甄時(shí)建

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結(jié)直腸癌中肝癌衍生生長(zhǎng)因子與p53蛋白的表達(dá)相關(guān)性分析

甄時(shí)建

【摘要】目的 探究結(jié)直腸癌（CRC）中肝癌衍生生長(zhǎng)因子和p53蛋白的表達(dá)相關(guān)性。方法 應(yīng)用免疫組化染色法檢測(cè)80例CRC和10例正常結(jié)直腸黏膜組織者中的肝癌衍生生長(zhǎng)因子（HDGF）的表達(dá)，取30例CRC組織檢測(cè)p53蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 80例CRC中HDGF陽(yáng)性率為66.7%，而正常人群的結(jié)直腸黏膜組織均為陰性；30例CRC組織中p53蛋白的陽(yáng)性率為70.0%，而正常結(jié)直腸黏膜者呈陰性。結(jié)論HDGF和P53蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)高于正常結(jié)直腸癌組織。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌；肝癌衍生生長(zhǎng)因子

作者單位：412000株洲，湖南中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校附屬第一醫(yī)院病理科

結(jié)直腸癌（CRC）是一種危害性較大的惡性腫瘤，隨著我國(guó)老齡人口數(shù)量的增加和環(huán)境的污染，使得CRC人數(shù)逐漸增加［1-2］。在臨床尋找準(zhǔn)確反映結(jié)直腸癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo)，針對(duì)具高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者進(jìn)行個(gè)體化治療，從而降低局部的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移［3-4］。目前肝癌衍生生長(zhǎng)因子和p53蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和相關(guān)性未見(jiàn)報(bào)道，筆者為探測(cè)結(jié)直腸癌中肝癌衍生因子和p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)行以下研究。

1　資料與方法

1.1一般資料

我院收治的80例CRC，手術(shù)后存檔的石蠟標(biāo)本作為本次的標(biāo)本。其中女性32例，男性48例，年齡22～85歲，結(jié)腸癌41例，直腸癌39例。另取10例正常結(jié)直腸黏膜組織者，男性5例，女性5例，年齡23～84歲。

1.2方法

1.2.1儀器及試劑 HDGF單克隆抗體、免疫組化試劑盒、鼠抗人p53單克隆抗體、0.01 PBS，石蠟切片、顯微鏡日本Olympus公司、免疫組化用24片帶蓋反應(yīng)保濕盒。

1.2.2檢測(cè)方法 試劑盒由深圳深達(dá)公司提供，并嚴(yán)格按照SABC免疫組化檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明：（1）將石蠟連續(xù)切成厚為4μm的切片，貼片用多聚賴(lài)氨酸玻片， 60℃烤箱烘烤過(guò)夜。（2）將石蠟進(jìn)行脫蠟和水化。（3）滴加3%的過(guò)氧化氫-甲醇溶液，室溫進(jìn)行孵化20 min，用PBS進(jìn)行洗滌。（4）將切片用0.01 M的枸櫞酸鹽緩沖液進(jìn)行沖洗，在微波中加熱煮沸10 min，室溫放置冷卻后，用 PBS洗滌3×2 min。（5）滴加山羊血清進(jìn)行封閉，室溫孵化時(shí)間為20 min。（6）滴加HDGF抗體或者p35抗體， 4℃進(jìn)行過(guò)夜。（7）60 min復(fù)溫，用PBS沖洗，時(shí)間為3×3 min。（8）將生物素標(biāo)記二抗工作液滴入，于常溫中孵化至少15～20 min，再應(yīng)用PBS沖洗，時(shí)間3×3 min。（9）將經(jīng)過(guò)氧化物酶標(biāo)記過(guò)的鏈霉素親和素滴入后于常溫下孵育至少15～20 min，再于PBS沖洗，時(shí)間3×3 min。（10）將現(xiàn)配現(xiàn)用的DAB溶液滴入后于鏡下觀(guān)察其顯色情況，然后采用自來(lái)水沖洗以便終止其反應(yīng)；之后采取蘇木素復(fù)染，于1%鹽酸酒精反藍(lán)，待梯度酒精脫水與二甲苯透明后利用中性樹(shù)脂進(jìn)行封片。

陽(yáng)性對(duì)照為用已知的HDGF陽(yáng)性切片；陰性對(duì)照為無(wú)關(guān)的IgG代替抗體進(jìn)行陰性對(duì)照；空白對(duì)照：PBS替代。

1.3判定標(biāo)準(zhǔn)

所有的切片經(jīng)病理診斷資質(zhì)資深的專(zhuān)家進(jìn)行盲法閱讀。HDGF判定：光鏡下隨機(jī)觀(guān)察10個(gè)高倍鏡視野，記錄10×100個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。陽(yáng)性結(jié)果用Yamamoto等進(jìn)行免疫組化評(píng)分，＞90%的腫瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均陽(yáng)性染色，為高表達(dá)組；＜90%則為低表達(dá)組。

p53蛋白定位于細(xì)胞核，并呈黃色的顆粒，觀(guān)察陽(yáng)性百分?jǐn)?shù)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%記為0，10%～25%為1，25%～50%為2，＞50%為3；因此，0～1分為陰性，2為陽(yáng)性，3為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)分析

用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0進(jìn)行分析比較，用Spearman和χ2檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析。P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同生理下HDGF、p35的表達(dá)

所有正常結(jié)直腸黏膜組織中HDGF表達(dá)為陰性，在80例結(jié)直腸癌中HDGF的陽(yáng)性率為66.7%，而10例正常結(jié)直腸黏膜中HDGF為陰性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；80例患者中取30例CRC組織檢測(cè)p53蛋白的表達(dá)水平，30例結(jié)直腸癌組織中p53蛋白的陽(yáng)性率為70.0%，而10例正常結(jié)直腸黏膜中p53蛋白呈陰性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2結(jié)直腸癌組織中HDGF與p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性

結(jié)直腸癌組織中p53蛋白陽(yáng)性率為70.0%，對(duì)結(jié)直腸癌組織中HDGF和p53進(jìn)程蛋白表達(dá)的Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析，兩者的相關(guān)系數(shù)為rs=0.33，P=0.001，表明HDGF表達(dá)與p53蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。

3　討論

最初是在人的肝癌細(xì)胞系HUH-7進(jìn)行分離純化得到HDGF［5-6］。目前臨床已經(jīng)表明HDGF廣泛存在于多種腫瘤組織和惡性癌細(xì)胞中，對(duì)細(xì)胞的增生、血管生成和創(chuàng)傷修復(fù)等具有深遠(yuǎn)的影響［7-8］。在本次的研究結(jié)果中，HDGF在結(jié)直腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)高于正常的組織，這也提示了HDGF可能參與某些細(xì)胞的生物學(xué)行為，并在結(jié)直腸癌的發(fā)展中扮演重要角色。

本次30例結(jié)直腸癌組織中p53蛋白的陽(yáng)性率為70.0%，而正常組織為陰性，提示結(jié)直腸癌組織與正常的組織的p53存在差異。此外HDGF表達(dá)與p53蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，提示在HDGF的高表達(dá)中可能存在p53的突變，對(duì)于癌變細(xì)胞兩者均具有促進(jìn)作用。

HDGF和p53蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)高于正常結(jié)直腸黏膜組織，在結(jié)直腸癌組織HDGF與p53蛋白表達(dá)具有正相關(guān)。

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Expression and Correlation Analysis of Liver Cancer Derived Growth Factor and p53 Protein in Colorectal Cancer

ZHEN Shijian Department of Pathology，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Hunan Traditional Chinese Medical College，Zhuzhou 412000，China

【Abstract】

Objective Exploration of colorectal cancer（CRC） in hepatoma-derived growth factor and p53 protein expression correlation.Methods CRC 80 cases and 10 cases of normal colorectal mucosa organizer of hepatoma-derived growth factor（HDGF） expression by immunohistochemical staining,30 cases taken to detect the expression levels of p53 protein in CRC tissue.Results 80 cases of CRC in HDGF positive rate 66.7%,while the colorectal mucosa normal population was negative.The positive rate of 30 cases of CRC of p53 protein was 70.0%,while the normal colorectal mucosa were negative.Conclusion The expression of HDGF and P53 protein in colorectal cancer tissues was significantly higher than that in normal colorectal cancer tissues.

【Keyword】CRC，HDGF

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.04.122

【中圖分類(lèi)號(hào)】R735.3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9316（2016）04-0171-02