劉凱峰

江蘇省蘇北人民醫(yī)院男科 江蘇省揚(yáng)州市 225001

精子DNA碎片檢測(cè)與男性少弱精子癥不育患者的相關(guān)性分析

劉凱峰

江蘇省蘇北人民醫(yī)院男科 江蘇省揚(yáng)州市 225001

隨著社會(huì)的不斷發(fā)展，不孕的夫婦逐年增多，約有15%的夫妻在結(jié)婚后一年內(nèi)未能受孕而接受治療，而又約5%的夫妻治療后仍不能受孕。而其中由男性引起的不育癥比例達(dá)到20%，并且這一比例有逐年上升的趨勢(shì)。臨床上對(duì)于男性的孕前檢查主要局限于精液常規(guī)。精液常規(guī)的局限性在于只能反映精子的活力和質(zhì)量，但是由于精液本身容易受到外界及時(shí)間的影響，以及不同操作人員操作中的差異，很難完整的評(píng)估男性的生殖能力。因此尋求新的評(píng)估方式成為現(xiàn)在急需解決的問題，近些年來(lái)精子DNA碎片檢測(cè)成為一項(xiàng)評(píng)估男性精子功能的指標(biāo)，成為研究男性少弱精子癥不育患者的熱點(diǎn)。因此本研究就精子DNA碎片檢測(cè)與男性少弱精子癥的不育患者的精液常規(guī)、精子形態(tài)學(xué)分析的相關(guān)性進(jìn)行研究。

精子DNA；碎片檢測(cè)；男性少弱精子癥；不育

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2015年6月～2016年8月前于我院就診的少弱精子癥男性不育患者20例，年齡在25～40歲，平均年齡在33.2±3.71歲，平均不孕年限7.11±6.21年。20例對(duì)照組選取近兩年有正常健康生育史的男性，年齡在22～41歲，平均年齡在31.1±5.61歲，兩組間年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。體格檢查包括男性第二性征、睪丸、附睪、輸精管、性激素及外周血染色體核型無(wú)異常的男性，并且均已排出女方因素引起的不育癥。

1.2 方法

1.2.1 精液常規(guī)檢查及精子形態(tài)學(xué)分析

要求受檢者禁欲3～7天手淫取精，精液液化后，根據(jù)WHO[1]標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助動(dòng)態(tài)分析，測(cè)定精子的密度，向前活動(dòng)的精子數(shù)，精子活動(dòng)率及正常形態(tài)率、畸形率等。隨機(jī)統(tǒng)計(jì)220只精子的，求出每份精液樣本的正常精子形態(tài)百分率

1.2.2 精子染色體擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)（ sperm chromatin dispersion, SCD）

SCD檢測(cè)DNA碎片的原理：沒有DNA碎片的精子在酸變性和去掉核蛋白DNA擴(kuò)散形成特征性的光暈，而帶有DNA碎片的沒有這種光暈，因此通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察光暈判定是否有DNA碎片。采用Halosperm 試劑盒,可以保持精子尾部的完整，區(qū)分精子和非精子，從而減少差異性。隨機(jī)統(tǒng)計(jì)500個(gè)精子，觀察精子的光暈與精子頭部橫徑的比較，分為五光暈、小光暈、中光暈和大光暈四個(gè)等級(jí)。大光暈和中光暈表示DNA完整無(wú)碎片；無(wú)光暈及小光暈判定為DNA斷裂為碎片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用spss21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用均數(shù)±標(biāo)注差，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearsan相關(guān)性分析，p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 男性少弱精癥不育組與正常精液比較

如表1，通過(guò)男性少弱精癥不育組與正常精液組比較可以發(fā)現(xiàn)，不育組的正常形體率明顯低于對(duì)照組，并且精子的活動(dòng)率、精子密度及向前運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)均低于對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而比較具有大光暈及中光暈的DNA完整無(wú)碎片的精子數(shù)明顯低于對(duì)照組；小光暈及無(wú)光暈的DNA碎片的精子數(shù)明顯高于對(duì)照組，并且DFI指數(shù)明顯高于對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1

2.2 精子DNA碎片指數(shù)與精液常規(guī)及精子形態(tài)學(xué)分析指標(biāo)的關(guān)系

如表2，通過(guò)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，DFI指數(shù)與精子密度、向前活動(dòng)精子、活動(dòng)率及正常形態(tài)率呈負(fù)相關(guān)。其中DFI與精子密度呈弱相關(guān)，與向前活動(dòng)精子及正常形態(tài)率呈中毒相關(guān)，與活動(dòng)率呈高相關(guān)性。說(shuō)明DNA碎片越多，精子的活動(dòng)率越差，并且精子的密度，向前活動(dòng)精子及正常形態(tài)率越低，不育患者越多。

表2

3 討論

隨著，不孕不育患者的增多，及不孕患者的低齡化的增加，越來(lái)越多的國(guó)家重視起不孕不育患者的檢測(cè)與治療。而男性的少弱精子癥是引起男性的不育的主要原因[2]。主要表現(xiàn)在精子的密度低，前向活動(dòng)精子少，精子的活動(dòng)率差，已經(jīng)正常形態(tài)率的精子低。這與本研究中不育組患者于正常組精液常規(guī)及形態(tài)分析的結(jié)果相一致。

DNA碎片檢測(cè)作為近些年新進(jìn)的精子的檢測(cè)方法，越來(lái)越得到了廣大醫(yī)患人員的認(rèn)同[3]。隨著單純的精液常規(guī)及形態(tài)學(xué)分析不能充分的評(píng)估男性的生殖能力，DNA碎片檢測(cè)作為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)，被廣泛的推廣。在我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們可以發(fā)現(xiàn)，不育患者的DNA碎片率明顯高于對(duì)照組正常的精液，并且DFI指數(shù)也較正常組明顯升高，說(shuō)明DNA碎片與不育的患者存在著密不可分的關(guān)系。同時(shí)通過(guò)對(duì)DNA碎片檢測(cè)的結(jié)果與精液常規(guī)及精子形態(tài)學(xué)結(jié)果的相關(guān)性分析，我們發(fā)現(xiàn)，精子DNA檢測(cè)與精液常規(guī)及形態(tài)學(xué)分析的結(jié)果基本一致。當(dāng)DFI指數(shù)增高時(shí)，與精子的活率、精子的密度，向前活動(dòng)精子及正常形態(tài)率呈負(fù)相關(guān)性，即DFI指數(shù)越高，精子的密度越低，向前活動(dòng)及正常形態(tài)率越低。

從實(shí)驗(yàn)中，我們得到以下結(jié)論，通過(guò)檢測(cè)男性少弱精子不孕患者的精液常規(guī)及形態(tài)結(jié)構(gòu)以及DNA碎片分析，DNA碎片檢測(cè)可以作為評(píng)估男性精子質(zhì)量及生殖能力的重要指標(biāo)，為不育患者的提供治療的新思路。

[1]陳振文,谷龍杰.精液分析標(biāo)準(zhǔn)化和精液質(zhì)量評(píng)估——WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(第5版)出版[J]. 中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志,2012, 20(01):58-62.

[2]李維娜,朱文兵,唐章明,等.16835例中國(guó)不育男性的精液質(zhì)量分析[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2014, 39(02):157-160.

[3]許金榜,黃海龍,康躍凡,等.男性少弱精子癥不育患者精子DNA碎片檢測(cè)情況分析[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2013,23(23):75-78.