毛倩倩 ， 徐 峰 ， 孔祥強(qiáng)

(1.青島康地恩動(dòng)物藥業(yè)有限公司 ， 山東青島266109;2.青島蔚藍(lán)生物股份有限公司， 山東青島266001)

20%濃戊二醛對(duì)雞常見(jiàn)病原菌殺滅效果的試驗(yàn)

毛倩倩1，2， 徐 峰1，2， 孔祥強(qiáng)1,2

(1.青島康地恩動(dòng)物藥業(yè)有限公司 ， 山東青島266109;2.青島蔚藍(lán)生物股份有限公司， 山東青島266001)

在畜牧養(yǎng)殖行業(yè)中，對(duì)動(dòng)物傳染病的控制主要有疫苗免疫、藥物防治和環(huán)境消毒3種方式。消毒是貫徹“預(yù)防為主”方針的一項(xiàng)重要措施，消毒的目的是消滅被傳染源散播于外界環(huán)境中的病原體，以切斷傳播途徑，阻止疫病繼續(xù)蔓延。消毒劑的優(yōu)劣直接影響到消毒效果的好壞。戊二醛作為一種廣譜、高效、低腐蝕、穩(wěn)定的消毒劑和滅菌劑，已被廣泛用于畜牧行業(yè)。本試驗(yàn)，以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門(mén)菌為殺滅對(duì)象，對(duì)市售20%濃戊二醛溶液進(jìn)行消毒效果的研究；同時(shí)，對(duì)消毒劑在有機(jī)物干擾的情況下對(duì)細(xì)菌殺滅效果進(jìn)行了觀察；為其在實(shí)際臨床使用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料

1.1 受試細(xì)菌 臨床分離的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門(mén)菌。

1.2 主要試劑 甘氨酸、吐溫-80、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、MHB肉湯、0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液、標(biāo)準(zhǔn)硬水、5%滅菌雞糞水溶液。

1.3 藥品 濃戊二醛溶液(含量20%，批號(hào)：2015092401，由青島康地恩動(dòng)物藥業(yè)有限公司提供)。

2 方法

2.1 試驗(yàn)菌懸液的配制 將菌株劃線接種于MH固體培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，用滅菌槍頭挑取單個(gè)菌落，接種于3 mL MHB肉湯培養(yǎng)基中，置于37 ℃水浴恒溫振蕩儀中培養(yǎng)8 h。用標(biāo)準(zhǔn)硬水校正菌液濃度至 0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濁度，此濁度含菌量約為108個(gè)/mL，再用MHB肉湯做10倍稀釋(含菌量約為107個(gè)/mL)備用。

2.2 消毒劑稀釋 將20%濃戊二醛用標(biāo)準(zhǔn)硬水稀釋成不同濃度，置于已滅菌試管，每管4.5 mL。

2.3 中和劑配制 參照規(guī)范[1]和韓杰[2]方法，選用3%吐溫-80+1%甘氨酸為中和劑。

2.4 殺菌試驗(yàn) 將已稀釋好的消毒劑中分別加入受試菌液0.5 mL，混勻于20 ℃水浴中作用10、20、30 min，各吸取0.5 mL，加入4.5 mL中和劑混勻，作用10 min后每個(gè)混合液吸取100 μL進(jìn)行涂板。每個(gè)涂板設(shè)3個(gè)平行，之后放37 ℃培養(yǎng)18 h～22 h后查看試驗(yàn)結(jié)果，用平板法作細(xì)菌計(jì)數(shù)[3]。同時(shí)設(shè)PBS對(duì)照組。然后按以下公式計(jì)算殺菌率[4]。試驗(yàn)重復(fù)6次。

計(jì)算殺菌率(pt)=[(no-nt)/no]×100 %，式中no為對(duì)照組活菌數(shù)，nt為消毒后試驗(yàn)組活菌數(shù)。

2.5 有機(jī)物干擾試驗(yàn) 以5%雞糞水溶液代替PBS重復(fù)上述試驗(yàn)。

2.6 結(jié)果判定方法 消毒劑對(duì)細(xì)菌的殺菌效果是否有效以殺菌率是否達(dá)到99.9%以上的消毒劑的最高有效稀釋倍數(shù)作為判定標(biāo)準(zhǔn)[5]。

3 結(jié)果與分析

3.1 20%戊二醛對(duì)雞常見(jiàn)病原菌殺滅效果 由表1可知，20%濃戊二醛消毒劑對(duì)細(xì)菌的殺滅作用隨著消毒劑濃度的升高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。1∶2 000 倍稀釋對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)菌和金黃色葡萄球菌均有良好的殺滅效果。當(dāng)稀釋4 000倍時(shí)，作用 30 min，對(duì)金黃葡萄球菌有良好的殺滅作用。

3.2 有機(jī)物干擾試驗(yàn) 由表2可知，在有機(jī)物干擾的情況，稀釋1 000倍，10 min內(nèi)仍能有效殺滅大腸桿菌、沙門(mén)菌和金黃色葡萄球菌。但高度稀釋后，有機(jī)物干擾作用明顯，但在2 000倍稀釋，作用 30 min 對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌仍有良好的殺滅效果。

表1 20%戊二醛對(duì)雞常見(jiàn)病原菌的殺滅效果/%

表2 20%濃戊二醛在5%雞糞水中的殺菌效果/%

4 討論

在實(shí)驗(yàn)室條件下，評(píng)價(jià)消毒劑殺菌效果，將混合液移到培養(yǎng)基中，不可避免的會(huì)帶有少量殘余消毒劑，可能進(jìn)一步阻礙細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)繁殖，形成陰性結(jié)果[6]。因此，在定量殺菌濃度試驗(yàn)時(shí)，要除去殘留消毒劑影響。本試驗(yàn)中，選用的中和劑能很好的中和消毒劑，其濃度并不影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。

戊二醛是一種速效、廣譜的化學(xué)滅菌劑，在常溫下低濃度的戊二醛溶液即可對(duì)多種微生物表現(xiàn)出殺滅活性[7]。同大多數(shù)消毒劑一樣，20%濃戊二醛消毒液的殺菌效果隨濃度增加、時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)[8、9]。稀釋4 000倍，作用30 min對(duì)金黃色葡萄球菌仍用良好的殺滅作用。試驗(yàn)表明，戊二醛濃度越低，越易受有機(jī)物的影響，但延長(zhǎng)作用時(shí)間，仍有一定的滅菌效果。

本試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室條件下，對(duì)20%濃戊二醛進(jìn)行初步研究表明，20%濃戊二醛溶液對(duì)雞常見(jiàn)病原菌具有良好的殺滅作用，具有一定的推廣價(jià)值。關(guān)于該消毒劑對(duì)真菌、芽孢和病毒等的消毒試驗(yàn)還在進(jìn)行中。

[1] 農(nóng)業(yè)部1992農(nóng)(牧藥)字第101號(hào)．獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范(試行)[S]．1992.

[2] 韓杰，魏秋華．化學(xué)消毒劑的中和劑研究現(xiàn)狀[J]．中國(guó)消毒學(xué)雜志，2013，30(12):1165-1168.

[3] 高東旗.季銨鹽類(lèi)消毒劑復(fù)方的應(yīng)用[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，1993，10(4)：224.

[4] 農(nóng)業(yè)部獸藥審評(píng)委員會(huì).獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編[S].2001，30-47.

[5] Union Carbide Corparation UCARSAM Sanizizer.UCARSAM 4128 and Santizizer.1996

[6] 張冰，秦秀慧，李軍,等.戊二醛和季銨鹽復(fù)合消毒劑對(duì)雞常見(jiàn)病原微生物殺滅效果的研究[J],中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雜志，2002,12(2)：95-98.

[7] 徐秀榮，劉霞，黃迪海，等.戊二醛癸甲溴銨溶液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果研究[J].中國(guó)獸藥雜志,2015,49(3):30-34.

[8] 張亞尼，宋暉，張福娥，等.5種含氯消毒劑殺菌效果及能量試驗(yàn)研究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志,2005,22(2):147.

[9] 邱梅，郝智慧，沈巍，等.不同消毒劑的殺菌效果試驗(yàn)觀察[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2012,48(10):39-41.

2016-01-08

毛倩倩(1988-)，女，碩士，研究方向?yàn)閯?dòng)物藥評(píng)價(jià)、獸醫(yī)藥理學(xué)，E-mail：772074848@qq,com

徐峰，E-mail：xufeng@vlandgroup.com

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0529-6005(2016)12-0050-02