黃旦，劉健，忻凌，萬磊，宋倩，郭錦晨，周巧

1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230031

159例強(qiáng)直性脊柱炎患者SOD相關(guān)性及關(guān)聯(lián)規(guī)則挖掘研究

黃旦1，劉健2，忻凌2，萬磊2，宋倩1，郭錦晨1，周巧1

1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230031

目的：基于數(shù)據(jù)挖掘的方法研究分析強(qiáng)直性脊柱炎患者超氧化物歧化酶（SOD）與免疫炎癥及脂代謝指標(biāo)關(guān)系及與中醫(yī)藥關(guān)聯(lián)分析。方法：整理安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕科2012年6月—2015年6月強(qiáng)直性脊柱炎住院患者的病歷資料。觀察患者SOD的變化，并分析其與免疫炎癥及脂代謝指標(biāo)的相關(guān)性，并采用SPSS Clementine 12.0軟件Aprior模塊分析中藥與SOD指標(biāo)變化的關(guān)系。結(jié)果：共有強(qiáng)直性脊柱炎患者520例，符合標(biāo)準(zhǔn)159例，相關(guān)性分析示：SOD與血沉（ESR）、超敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、免疫球蛋白M（IgM）呈負(fù)相關(guān)，與總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）呈正相關(guān)（P＜0.05，P＜0.01）。與其他指標(biāo)無相關(guān)性（P＞0.05）。在最小支持度為10%，最小置信度為70%下：與SOD指標(biāo)關(guān)聯(lián)度較高的前十位藥對中，與健脾祛濕藥配伍有6對，且關(guān)聯(lián)度較高；與西藥美洛昔康、沙利度胺相比較，中藥內(nèi)服及內(nèi)外合治與SOD關(guān)聯(lián)度較高。結(jié)論：強(qiáng)直性脊柱炎患者血清SOD水平與免疫炎癥及脂代謝指標(biāo)存在相關(guān)性，其表達(dá)可能參與了強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病。健脾祛濕藥與SOD關(guān)聯(lián)度較高，其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

強(qiáng)直性脊柱炎；超氧化物歧化酶（SOD）；健脾祛濕藥；免疫炎癥；關(guān)聯(lián)分析

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是以肌腱、韌帶附著點(diǎn)炎癥為特征性病理變化，主要累及骶髂、脊柱和四肢關(guān)節(jié)的慢性、進(jìn)行性疾病，可引起纖維性和骨性強(qiáng)直及心肺功能的下降，其病因尚未明確[1]。近年來研究表明，AS的發(fā)生與發(fā)展可能與免疫炎癥、氧化應(yīng)激及脂代謝紊亂有關(guān)[2]。AS患者處于氧化應(yīng)激失衡狀態(tài)，活性氧(ROS)和活性氮(RNS)是機(jī)體組織在代謝過程中產(chǎn)生的有害自由基，可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激；超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)是一類重要的抗氧化酶，能清除生物體內(nèi)超氧陰離子等自由基發(fā)生歧化反應(yīng)。本團(tuán)隊(duì)前期研究表明，63.33%AS患者出現(xiàn)SOD水平的下降，并與免疫炎癥反應(yīng)有關(guān)，且AS患者出現(xiàn)不同程度的心肺功能降低，其機(jī)制與Keap1、Nrf2表達(dá)的上升，致使Keap1-Nrf2-ARE信號通路活化，而使AS患者抗氧化能力下降，細(xì)胞因子失衡及炎性指標(biāo)上升，免疫復(fù)合物增多而引起AS發(fā)病的同時使心肺功能下降[3～5]。本研究通過探討AS患者SOD與免疫炎癥及脂代謝指標(biāo)的關(guān)系，通過分析中藥與SOD變化的關(guān)聯(lián)度初步探討中醫(yī)藥治療AS的臨床應(yīng)用，為AS的治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照美國風(fēng)濕病協(xié)會(ACR)1984年修訂的AS紐約診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]或2009年3月國際強(qiáng)直性脊柱炎工作小組(ASAS)發(fā)布的中軸型SPA分類標(biāo)準(zhǔn)[7]。

1.2 病例選擇 符合AS診斷標(biāo)準(zhǔn)；治療前后有SOD、免疫炎癥及脂代謝相關(guān)檢查報告；住院期間使用中藥內(nèi)服和(或)外用治療。排除不符合AS診斷標(biāo)準(zhǔn)；住院期間未使用中藥內(nèi)服和(或)外用治療；治療前和(或)治療后無SOD、免疫炎癥及脂代謝相關(guān)檢查報告。

1.3 一般資料 應(yīng)用自主研發(fā)的數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)收集安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕科2012年6月—2015年6月濕熱型AS住院患者的病歷資料。AS病例患者共計(jì)520例，符合標(biāo)準(zhǔn)的有159例，選取下列指標(biāo)：血沉(ESR)、超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，指標(biāo)間相關(guān)性采用Spearman分析。

1.5 數(shù)據(jù)挖掘 用藥后SOD上升取值定為1，不變或下降定為0；(注：治療指標(biāo)變化有利于減輕疾病時取值為1，反之，不利于疾病發(fā)展取值為0)。治療中藥“有”取值定為1，“無”取值定為0。包括補(bǔ)充缺失數(shù)據(jù)，剔除錯誤數(shù)據(jù)。采用SPSS Clementine 12.0中的Aprior模塊分析為挖掘工具來探討中藥及外用藥與SOD的關(guān)系。關(guān)聯(lián)規(guī)則最小支持度設(shè)為10%，置信度設(shè)為70%。

1.6 倫理要求 本試驗(yàn)研究方案經(jīng)研究負(fù)責(zé)單位安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)后實(shí)施。

2 研究結(jié)果

2.1 AS患者血清SOD水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相關(guān)性分析 見表1。相關(guān)性分析示SOD與ESR、hs-CRP、IgM呈負(fù)相關(guān)，與TC、TG、LDL-C呈正相關(guān)(P＜0.05，P＜0.01)。與其他指標(biāo)無相關(guān)性。

表1 AS患者血清SOD水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相關(guān)性分析

2.2 中藥內(nèi)服與SOD的關(guān)聯(lián)分析 見表2。設(shè)定最小支持度為10%，最小置信持度為70%。經(jīng)Aprior模塊分析，列出與SOD指標(biāo)關(guān)聯(lián)度較高的前十位藥對，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與健脾祛濕藥配伍有6對，且關(guān)聯(lián)度較高。

表2 中藥內(nèi)服與SOD的關(guān)聯(lián)分析 %

2.3 內(nèi)外合治與SOD的關(guān)聯(lián)分析 見表3。在最小支持度為10%，最小置信度為70%下：經(jīng)Aprior模塊分析，內(nèi)外合治與SOD的置信度86.05%，支持度66.15%，列出與指標(biāo)置信度、支持度較高的外用藥進(jìn)行分析。其中芙蓉膏關(guān)聯(lián)于SOD指標(biāo)上升(置信度77.28%，支持度13.85%)，消瘀接骨散組合關(guān)聯(lián)于SOD指標(biāo)上升(置信度83.33%，支持度18.46%)。

表3 內(nèi)外合治與SOD的關(guān)聯(lián)分析 %

2.4 西藥口服與SOD的關(guān)聯(lián)分析 見表4。經(jīng)Aprior模塊分析，西藥口服在最小支持度為10%，最小置信度為70%下。

表4 西藥口服與SOD的關(guān)聯(lián)分析 %

3 討論

氧化應(yīng)激是指機(jī)體在應(yīng)激條件下，體內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，ROS和氮自由基(RNS)生成過多，體內(nèi)氧化物清除不足，造成組織損傷[8]。SOD是一種重要抗氧化劑，是清除ROS的關(guān)鍵酶，對氧化與抗氧化平衡起著關(guān)鍵作用，該酶能清除脂質(zhì)過氧化物，對抗氧化應(yīng)激反應(yīng)，其升高可減輕氧自由基對組織細(xì)胞的過氧化損傷，具有明顯的抗炎癥、抗感染和抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的效應(yīng)，并可促進(jìn)受損細(xì)胞的康復(fù)，其高低可反映內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化損傷程度[9～10]。

本研究發(fā)現(xiàn)在159例AS患者中，血清SOD水平與ESR、hs-CRP、IgM呈負(fù)相關(guān)，與TC、TG、LDL-C呈正相關(guān)(P＜0.05，P＜0.01)。說明疾病的活動、免疫炎癥及脂代謝紊亂均不同程度地參與了強(qiáng)直性脊柱炎患者發(fā)病，而SOD水平下降，患者機(jī)體的抗氧化能力的降低可能導(dǎo)致了患者癥狀體征的加重。本團(tuán)隊(duì)在前期研究中發(fā)現(xiàn)，AS患者ESR、CRP、TNF-α、IL-1β值顯著升高，IL-4、IL-10值顯著降低(P＜0.01，P＜0.05)，AS發(fā)病可能與外周血B、T淋巴細(xì)胞減少與B細(xì)胞活化增強(qiáng)，B細(xì)胞異常浸潤聚集，分泌炎性細(xì)胞因子，從而損傷機(jī)體SOD和CAT，使RNS和ROS水平升高，氧自由基大量聚集，抑制關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞基質(zhì)及Ⅱ型膠原的合成，嚴(yán)重?fù)p傷軟骨細(xì)胞的形態(tài)和功能，導(dǎo)致強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病[11]。長期脂代謝紊亂可導(dǎo)致血管細(xì)胞中超氧陰離子清除障礙，ROS生成過多，當(dāng)機(jī)體衰老或者被過量的自由基攻擊產(chǎn)生過多脂質(zhì)過氧化反應(yīng)時，SOD活性降低氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，繼而造成氧化應(yīng)激[12～13]。

強(qiáng)直性脊柱炎屬于中醫(yī)學(xué)痹證、大僂范疇。近年來，越來越多的研究表明中醫(yī)中藥在抑制AS氧化應(yīng)激狀態(tài)方面療效顯著。從表2、3、4中可以看出，與SOD指標(biāo)關(guān)聯(lián)度較高的前十位藥對，與健脾祛濕藥澤瀉、薏苡仁、陳皮配伍關(guān)聯(lián)度較高，均在90%以上，且與西藥美洛昔康、沙利度胺相比較，中藥內(nèi)服及內(nèi)外合治與SOD關(guān)聯(lián)度較高。AS發(fā)病以脾腎虧虛，邪痹經(jīng)絡(luò)為基本病機(jī)，脾為后天之本，氣血生化之源，脾在體合肌肉而主四肢，主運(yùn)化而喜燥惡濕，脾虛失于運(yùn)化，則水液內(nèi)停而產(chǎn)生水濕痰飲等病理產(chǎn)物，水濕痰飲等阻滯經(jīng)絡(luò)關(guān)節(jié)，影響氣血運(yùn)行而為瘀。水濕產(chǎn)生后，又困遏脾氣，致使脾氣不升，脾陽不振，加重脾虛。脾虛失運(yùn)，不能及時有效地清除自由基，脾虛正氣不足致抗氧化能力降低。故健脾化濕之劑的配伍應(yīng)用在治療AS中起著至關(guān)重要的作用。澤瀉甘寒，歸腎、膀胱經(jīng)，具有利水滲濕，泄熱之功。澤瀉入藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，稱其“主風(fēng)寒濕痹，乳難，消水，養(yǎng)五臟，益氣力，肥健”?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，澤瀉能增加血管內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化能力，增加SOD活性，維持細(xì)胞氧化/抗氧化狀態(tài)平衡，全面拮抗氧化型低密度脂蛋白對血管內(nèi)皮細(xì)胞造成的損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷[14]。薏苡仁甘、淡、涼，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有利水滲濕，健脾除痹之功，《神農(nóng)本草經(jīng)》謂其“主筋急拘攣，不可屈伸，風(fēng)濕痹，下氣”，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，從薏苡仁中提取的薏苡仁油減少實(shí)驗(yàn)小鼠扭體次數(shù)、縮短凝血時間，具有明顯的鎮(zhèn)痛和止血作用，提取的薏苡仁多糖可顯著增強(qiáng)小鼠SOD的活性，降低體內(nèi)氧化應(yīng)激水平[15～16]。陳皮辛、苦、溫，歸脾、肺經(jīng)，具有理氣健脾，燥濕化痰之功。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，陳皮中所含的川陳皮素能抑制MDA的生成，促使T-SOD生成，通過上調(diào)Akt和Bcl-2的表達(dá)，使Bax和caspase-3的表達(dá)得到抑制，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)[17]。內(nèi)外合治是本院風(fēng)濕科治療AS特色療法，主要以院內(nèi)制劑芙蓉膏、消瘀接骨散外敷，中藥熏蒸、離子導(dǎo)入等為主，內(nèi)外合治改善SOD的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果表明SOD參與AS的發(fā)病過程，與免疫炎癥及脂代謝相關(guān)，對病情的發(fā)展具有重要的影響作用。中藥內(nèi)服及外治與SOD關(guān)聯(lián)度較高，因此在臨床工作中應(yīng)注意通過合理用藥治療，長期控制AS患者疾病活動，降低免疫炎性反應(yīng)及改善脂代謝紊亂，提高其機(jī)體SOD水平，進(jìn)而緩解臨床癥狀并改善患者的生活質(zhì)量。

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（責(zé)任編輯：駱歡歡，李海霞）

R593.23

A

0256-7415（2016）12-0090-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.12.039

2016-08-16

國家中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科中醫(yī)痹病學(xué)建設(shè)項(xiàng)目（國中醫(yī)藥發(fā)［2009］30號）；國家臨床重點(diǎn)?？浦嗅t(yī)風(fēng)濕病科建設(shè)項(xiàng)目（財社［2013］239號）；國家自然基金青年項(xiàng)目（81403388）；安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)項(xiàng)目（1306c083035）；安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目（1604a0802085）；安徽省自然基金項(xiàng)目（1508085QH159）

黃旦（1991-），男，碩士在讀，研究方向：中醫(yī)藥防治風(fēng)濕病。

劉健，E-mail：liujianahzy@126.com。