.5 mL)為流動(dòng)相B。流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。按表1進(jìn)行梯度洗脫。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭、新烏頭原堿、烏頭原堿、次烏頭原堿等對(duì)照品適量，精密稱定，加異丙醇-二氯甲烷(1∶1)混合溶液制成每1 mL各含25 μg的混合溶液，即得。

表1 梯度洗脫比例

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約2 g，精密稱定，按照2015年版《中國(guó)藥典》附子含量測(cè)定項(xiàng)下“供試品溶液的制備”的步驟進(jìn)行提取[1]。

2.4 線性關(guān)系的考察 見(jiàn)表2。取苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭、新烏頭原堿、烏頭原堿、次烏頭原堿等對(duì)照品溶液適量，按照上述色譜條件，分別進(jìn)樣0.5μL、1 μL、2 μL、4 μL、8 μL、12 μL、20 μL，記錄對(duì)照品峰面積，以峰面積積分值Y與對(duì)照品含量X(μg)進(jìn)行回歸處理。

表2 6種生物堿對(duì)照品的回歸方程

2.5 精密度考察 精密吸取6種生物堿混合對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，按照上述的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定6種生物堿的峰面積，計(jì)算其RSD%值。結(jié)果苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿的RSD分別為0.62%，1.18%，0.78%，0.82%，0.66%，0.81%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察 取同一批炮附片供試品溶液，于0，2，4，6，12，24 h分別進(jìn)樣10 μL，按照上述色譜條件下，測(cè)定6種生物堿的峰面積，并計(jì)算其RSD%值。結(jié)果苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿的RSD分別為1.23%，0.83%，0.94%，1.05%，1.17%，1.22%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性考察 取同一批炮附片的樣品6份，分別按供試品制備方法進(jìn)行提取，采用上述的色譜條件測(cè)定6種生物堿的峰面積，并以峰面積積分值計(jì)算其RSD%值。結(jié)果苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿的RSD分別為1.65%，0.78%， 2.06%，1.37%，1.22%，1.07%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取己知含量炮附片樣品約1.0 g，共6份，精密稱定，精密加入6種生物堿對(duì)照品適量，按照供試品制備方法進(jìn)行提取，采用上述的色譜條件測(cè)定6種生物堿的含量，并計(jì)算其平均回收率和RSD%值。結(jié)果苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿的均回收率分別為 101.86%，99.59%，97.68%，98.22%，97.31%，96.74%，其RSD%分別為2.03%，1.80%，1.91%，1.66%，2.07%，2.14%。

2.9 樣品含量測(cè)定 見(jiàn)表3，圖1。取12個(gè)批次的炮天雄、炮附片樣品(過(guò)三號(hào)篩)約2 g，精密稱定，按照制備供試品溶液制備方法進(jìn)行提取，采用上述的色譜條件，測(cè)定6種生物堿的峰面積，并計(jì)算其含量。表3結(jié)果顯示，炮附片總單酯型生物堿含量在0.022 9%～0.081 5%，總雙酯型生物堿含量在0.007 8%～0.012 2%，炮天雄總單酯型生物堿含量在0.084 3%～0.104 2%，總雙酯型生物堿含量在0.004 5%～0.008 7%。結(jié)果表明，與傳統(tǒng)炮附片比較，嶺南特色炮天雄中單酯型生物堿含量較高，毒性成分雙酯型生物堿含量較低。

表3 炮附片和炮天雄6種生物堿含量結(jié)果 (%，n=3)

圖1 炮天雄和炮附片6種生物堿HPLC圖

3 討論

炮附片為附子常見(jiàn)的炮制品，中醫(yī)認(rèn)為其經(jīng)過(guò)砂燙后能過(guò)增強(qiáng)補(bǔ)命門之火力，功效以溫腎暖脾為主[5]。炮天雄作為嶺南特色炮制品，同樣具有補(bǔ)火助陽(yáng)的作用，臨床研究發(fā)現(xiàn)其補(bǔ)陽(yáng)、補(bǔ)虛的保健功效甚至強(qiáng)于炮附片。研究發(fā)現(xiàn)炮天雄的水煎劑對(duì)陽(yáng)虛證小鼠的耐疲勞能力有提高作用，對(duì)腎虛證大鼠免疫有促進(jìn)作用，延長(zhǎng)其低溫游泳的存活時(shí)間，在一定程度上能說(shuō)明炮天雄具有補(bǔ)腎助陽(yáng)功效，與《傷寒論》和《金匱要略》里記載的“補(bǔ)命門、強(qiáng)腎氣”理論相吻合，與目前港、澳中醫(yī)流派對(duì)炮天雄的應(yīng)用相符[6～7]。

從炮制工藝上分析，兩者有一定的區(qū)別，炮附片為黑順片、白附片經(jīng)砂燙炮制而成，而炮天雄不用切片，且砂燙程度也不一樣。從化學(xué)成分上分析，附子及其炮制品均含有生物堿類成分，包括水溶性生物堿和脂溶性生物堿，其中雙酯型生物堿是其主要毒性成分，經(jīng)炮制后轉(zhuǎn)化為毒性較低的單酯或胺醇型生物堿。那么兩種炮制品化學(xué)成分上是否有明顯區(qū)別，本文采用現(xiàn)代技術(shù)，測(cè)定兩者不同批次6種單、雙酯型生物堿的含量，從化學(xué)成分上闡述物質(zhì)基礎(chǔ)，為其臨床應(yīng)用提供一定的參考依據(jù)。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，與炮附片比較，市場(chǎng)上炮天雄以單酯型生物堿含量較高，毒性成分雙酯型生物堿含量偏低，說(shuō)明炮天雄是一種“低毒高效”的炮制品，極具嶺南炮制特色。炮天雄中有效成分含量較高可能有兩方面原因：第一，附子一般選用個(gè)頭較大，質(zhì)量較好的附子為原料進(jìn)行炮制，導(dǎo)致其中生物堿成分較高；第二，附子不需要經(jīng)過(guò)切片，直接整個(gè)去皮后砂燙，減少了軟化切片等環(huán)節(jié)，大大降低生物堿的流失。2015年版《中國(guó)藥典》中收錄了炮附片，為附片經(jīng)砂燙法制成，在砂燙過(guò)程中增強(qiáng)了補(bǔ)火助陽(yáng)作用，但其有效成分也容易進(jìn)一步受到破壞，其炮制原理還有待進(jìn)一步研究。而嶺南特色炮天雄的原理就是盡可能避免有效成分的損失，同時(shí)在炮制過(guò)程中增強(qiáng)了補(bǔ)火助陽(yáng)作用。

炮天雄是嶺南特色的炮制品種，在國(guó)內(nèi)外享譽(yù)盛名，在嶺南、港澳，以及東南亞國(guó)家廣泛使用。同時(shí)作為一種食用品和藥膳，甚至可以用開(kāi)水浸泡作茶飲用。其原因可能是炮天雄雖然為毒性中藥附子炮制品，但經(jīng)過(guò)炮制后其毒性成分非常低，能夠保證其安全性，這與本實(shí)驗(yàn)含量測(cè)定的結(jié)果一致。同時(shí)有學(xué)者研究表明，炮天雄炮制后增加了單酯型生物堿含量，增強(qiáng)了其治療脾陽(yáng)虛癥和腎陽(yáng)虛癥的成分[8]。從地理環(huán)境分析，嶺南地區(qū)較“濕熱”，容易引起以脾胃虛弱為主征的陽(yáng)虛體質(zhì)[9]，因此，炮天雄更符合嶺南地區(qū)使用要求和對(duì)癥治療。同時(shí)，炮天雄具有藥膳同源的功用，具有巨大的市場(chǎng)價(jià)值，完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有利于進(jìn)一步規(guī)范炮天雄質(zhì)量和開(kāi)發(fā)其市場(chǎng)價(jià)值。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].1部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：192.

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（責(zé)任編輯：馮天保，鄭鋒玲）

Component Comparison Between Processed Tianxiong of Lingnan Characteristic and Traditional Processed Aconite Tablets

QIN Jun，GONG Youming，ZHENG Xianhui，DENG Guanghai

Objective：To compare the difference between effective components and toxic components of processed aconite tablets and processed Tianxiong，and to illustrate the material basis of Lingnan processed Tianxiong in terms of chemical components in order to provide reference for clinical application and later research.Methods：Applied High Performance Liquid Chromatography(HPLC)to determine the six kinds of moto and double ester-alkaloids content in processed Tianxiong and processed aconite tablets at the same time，and compared the difference between the components. The experiment applied Kromasil C18column(250 mm×4.6 mm，5μm)and used acetonitrile-tetrahydrofuran(25∶1500)，0.1 mol/L ammonium acetic acid solution as mobile phase.Gradient elution was performed.Velocity：1 mL/min；determination of wavelength：235 m；column temperature：30℃.Results：Compared with traditional processed aconite tablets，the moto ester-alkaloids content in Tianxiong of Lingnan characteristic was higher，while the double ester-alkaloids of toxic component in Tianxiong of Lingnan characteristic was lower.Conclusion：Processed Tianxiong is a kind of“l(fā)ess toxic and moreeffective”processed product of Lingnan characteristic，containing certain medical value.

Processed Tianxiong；Processed aconite tablets；Processed by Lingan method；Alkaloid；Determination of content；High Performance Liquid Chromatography(HPLC)

R284

A

0256-7415（2016）12-0220-04

10.13457/j.cnki.jncm.2016.12.092

2016-07-12

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2016A040403104）

覃軍（1976-），男，副主任中藥師，研究方向：中藥飲片質(zhì)量管理與控制。

鄧廣海，E-mail：handsomehai@126.com。