王玉坤，馮將，魏玉好，胡冰野，楊夜陽，姜玲玲，周思旋2,，王魯

(1.貴州大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院，貴陽 550025；2. 貴州省生化工程中心，貴陽 550025；3. 貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴陽 550005)

止痢散及其拆方對胃腸運動的影響

王玉坤1,2，馮將1,2，魏玉好1,2，胡冰野1,2，楊夜陽1,2，姜玲玲3，周思旋2,3，王魯2*

(1.貴州大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院，貴陽 550025；2. 貴州省生化工程中心，貴陽 550025；3. 貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴陽 550005)

為了研究家畜新獸藥止痢散及其拆方中多葉勾兒茶、地榆和烏藥組方對胃腸運動的影響，評價家畜新獸藥止痢散及其拆方的抗腹瀉作用并初步探索其抗腹瀉的作用機制，采用動物模型觀察止痢散及其多葉勾兒茶、地榆和烏藥組方的抗腹瀉效果，對正常或新斯的明致胃腸痙攣小鼠腸推進(jìn)、胃殘留率的影響，對家兔離體回腸平滑肌收縮活動的影響。結(jié)果表明，止痢散及多地組、多地烏組都可極顯著減少小鼠腹瀉次數(shù)(P<0.01)；同時可顯著減少正常小鼠腸推進(jìn)率和胃排空率(P<0.01)；但不能顯著減少新斯的明致胃腸痙攣模型小鼠腸推進(jìn)率和胃排空率(P>0.05)。止痢散及多地組、多地烏組都可顯著減小家兔離體回腸平滑肌收縮張力的變化(P<0.01)。綜上所述，止痢散及其拆方的抗腹瀉作用是與其抑制腸推進(jìn)和胃排空，減小腸平滑肌收縮張力有關(guān)，但都不能對抗痙攣性胃腸運動，止痢散的這一作用與方劑中的多葉勾兒茶、地榆和烏藥關(guān)系密切，這為止痢散的組方和在臨床上的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了數(shù)據(jù)參考。

止痢散；拆方；腸推進(jìn)；胃殘留率

家畜止痢散是以多葉勾兒茶為主要組成輔以地榆、烏藥等中草藥組合的新復(fù)方中藥制劑。多葉勾兒茶作為傳統(tǒng)中藥，具有清肺化痰功效，現(xiàn)代藥理研究表明其具有保肝、抑菌、止咳平喘、抑制酶活性等多種作用[1]。地榆作為傳統(tǒng)中藥，其味苦酸，性寒，入肝、大腸經(jīng)[2]，藥理作用主要有止血、止吐、抗炎、抑菌、抗實驗性腹瀉[3]和對離體兔腸，低濃度使收縮減弱，高濃度則使收縮加強，甚至呈痙攣狀態(tài)[2]等。烏藥作為傳統(tǒng)中藥，其味辛帶微苦，性溫，藥理作用主要有抗炎鎮(zhèn)痛、促進(jìn)胃腸動力、緩解胃腸痙攣和抑制潰瘍等[4]。前期研究表明家畜新獸藥止痢散具有明顯的抑菌效果且抗菌成分較穩(wěn)定，不易被熱、酸、堿等所破壞。對仔豬腹瀉、牛羊腹瀉具有較好的治療效果[5]，具有抗腹瀉的作用與其抑制胃腸運動有關(guān)，但不能對抗痙攣的胃腸運動[6]。本文進(jìn)一步觀察了止痢散及多葉勾兒茶、地榆和烏藥組方對在體正常及胃腸痙攣小鼠胃排空、腸推進(jìn)的影響和對家兔離體回腸平滑肌收縮活動的影響，以期評價多葉勾兒茶、地榆和烏藥對止痢散的抗腹瀉貢獻(xiàn)，為多葉勾兒茶在抗腹瀉方面的研究填補了數(shù)據(jù)，同時為止痢散的組方和在臨床上的進(jìn)一步開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級昆明小白鼠，體重20±2 g，購自解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心(動物許可證號：SCXK(渝)2012-0003)，在貴州大學(xué)貴州省生化工程中心SPF級動物實驗室(動物使用許可證號：SYXK(黔) 2013-0001) 飼養(yǎng)，新西蘭大耳兔，體重2.5～3.0 kg，貴陽醫(yī)學(xué)院，試驗過程中對動物的處理方法符合中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見(2006)》的規(guī)定。

1.2 藥品與試劑 止痢散、多葉勾兒茶、地榆和烏藥均由貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供；番瀉葉購于貴陽市同濟(jì)堂藥店，鹽酸哌洛丁胺膠囊(國藥準(zhǔn)字H10910085，由西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，批號為141111266)；甲硫酸新斯的明注射液(國藥準(zhǔn)字H31022770，由上海信誼金朱藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為080723)；毛果蕓香堿注射液(國藥準(zhǔn)字H12021239，由天津金耀藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為1407111)。

1.3 儀器 數(shù)顯恒溫水浴鍋(型號：HH-2，金壇市城西崢嶸實驗儀器廠)；多功能恒溫離體腸管及平滑肌實驗槽(型號：PHJ-1，成都儀器廠)；電子天平(型號：HZT-A100，美國康州HZ電子科技有限公司)；BL-420E生物機能實驗系統(tǒng)(型號：BM6240BD，成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 止痢散、多地和多地烏對番瀉葉引起小鼠腹瀉的影響 參照文獻(xiàn)[7]方法制備生藥濃度1 g/mL番瀉葉煎液。將120只小鼠隨機分為6組，每組20只(雌雄各半)，設(shè)空白組、模型組、陽性藥物組、止痢散組、多地組(多葉勾兒茶和地榆配藥前搖勻，按照2∶1的體積比配成)和多地烏組(多葉勾兒茶、地榆和烏藥配藥前搖勻，按照10∶5∶2的體積比配成)。除空白組給予0.3 mL生理鹽水灌胃外，各組均以番瀉葉生藥0.3 mL灌胃。0.5 h后，止痢散組予止痢散0.4 g/kg(體質(zhì)量)灌胃0.4 mL，多地組、多地烏組和空白對照組分別予等體積多地、多地烏、生理鹽水灌胃，陽性藥物組予鹽酸哌洛丁胺膠囊32 mg/kg(體質(zhì)量)灌胃(按人的用量換算小鼠的用量)0.4 mL。參考文獻(xiàn)[8]，小鼠單籠飼養(yǎng)，籠下鋪置濾紙，觀察4 h，每次拉稀都將換紙一次，統(tǒng)計小鼠的腹瀉次數(shù)。

2.2 止痢散、多地和多地烏對正常小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 將100只小鼠隨機分為5組，每組20只(雌雄各半)，設(shè)空白組、陽性藥物組、止痢散組、多地組和多地烏組。止痢散組予止痢散0.4 g/kg(體質(zhì)量)灌胃0.4 mL，多地組、多地烏組和空白組分別予等容量多地、多地烏、生理鹽水灌胃，陽性藥物組予鹽酸哌洛丁胺膠囊32 mg/kg(體質(zhì)量)灌胃0.4 mL，1次/d，連續(xù)5 d，末次給藥前禁食18～24 h，禁食期間自由飲水，末次給藥 40 min后實驗各組予40 mg/kg(體質(zhì)量)炭末糊[9](羧甲基纖維素10 g，淀粉8 g，葡萄糖8 g，奶粉16 g，碳末 2 g拌勻，加蒸餾水300 mL成糊)。灌胃20 min后脫頸處死小鼠，量取幽門括約肌至炭末糊最前端和盲腸的距離。計算小腸推進(jìn)率(%)=(炭末營養(yǎng)固體糊推進(jìn)距離/幽門至盲腸的距離)×100 %[10]；再自幽門括約肌處取出各組小鼠的胃，濾紙拭干稱重，沿大彎側(cè)剪開，將胃內(nèi)殘留物充分洗凈，濾紙再次拭干稱重。計算胃殘留率(%)=[(胃全重-胃凈重)/半固體營養(yǎng)糊]×100 %[11]。2.3 止痢散、多地和多地烏對胃腸痙攣模型小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 將120只小鼠隨機分為6組，每組20只(雌雄各半)，設(shè)空白組、模型組、陽性藥物組、止痢散組、多地組和多地烏組?？瞻捉M和模型組予等容量生理鹽水灌胃，止痢散組、多地組、多地烏組和陽性藥物組及實驗各組炭末糊的給藥方法同 2.2。末次給藥20 min后，空白組小鼠皮下注射生理鹽水0.2 mg/kg(體質(zhì)量)，其余各組小鼠皮下注射甲硫酸新斯的明注射液0.2 mg/kg(按人的用量換算小鼠的用量)，20 min后炭末糊灌胃，然后20 min后脫頸處死小鼠，檢測指標(biāo)同2.2。

2.4 止痢散、多地和多地烏對家兔離體回腸平滑肌收縮活動的影響 家兔試驗前禁食24 h，期間自由飲水，猛擊后腦致死后立即解剖，剪取回腸并將其分剪成2.5～3 cm的腸段，然后將其置于38 ℃臺氏液中除去腸系膜及內(nèi)容物并存放至新鮮臺氏液中備用。保持浴槽內(nèi)溫度38±0.5 ℃并調(diào)節(jié)供氧閥為80～100個氣泡/min。調(diào)試張力換能器及生物信號采集系統(tǒng)，使其正常采集信號。取一段腸管對角線分別穿線，其一端與張力換能器相連，另一端固定在盛有新鮮臺氏液的浴槽內(nèi)，調(diào)節(jié)線的松緊度，穩(wěn)3～5 min后，記錄一段正常曲線，然后依次加入毛果蕓香堿、陽性組、止痢散、多地、多地烏，每次換藥后用臺氏液沖洗標(biāo)本3～5次[12]。

3 結(jié)果

3.1 止痢散、多地和多地烏對番瀉葉引起小鼠腹瀉的影響 結(jié)果如表1所示，在4 h內(nèi)，與模型組相比，陽性藥物組小鼠分別在1、2、3、4、1～4 h的腹瀉次數(shù)差異顯著或極顯著減少(P<0.05，P<0.01)；止痢散組小鼠分別在3、1～4 h的腹瀉次數(shù)差異極顯著減少(P<0.01)，多地組與多地烏組小鼠在1～4 h的腹瀉次數(shù)差異極顯著減少(P<0.01)，另外多地組小鼠3 h的腹瀉次數(shù)差異極顯著減少(P<0.01)。與陽性組相比，止痢散組、多地組、多地烏組小鼠分別在1、2、4、1～4 h的腹瀉次數(shù)差異顯著或極顯著增加(P<0.05，P<0.01)。

表1 止痢散、多地和多地烏對番瀉葉引起的小鼠腹瀉的影響±SE)

*，** 分別表示與模型對照組比較P<0.05，P<0.01；#，## 分別表示與同陽性組比較P<0.05，P<0.01；△，△△ 表示與空白組比較P<0.05，P<0.01。

3.2 止痢散、多地和多地烏對正常小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 結(jié)果如表2所示，與空白組相比，陽性藥物組、止痢散、多地和多地烏各組小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著增加(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著減少(P<0.01)。與陽性組相比，止痢散、多地和多地烏各組小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著減少(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著增加(P<0.01)。止痢散、多地組、多地烏三組相比較，多地烏組可以較好的增加胃殘留率，而多地組可以更好的減少腸推進(jìn)率。

表2 止痢散、多地和多地烏對正常和胃腸痙攣小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響±SE)

*，** 分別表示與模型對照組比較P<0.05，P<0.01；#，## 分別表示與同陽性組比較P<0.05，P<0.01；△，△△ 表示與空白比較P<0.05，P<0.01。

3.3 止痢散、多地和多地烏對胃腸痙攣小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 結(jié)果如表2所示，與空白組比較，模型組小鼠炭末糊的胃殘留率有所減少，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，腸推進(jìn)率顯著增大(P<0.05)；與模型組比較，陽性藥物組的小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著增大(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著減小(P<0.01)；止痢散、多地和多地烏組小鼠腸推進(jìn)和胃排空率都有抑制趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與陽性組相比，止痢散、多地和多地烏組小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著減少(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著增加(P<0.01)。止痢散、多地組、多地烏三組相比較，多地組可以較好的增加胃殘留率，減少腸推進(jìn)率。

3.4 止痢散、多地和多地烏對家兔離體回腸平滑肌收縮活動的影響 如表3所示，各組之間的收縮頻率差異不顯著(P>0.05)；與正常組比較，除毛果蕓香堿組張力收縮變化極顯著增大(P<0.01)外，其余各組張力收縮變化極顯著減小(P<0.01)。與陽性組比較，各藥物組張力收縮變化極顯著增大(P<0.01)。與毛果蕓香堿組比較，各藥物組張力收縮變化極顯著減小(P<0.01)。

表3 止痢散、多地和多地烏對家兔離體回腸平滑肌收縮活動的影響

*，** 分別表示與毛果蕓香堿組比較P<0.05，P<0.01；#，## 分別表示與同陽性組比較P<0.05，P<0.01；△，△△ 表示與正常組比較P<0.05，P<0.01。

4 討論

本文采用番瀉葉致小鼠腹瀉試驗來評價止痢散及其拆方的抗腹瀉能力，結(jié)果顯示止痢散組、多地組和多地烏組都可以有效地減緩番瀉葉所致小鼠的腹瀉，其中止痢散的抗腹瀉作用與前期報道[6]的結(jié)果一致，再次證明止痢散具有抗腹瀉作用。家畜新獸藥止痢散是以多葉勾兒茶為主要組成輔以地榆、烏藥等中草藥組合的新復(fù)方中藥制劑。雖有文獻(xiàn)報道多葉勾兒茶[5]、地榆[3]、烏藥[12]都具有抗腹瀉作用，但通過拆方結(jié)果多地組的抗腹瀉效果優(yōu)于其他組說明止痢散的抗腹瀉作用主要通過多葉勾兒茶、地榆來起作用。烏藥的加入雖然不能顯著的增加抗腹瀉效果，但可以增加正常組的胃殘留，減緩胃排空。這同前期文獻(xiàn)報道烏藥對小鼠的體內(nèi)作用表現(xiàn)為促進(jìn)胃腸收縮,如降低小鼠胃中甲基橙殘留率,促進(jìn)小腸炭末推進(jìn)率[12]的結(jié)論是不一致的。可能由于烏藥對胃腸平滑肌有雙重作用,既能促進(jìn)腸蠕動加速,收縮加強,又能抑制胃腸平滑肌,緩解其痙攣[13]，至于這種結(jié)果的出現(xiàn)是否與劑量有關(guān),作用的機理如何未見文獻(xiàn)報道,有待進(jìn)一步研究。多地組在抗腹瀉方面較止痢散組好，提示各藥可能在混煎的過程中發(fā)生拮抗性變化。

腹瀉的發(fā)生與胃腸的運動紊亂關(guān)系密切，多地和多地烏的組方都顯著減少正常狀態(tài)的腸推進(jìn)，增加胃殘留，抑制胃腸的運動，各組都不能完全抑制新斯的明所致小鼠的腸痙攣。止痢散、多地和多地烏都能極顯著減小離體腸平滑肌收縮張力的變化。選用的陽性藥物鹽酸哌洛丁胺為阿片受體激動劑，可以阻止乙酰膽堿和前列腺素的釋放，拮抗平滑肌收縮，而減少腸蠕動和分泌。多葉勾兒茶、地榆和烏藥這三味的組方可能與這些作用機制有關(guān)，但中藥復(fù)方發(fā)揮作用往往是通過多種途徑來實現(xiàn)的,本方是否還存在其它途徑而起效,同時至于這三味對止痢散抗腹瀉作用機制的直接貢獻(xiàn)如何，這都有待進(jìn)一步研究。

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(編輯：陳希)

Experiment Research in Anti-diarrhoea Effects of Jiachu Zhili San and Its Disassemble Prescription

WANG Yu-kun1,2, FENG Jiang1,2,WEI Yu-hao1,2,HU Bing-ye1,2,YANG Ye-yang1,2,JIANG Ling-ling3,ZHOU Si-xuan2,3,WANG Lu2*

(1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang,China550025;2.BiochemistryEngineeringCenterofGuizhouProvince,GuizhouUniversity,Guiyang,China550025 3.HusbandryandVeterinaryResearchInstitute,Guiyang,China550005)

To evaluate the anti-diarrhea action of Jiachu Zhili San and its disassemble prescription，containing by three components, berchemia polyphylla, burnet and lindera, the paper studies the gastroin -testinal motility effect of Jiachu Zhili San and its disassemble prescription. The method of rat diarrhea by senna were carried out to evaluate the effects of Jiachu Zhili San and its disassemble prescription on the times of diarrhea in healthy mice and the effects of them on gastric emptying and small bowel peristalsis in healthy mice and neostigmine-treated mice in vivo and smooth muscle of ileum of rabbitsinvitro. The results showed that both Jiachu Zhili San and its disassemble prescription could extremely significantly reduce the times of diarrhea (P<0.01), and all dose groups could extremely significant suppress alvine pushing rate and gastric emptying rate of healthy mice (P<0.01).However, all the dose groups could not significantly suppress intestinal propulsion and gastric emptying rate in neostigmine-treated mice(P>0.05). Both Jiachu Zhili San and its ingredients could extremely significant reduce contractive activities of smooth muscle of ileum in rabbitsinvitro(P<0.01).The conclusion of the study is that Jiachu Zhili San has good anti-diarrhea effect, which makes it mainly by inhibiting the propulsion of the gastrointestine and reduce contractive activities of smooth muscle of ileum, and this has a close relation to berchemia polyphylla, burnet and lindera, hoping this can provide reference data for clinical therapy and its further development.

Jiachu Zhili San; divided-form; intestinal propulsion; gastric emptying rate

貴州省重大專項(黔科合重大專項字[2013]6014)；貴州省農(nóng)業(yè)類工程技術(shù)研究中心項目(黔科合農(nóng)G字[2015]4001)

王玉坤，碩士研究生，從事中獸醫(yī)學(xué)及中藥藥理學(xué)方面研究。

王魯。E-mail: wanglu7007@163.com

2016-05-12

A

1002-1280 (2016) 07-0057-05

S853.74