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        丹參注射液對(duì)疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

        2016-02-06 09:24:31君丁玉娟熊存全周紅成
        現(xiàn)代養(yǎng)生·下半月 2016年11期
        關(guān)鍵詞:疊氮鹽城市丹參

        胡 君丁玉娟熊存全周紅成

        1鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 江蘇省鹽城市 224005 2鹽城市第三人民醫(yī)院 江蘇省鹽城市 224001

        丹參注射液對(duì)疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

        胡 君1丁玉娟2熊存全1周紅成1

        1鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 江蘇省鹽城市 224005 2鹽城市第三人民醫(yī)院 江蘇省鹽城市 224001

        目的:研究丹參注射液對(duì)疊氮化鈉損傷心肌細(xì)胞H9C2的保護(hù)作用。方法:建立疊氮化鈉誘導(dǎo)心肌細(xì)胞H9C2氧化損傷的模型。將H9C2細(xì)胞分為空白對(duì)照組、疊氮化鈉模型組,疊氮化鈉+丹參酮ⅡA低劑量組(50μg/ml),疊氮化鈉+丹參酮ⅡA高劑量組(200μg/ml),CCK8法檢測(cè)心肌細(xì)胞活性的變化。結(jié)果:丹參注射液能顯著減輕由疊氮化鈉誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞損傷,提高心肌細(xì)胞的活性。結(jié)論:丹參注射液可保護(hù)心肌細(xì)胞H9C2免受氧化損傷。

        丹參注射液;疊氮化鈉;心肌細(xì)胞;細(xì)胞活性

        在缺血性心臟病的治療過(guò)程中,冠狀動(dòng)脈內(nèi)溶栓及冠脈搭橋手術(shù)等被廣泛使用,但同時(shí)心肌缺血再灌注損傷引起的問(wèn)題也日益突出[1-2]。研究發(fā)現(xiàn),缺血再灌注時(shí)產(chǎn)生大量的氧自由基(活性氧),誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生氧化損傷[3]。傳統(tǒng)中藥丹參是一種天然抗氧化劑,具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等作用[4]。本實(shí)驗(yàn)用疊氮化鈉制作心肌細(xì)胞的氧化損傷模型,觀察不同濃度的丹參注射液對(duì)疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌氧化損傷的保護(hù)作用,為研究丹參的臨床藥理作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 主要試劑

        L-DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶、疊氮化鈉、注射用丹參、CCK8試劑盒。

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        1.2.1 H9C2細(xì)胞培養(yǎng)

        37℃、5%CO2條件下,H9C2心肌細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)基中,每2d換液一次。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至融合度達(dá)90%時(shí),0.25%胰酶消化傳代,調(diào)整細(xì)胞密度為5×104/ml,接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上。

        1.2.2 丹參注射液處理

        將接種至96孔板上的H9C2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組、疊氮化鈉模型組(50μmol/L疊氮化鈉)、丹參注射液低劑量組、高劑量組(分別加入50μg/ ml、200μg/ml的丹參注射液預(yù)處理細(xì)胞1 h,再加入50μmol/L疊氮化鈉孵育6h)。

        1.2.3 CCK8檢測(cè)細(xì)胞的存活率

        向處理后的H9C2細(xì)胞,每孔加入10 μl CCK8溶液,放置到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h,酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處的吸光度值。細(xì)胞活性的計(jì)算公式:細(xì)胞活性=[(實(shí)驗(yàn)孔OD值-空白孔OD值)/(對(duì)照孔OD值-空白孔OD值)]×100%。

        1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析

        應(yīng)用SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,p<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

        2 結(jié)果

        與對(duì)照組相比,疊氮化鈉模型組細(xì)胞活性明顯下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比,200μg/ml丹參注射液處理后,細(xì)胞活性顯著增加,但50μg/ml丹參注射液對(duì)H9C2的保護(hù)作用不明顯,與模型組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        3 討論

        氧化應(yīng)激介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡是缺血再灌注損傷的主要機(jī)制[5]。疊氮化鈉,線粒體有氧呼吸鏈中細(xì)胞色素c氧化酶的特異性抑制劑,可誘導(dǎo)氧化磷酸化和細(xì)胞呼吸異常,常被用做氧化應(yīng)激下心肌細(xì)胞損傷模型的建立。丹參是傳統(tǒng)中藥,具有活血通脈、消炎止痛之功效,包含脂溶性和水溶性兩部分。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)丹參制劑能顯著提高心肌細(xì)胞中超氧化物歧化酶活性,降低乳酸脫氫酶和丙二醛含量,降低細(xì)胞中脂質(zhì)過(guò)氧化物濃度,達(dá)到清除氧自由基的作用[6]。本實(shí)驗(yàn)用不同濃度的丹參注射液對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理發(fā)現(xiàn),200μg/ml丹參注射液可顯著改善由疊氮化鈉誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷,提高受損心肌細(xì)胞的活性,提示丹參注射液可減少氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡,維持心肌細(xì)胞活力,從而最終改善心功能狀態(tài)。

        [1]侯少科,郝麗娜,李建輝等.聯(lián)合應(yīng)用貝那普利與丙泊酚對(duì)體外循環(huán)下冠脈搭橋術(shù)患者心肌缺血再灌注損傷的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志.2015;35:5508-5510.

        [2]Yao T,Ying X,Zhao Y,et al. Vitamin D receptor activation protects against myocardial reperfusion injury through inhibition of apoptosis and modulation of autophagy[J].Antioxid Redox Signal.2015;22(08):633-50.

        [3]Bagheri F,Khori V,Alizadeh AM, et al.Reactive oxygen speciesmediated cardiac-reperfusion injury:Mechanisms and therapies [J].Life Sci.2016;165:43-55.

        [4]Liu Y,Huang Y,Zhao C,et al. Salvia miltiorrhiza injection on pulmonary heart disease:a systematic review and metaanalysis [J].Am J Chin Med.2014; 42(06):1315-31.

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