郎天琦， 鄒世穎,2， 侯 曼， 劉 棒， 黃昆侖,2， 賀曉云,2

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院， 北京海淀100083； 2.農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物食用安全監(jiān)督檢驗測試中心(北京)， 北京海淀100083)

SD大鼠90d喂養(yǎng)試驗生理生化指標正常參考值的研究

郎天琦1， 鄒世穎1,2， 侯 曼1， 劉 棒1， 黃昆侖1,2， 賀曉云1,2

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院， 北京海淀100083； 2.農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物食用安全監(jiān)督檢驗測試中心(北京)， 北京海淀100083)

建立本實驗室清潔級SD大鼠在90 d喂養(yǎng)試驗中生理生化指標的正常參考值范圍，為科學(xué)研究、試驗結(jié)果評價提供準確、科學(xué)的參考依據(jù)。選取10組SD大鼠90 d喂養(yǎng)試驗生理生化指標數(shù)據(jù)，對血液學(xué)指標及血清生化指標進行統(tǒng)計分析。結(jié)果得到11-12周齡和17-18周齡不同性別SD大鼠血液學(xué)、血清生化指標的正常參考范圍。多數(shù)血清生化指標受年齡和性別的影響；表明在科學(xué)研究、試驗結(jié)果評價時，要充分考慮性別和年齡對SD大鼠血液學(xué)、血清生化指標帶來的影響。

清潔級SD大鼠 ； 血液學(xué) ； 血清生化指標

實驗動物的各項生理學(xué)數(shù)據(jù)，包括血液學(xué)、血清生化指標、體重等是實驗動物科學(xué)研究中的重要內(nèi)容，在實驗動物的健康評價、疾病診斷、實驗動物病理模型建立以及生理、毒理、藥理試驗研究和安全評價等多個領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。特別是在保健食品、新藥等健康相關(guān)產(chǎn)品的安全性試驗中，評價血液學(xué)及血清生化指標時，除了需要與對照組的數(shù)據(jù)進行比較，往往還要考慮其是否具有臨床意義，判斷依據(jù)即為測定指標是否超出了正常參考值的范圍。

動物的血液學(xué)生化指標受動物品系、年齡、體重、來源、飼養(yǎng)環(huán)境、營養(yǎng)狀況和檢測方法等多種因素的影響[1]，目前已知的參考值范圍[2～6]存在一定差異，給本實驗室試驗結(jié)果的評價帶來諸多不便，為此，我們收集整理了近兩年來10個批次清潔級SD大鼠90 d安全評價的血液學(xué)指標和血清生化指標進行統(tǒng)計分析，為本實驗室毒理學(xué)安全性評價工作提供正常范圍值的參考依據(jù)，并為其他類似研究提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選取清潔級Sprague Dawley(SD)大鼠，4周齡，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，合格證號：SCXK(京)2012-0001。選自農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物食用安全監(jiān)督檢驗(北京)測試中心自2011年至今所進行的10批次的大鼠90 d試驗中的數(shù)據(jù)。每批次大鼠140只(雌性70只，雄性70只)。

1.2 動物飼養(yǎng)條件 所有試驗均在中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物食用安全監(jiān)督檢驗(北京)測試中心的SPF級動物房中進行，合格證號：SYXK(京)2010-0036。環(huán)境溫度22 ℃～25 ℃，相對濕度40%～60%，12 h人工照明/黑暗循環(huán)，換氣次數(shù)15 次/h。自由進食和飲水。

1.3 儀器與試劑 主要儀器：HEMAVET 950FS血液分析儀，美國產(chǎn)品，經(jīng)中國計量科學(xué)研究院校準；HITACHI 日本全自動生化分析儀，日本日立公司產(chǎn)品，經(jīng)中國計量科學(xué)研究院校準；DY-3000 電子天平，常熟市金羊砝碼儀器有限公司產(chǎn)品，經(jīng)中國計量科學(xué)研究院校準；CP213電子天平，奧豪斯儀器(上海)有限公司產(chǎn)品，經(jīng)中國計量科學(xué)研究院校準。

主要試劑：血常規(guī)所用試劑，均購自原裝進口產(chǎn)品；血清生化指標所用試劑，均購自中生北控公司。

1.4 試驗方法 試驗期間大鼠飼喂飼料均符合GB14924-2010實驗動物營養(yǎng)標準，自由進食、飲水，連續(xù)觀察90 d。每日記錄動物的行為表現(xiàn)、攝食及排泄情況，觀察各類中毒及死亡情況的發(fā)生時間。試驗中期(45 d)及末期(90 d)通過眼內(nèi)眥取血獲取血液樣本，檢測血液學(xué)指標和血清生化指標。試驗結(jié)束后安樂死處死實驗動物對各組織臟器進行大體病理學(xué)檢查。

1.5 檢測指標

1.5.1 血液學(xué)指標 第45天、第90天禁食16 h，取EDTA·K2抗凝全血測定白細胞計數(shù)(WBC)、紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均血紅蛋白含量(MCH)及濃度(MCHC)、紅細胞分布幅度(RDW)指標、血小板計數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)等10項血液學(xué)指標。

1.5.2 血清生化指標 第45天、第90天禁食16 h，取全血凝集離心后的血清，測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、血糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、鈣(Ca)、磷(P)、總膽固醇(T-CHO)、甘油三脂(TG)、乳酸脫氫酶(LDH)等13項血清生化指標。

1.6 統(tǒng)計分析 各指標數(shù)值以平均值±標準差的形式表示。采用EXCEL軟件的T-test檢驗方法對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，以P<0.05判定為顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠一般情況 各組大鼠生長發(fā)育正常，體重增長平穩(wěn)，試驗期間無中毒死亡情況發(fā)生。試驗第90天安樂處死實驗動物后大體病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)任何異常病理改變。

2.2 45 d和90 d大鼠血液學(xué)指標比較 試驗結(jié)果見表1。

由表1可知，血液學(xué)指標中，WBC和RDW的范圍受性別影響，雄性大鼠WBC值在45 d和90 d兩個時間段均顯著高于雌性大鼠(P<0.05)；RDW僅在45 d時雌雄間存在差異(P<0.05)。除此之外WBC范圍值的變化還受時間的影響，隨著年齡增長，雌性和雄性大鼠的WBC值均顯著降低(P<0.05)。其他指標在性別和兩個年齡段均不存在統(tǒng)計學(xué)差異。

2.3 45 d和90 d大鼠血清生化指標比較 試驗結(jié)果見表2。

由表2可知，年齡和性別對大部分血清生化指標均會產(chǎn)生影響。45 d時，ALB、ALP、P受性別影響，雌雄間存在顯著性差異(P<0.05)；90 d時，TP、ALP、LDH受性別影響，雌雄間也存在顯著性差異(P<0.05)。90 d時，ALP、GLU、LDH受時間影響，雌性大鼠隨著年齡增長而存在顯著性差異(P<0.05)；90 d時，ALT、ALP、GLU、CREA、LDH受時間影響，雄性大鼠隨著年齡增長而存在顯著性差異(P<0.05)。

3 討論

血液學(xué)生化指標是判斷實驗動物健康與否的一項重要指標，在毒理學(xué)試驗研究中具有重要意義。SD大鼠是生物醫(yī)學(xué)研究中使用較為常見的大鼠品系，研究表明[7～9]，其血液學(xué)、血清生化指標值不僅受遺傳物質(zhì)控制[10]，還受性別、年齡、營養(yǎng)因素以及環(huán)境等其他諸多因素影響，其中任何一個因素發(fā)生變化都可能引起最終測定值的變化，因此對不同年齡、性別的實驗動物血液學(xué)指標進行分別測定與統(tǒng)計，獲得各項指標正常參考值范圍，才可為毒理試驗的結(jié)果判定提供有力證據(jù)[11]。

本研究匯集了10個批次同周齡雌雄兩種性別的清潔級SD大鼠90 d試驗研究數(shù)據(jù)。對血液學(xué)、血清生化數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SD大鼠部分血液學(xué)指標受年齡和性別的影響；SD大鼠的部分血清生化指標受年齡和性別的影響。

本研究得出本實驗室清潔級SD大鼠在90 d喂養(yǎng)試驗兩個階段血液學(xué)、血清生化各項指標的正常參考值范圍，這些指標不同程度地受到年齡和性別的影響，為動物試驗的設(shè)計和分析提供參考數(shù)據(jù)，也可供其他科研工作者參考查閱。該正常參考值范圍在毒理學(xué)評價工作中具有實際應(yīng)用意義，也可為藥物、保健食品、化妝品、農(nóng)藥、化學(xué)品等提供參考依據(jù)，并可為今后制定相關(guān)標準提供參考。不過，由于動物的血液學(xué)和血清生化指標除受年齡和性別影響外，還與動物生活環(huán)境、營養(yǎng)水平和生理狀況等因素有關(guān)，因此有待進一步研究。

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Study on the normal reference interval of hematological and serum biochemical indexes in 90d feeding study on SD rats

LANG Tian-qi1,ZOU Shi-ying1,2,HOU Man1,LIU Bang1, HUANG Kun-lun1,2,HE Xiao-yun1,2

(1.College of Food Science and Nutritional Engineering,China Agricultural University,Beijing 100083 China; 2.The Supervision,Inspection and Testing Center of Genetically Modified Organisms,Ministry of Agriculture,Beijing 100083，China)

To establish the normal reference interval of hematological and serum biochemical indexes in 90d feeding study on SD rats in our lab and provide accurate and scientific reference for scientific research and evaluation of experimental results.Methods:Gather 10 groups of data in 90d feeding and statistically analyze the indexes of hematological and serum biochemical parameters.Results:Normal reference intervals of the hematological and serum biochemical parameters of 11-12-week and 17-18-week-old male and female SD rats were collected.Most biochemical parameters were affected by age and gender.Conclusion:The impact of gender and age on hematology,serum biochemistry of SD rats should be fully taken into consideration in the scientific research and the evaluation of experimental results.

Clean Level; Sprague-Dawley rat; Hematology; Serum biochemistry

HE Xiao yun

2016-06-29

國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(2015ZX08-013003);中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金項目(2014jk008)

郎天琦(1993-)，女，本科生，就讀于食品質(zhì)量與安全專業(yè)，E-mail:ltq3991@163.com

賀曉云，E-mail：raininghe@163.com

S865.1

A

0529-6005(2016)12-0099-03