趙嬋娟

(重慶三峽職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技系，重慶 404155)

中藥清溫消熱飲的抗炎鎮(zhèn)痛活性研究

趙嬋娟

(重慶三峽職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技系，重慶 404155)

為了研究清溫消熱飲的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，選擇清潔級(jí)昆明系小鼠144只作為試驗(yàn)對(duì)象，采用小鼠炎性腫脹、疼痛反應(yīng)模型對(duì)其進(jìn)行藥效學(xué)綜合分析，結(jié)果顯示，清溫消熱飲對(duì)小鼠的耳廓腫脹和足趾腫脹的4 h抑制率分別為23%和59.34%，與西藥對(duì)照組地塞米松治療效果無(wú)差異性(P>0.05)，與空白對(duì)照組比較差異極顯著(P<0.01)。同時(shí)，清溫消熱飲組能延長(zhǎng)小鼠疼痛反應(yīng)時(shí)間和有效減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，表現(xiàn)出與空白對(duì)照組顯著差異(P<0.01)。結(jié)果表明清溫消熱飲抗炎效果顯著，并具有良好的鎮(zhèn)痛作用，試驗(yàn)為該中藥方劑的進(jìn)一步研發(fā)提供了支持。

中藥；清溫消熱飲；抗炎；鎮(zhèn)痛

清溫消熱飲由石膏、知母、金銀花等中藥組成。方中主藥石膏透熱除煩，生津止渴，配以苦寒質(zhì)潤(rùn)之知母，清熱解毒之金銀花等輔藥，具有養(yǎng)陰生津、瀉火解毒等功效。目前，獸醫(yī)臨床上的一些多發(fā)病、常見(jiàn)病，如奶牛乳房炎、仔豬腸炎、傳染性胸膜肺炎等炎性疾病，臨床治療過(guò)程中多采用甾體類(lèi)和非甾體類(lèi)藥物進(jìn)行控制，但這兩類(lèi)藥物存在明顯的副作用如肝腎毒性、消化道損害、免疫抑制等，局限了其使用范圍。這就需要除甾體類(lèi)和非甾體類(lèi)以外的抗炎藥物。因此，尋求其它新的抗炎藥物對(duì)豐富臨床治療炎癥性疾病具有重要意義。

現(xiàn)代中藥藥理研究發(fā)現(xiàn)，中藥的活性成分如“苷類(lèi)”“生物堿類(lèi)”“黃酮類(lèi)”“萜類(lèi)”等都具有良好的抗炎作用[1]。因此，我們根據(jù)中醫(yī)“熱”證(炎癥)的病因病機(jī)，治則為“瀉火解毒、養(yǎng)陰生津”[2]，選取石膏、知母等中藥組成命名為清溫消熱飲，擬通過(guò)對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、角叉菜膠致小鼠足趾腫脹以及醋酸致小鼠扭體次數(shù)影響的試驗(yàn)，研究清溫消熱飲的抗炎及鎮(zhèn)痛活性效果及機(jī)制，以期為進(jìn)一步應(yīng)用于臨床奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康昆明系小鼠(許可證號(hào)：SCXK[渝]2012-0006)，18～22 g，雌雄各半，購(gòu)自重慶市中藥研究院試驗(yàn)動(dòng)物研究所。小鼠的飼養(yǎng)溫度環(huán)境18 ℃～25 ℃，相對(duì)濕度50 %～60 %，自由飲水采食，適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境2～3 d，開(kāi)始試驗(yàn)前禁食不禁水12 h。

1.2 中藥及制劑 清溫消熱飲方中石膏、知母、金銀花等中藥材購(gòu)于重慶市萬(wàn)州區(qū)全宏藥店，并經(jīng)重慶三峽職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技系中獸醫(yī)藥教研室老師鑒定。制劑制備：取石膏先行煎煮30 min，然后將知母、金銀花、甘草等藥混合，煎煮3次合并煎液，濃縮至500 mL。加4 %明膠攪拌至無(wú)沉淀，4 ℃靜置24 h，過(guò)濾，取濾液。加無(wú)水乙醇使含醇量分別達(dá)65 %，4 ℃靜置24 h，離心過(guò)濾，取濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，揮發(fā)乙醇至無(wú)醇味。加無(wú)水乙醇使含醇量分別達(dá)75 %、85 %后，重復(fù)上述步驟。濾液加活性炭1.5 g，45 ℃，靜置30 min，過(guò)濾，調(diào)節(jié)pH值至7.0，定容至含生藥1 g/mL，高壓滅菌，4 ℃保存?zhèn)溆肹3]。

1.3 試劑及主要儀器 地塞米松磷酸注射液，湖北天藥藥業(yè)，批號(hào)：51409222、二甲苯，成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20120204、角叉菜膠，南京奧多福尼生物科技有限公司，批號(hào)：20150724、DKQ打孔器，江蘇好奇教學(xué)儀器有限公司、游標(biāo)卡尺，上海精工、電子天平，上海精科天美教學(xué)儀器有限公司，精度為0.0001 g。

2 方法

2.1 小鼠耳廓腫脹試驗(yàn) 參照肖蓉等的方法[4-5]，選取健康小鼠30只，隨機(jī)分為3組，即清溫消熱飲組(100 mg/kg體重)、地塞米松組(50 mg/kg體重)、空白對(duì)照組(生理鹽水、等容積)，各給藥組按照0.1 mL/10 g采用灌胃給藥，1次/d，連續(xù)灌胃5 d。最后一次給藥后2 h，在實(shí)驗(yàn)小鼠右耳兩面均勻涂抹二甲苯30 μL致炎，左耳不做任何處理作為空白對(duì)照。致炎30 min后，脫頸處死小鼠，沿耳廓線剪下兩耳，采用直徑8 mm打孔器分別在兩耳相同位置取下耳片，于電子分析天平上稱(chēng)重。按以下公式計(jì)算耳廓腫脹率及耳廓腫脹抑制率：

2.2 小鼠足趾腫脹試驗(yàn)

選擇健康小鼠84只，每組28只，分組及給藥方案與試驗(yàn)方法2.1耳廓腫脹試驗(yàn)相同。進(jìn)行試驗(yàn)前測(cè)量右后足趾中央厚度，給藥2 h后，用50 μL微量注射器注射0.1 %角叉菜膠溶液在小鼠右后足趾中部皮下，然后掉轉(zhuǎn)向下注完，每只注射30 μL。并于注射完畢后0.5、1、2、3、4 h分別測(cè)定各鼠右后足趾厚度(用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠足趾中央厚度)。按以下公式計(jì)算小鼠足趾腫脹度、足趾腫脹率和足趾腫脹抑制率：

2.3 小鼠醋酸扭體反應(yīng)試驗(yàn) 選擇健康小鼠30只，分組及給藥方案與試驗(yàn)方法2.1耳廓腫脹試驗(yàn)相同。末次給藥后1 h，各鼠腹腔注射0.6 %醋酸溶液0.2 mL/只，觀察并記錄注射醋酸溶液后15 min內(nèi)各小鼠扭體次數(shù)，以扭體反應(yīng)次數(shù)為指標(biāo)，對(duì)各組進(jìn)行差異顯著性分析。2.4 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以X±S表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 清溫消熱飲對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響 二甲苯致小鼠耳廓腫脹30 min后，清溫消熱飲組炎癥反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組和地塞米松組。致炎1 h后，清溫消熱飲組小鼠耳廓腫脹度明顯降低，與空白對(duì)照組比較差異極顯著(P<0.01)，腫脹率差異顯著(P<0.05)；地塞米松組的小鼠耳廓腫脹度和耳廓腫脹率，與空白對(duì)照組比較差異顯著。經(jīng)統(tǒng)計(jì)得出耳廓腫脹抑制率，清溫消熱飲組為23.03 %，地塞米松組為27.01 %。而清溫消熱飲組與地塞米松組比較，耳廓腫脹度和腫脹率差異不顯著，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 清溫消熱飲對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

與對(duì)照組比較AP<0.01aP<0.05

3.2 清溫消熱飲對(duì)小鼠足趾腫脹的影響 0.1 %角叉菜膠注射小鼠足趾后，各組足趾厚度變化趨勢(shì)均為1、2 h時(shí)間點(diǎn)足趾厚度逐漸增加，3、4 h時(shí)間點(diǎn)足趾厚度呈降低趨勢(shì)。清溫消熱飲組在給藥后1 h后能有效降低小鼠足趾腫脹，表現(xiàn)出與對(duì)照組極顯著差異(P<0.01)，地塞米松組在給藥后0.5、1、2、3、4 h時(shí)間段，足趾腫脹程度均下降，與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。根據(jù)清溫消熱飲組和地塞米松組給藥后0.5、1、2、3、4 h的足趾腫脹抑制率結(jié)果顯示，各用藥試驗(yàn)組表現(xiàn)出明顯的腫脹抑制效果，在4 h時(shí)腫脹抑制率最高，分別為59.34 %和56.31 %，表明各給藥組均能有效抑制因?yàn)橥庠葱晕镔|(zhì)所引起的炎性腫脹，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 清溫消熱飲對(duì)角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響

與對(duì)照組比較AP<0.01aP<0.05

3.3 清溫消熱飲對(duì)醋酸致小鼠扭體次數(shù)及疼痛反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間的影響 清溫消熱飲和地塞米松組扭體次數(shù)均低于空白對(duì)照組。在第一次扭體出現(xiàn)時(shí)間上，清溫消熱飲組明顯比地塞米松組表現(xiàn)滯后，疼痛時(shí)間出現(xiàn)較晚。地塞米松組在有效減少由醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)和延緩疼痛反應(yīng)時(shí)間上，與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)，清溫消熱飲能顯著降低小鼠扭體次數(shù)和延長(zhǎng)疼痛反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間，與空白對(duì)照組差異顯著(P<0.01)，表明清溫消熱飲對(duì)化學(xué)刺激引起的疼痛有著明顯的抑制作用，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 清溫消熱飲對(duì)醋酸致小鼠扭體次數(shù)的影響

注:與空白組比較AP<0.01aP<0.05

4 討論與小結(jié)

炎癥反應(yīng)以紅、腫、熱、痛、機(jī)能障礙為其臨床特征，局部血管反應(yīng)為其損傷過(guò)程中的的重要環(huán)節(jié)。中醫(yī)理論認(rèn)為，炎癥的臨床癥狀大多以熱毒熾盛、瘀血阻滯等實(shí)熱為主，中醫(yī)臨床治療以清熱解毒、瀉火滋陰、利濕及活血化瘀[2]。本試驗(yàn)抗炎中藥方劑清溫消熱飲以養(yǎng)陰生津、瀉火解毒等法進(jìn)行組方，方中主用石膏長(zhǎng)于透熱除煩而生津止渴；知母苦寒質(zhì)潤(rùn)，苦寒瀉火，潤(rùn)以滋燥；辛甘、苦寒搭配，相須為用，除熱而不傷正，清熱不留邪；金銀花清熱解毒、輕揚(yáng)宣泄、引營(yíng)分之邪氣外達(dá)氣分而解；配伍涼血滋陰藥，既甘寒養(yǎng)陰保津，又可助君藥清營(yíng)涼血解毒，祛邪扶正兼顧；甘草調(diào)和?！八幱袀€(gè)性之特長(zhǎng)，方有合群之妙用”，方中諸藥調(diào)和，體現(xiàn)“透熱轉(zhuǎn)氣”四字，清熱同時(shí)不忘養(yǎng)陰，兼顧護(hù)陰之功。

現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，生石膏主要成分為含水硫酸鹽，周永學(xué)[6]等試驗(yàn)證明石膏具有抗炎、解熱的作用。知母為百合科植物，其化學(xué)成分主要有皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、雙苯吡酮類(lèi)等多種成分，一些試驗(yàn)研究證明知母具有抗炎活性及抑制炎癥因子的生成等作用[7-9]。金銀花主要成分為綠原酸、異綠原酸、黃酮類(lèi)化合物等，具有較強(qiáng)的抗病毒、抗炎抗菌活性和解熱作用。Tac等[10]采用小鼠足趾腫脹模型對(duì)金銀花水提物進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)金銀花水提物能明顯改善小鼠足趾腫脹程度和血管通透性。雷玲、宋建華、謝新華等[11-13]則通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，金銀花不同濃度劑量組均有不同程度的解熱、抗炎作用,有防止體溫升高和消除炎癥的作用,其中尤以高劑量組最為明顯?，F(xiàn)代藥理研究證明方中所用石膏、知母、金銀花等藥從單方來(lái)說(shuō)皆具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛效果。清溫消熱飲方遵循中醫(yī)方劑的“君臣佐使”的配伍原則以及整體觀念、辨證論治的理論基礎(chǔ)[14]，有效融合各藥特長(zhǎng)，綜合表現(xiàn)抗炎、鎮(zhèn)痛、活血祛瘀作用。

本試驗(yàn)通過(guò)耳廓腫脹和足趾腫脹兩種抗炎試驗(yàn)?zāi)Ｐ秃痛姿嶂滦∈笈んw的鎮(zhèn)痛試驗(yàn)來(lái)研究清溫消熱飲的抗炎、鎮(zhèn)痛效果。結(jié)果顯示，清溫消熱飲有效抑制耳廓和足趾腫脹、延緩足趾腫脹出現(xiàn)時(shí)間。在整體效果評(píng)價(jià)中，清溫消熱飲與地塞米松組的抗炎效果無(wú)顯著差異。同時(shí)，試驗(yàn)中藥復(fù)方制劑在對(duì)炎性腫脹和扭體疼痛反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間上表現(xiàn)出明顯的延遲性，進(jìn)一步說(shuō)明了對(duì)炎性滲出的抑制效果。因此，在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，探尋安全、有效、毒副作用小、適用范圍廣的抗炎解熱方劑，對(duì)臨床治療炎癥性疾病具有重要意義。

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(編輯：陳希)

Study on Anti-Inflammatory and Analgesic Activities of Qingwen Xiaore Yin in Mice

ZHAO Chan-juan

(Departmentofanimalscienceandtechnology，Chongqingthreegorgespolytechniccollege，Chongqing404155,China)

Experimental researchs were aimed at studying the the anti-inflammatory and analgesic activities of the traditional Chinese drug prescription Qingwen Xiaore Yin. 144 clean mice of Kunming were used experimental subject for inflammation models.Auricle swelling induced by dimethylbenzene and toes swelling caused by carrageenan were used to investigate the anti-inflammatory effect and acetic acid writhing test was made to observe its analgestic effect.The results showed that compared with blank control group ,traditional Chinese drug prescription Qingwen Xiaore Yin can significantly reduce the degree of ear and toe swelling (P<0.01)and the inhibit ratio respectively were 23% and 59.34% at 4 h,which compared with Western Medicine group hexadecadrol treatment, effect was no difference (P> 0.05).Meanwhile,compared with the control group , Qingwen Xiaore Yin could significantly prolong pain reaction time and reduce pain writhing reaction times(P<0.01).Conclusions can be drawn that traditional Chinese drug prescription Qingwen Xiaore Yin has obvious an anti-inflammatory and analgesic activities.

traditional Chinese medicin; Qingwen Xiaore Yin; anti-inflammation ; analgesia

重慶市市教委科技項(xiàng)目(KJ1503408)，萬(wàn)州區(qū)區(qū)科委科技項(xiàng)目(201501023)

趙嬋娟，碩士，講師，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，從事中獸醫(yī)學(xué)及動(dòng)物藥學(xué)臨床研究。E-mail：zhaochanjuan@qq.com

2016-01-10

A

1002-1280 (2016) 04-0041-04

S853.7