郭光禮 張淑芳

（臨朐縣畜牧局，山東濰坊 262600）

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犬傳染性肝炎及其防控疫苗

郭光禮 張淑芳

（臨朐縣畜牧局，山東濰坊 262600）

近年來，隨著寵物犬養(yǎng)殖規(guī)模越來越大，犬傳染性肝炎的發(fā)病率日益升高，不僅影響了家庭寵物犬的養(yǎng)殖，也給規(guī)模犬業(yè)的養(yǎng)殖帶來了極大的危害。犬傳染性肝炎是由犬傳染性肝炎病毒引起的急性、敗血性傳染病，是危害犬最嚴(yán)重的疾病之一，本文從其疫苗研究進展入手，以期提高對該病的預(yù)防和控制。

1　病原學(xué)特性

犬傳染性肝炎由犬腺狀病毒第一型引起，屬于腺病毒科乳腺病毒腺病毒屬，DNA型。主要表現(xiàn)為肝炎和眼部病變（藍眼?。?，該病無明顯季節(jié)性，各日齡犬均易感染。主要通過消化道感染，也可以以外寄生蟲為媒介傳播，但不能通過空氣經(jīng)呼吸道感染，本病為高度接觸性傳染病。

2　臨床癥狀與病理變化

該病自然發(fā)病潛伏期為 6～9 d。癥狀輕者表現(xiàn)嘔吐、腹瀉、眼和鼻流漿液性分泌物，食欲下降、飲欲增加。右腹有壓痛，不表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，比較特殊的癥狀是頭、頸、眼瞼及腹部皮下水腫，可視黏膜輕度黃染。病犬凝血不良，一旦出血，往往流血不止?；疾∪畣窝刍螂p眼表現(xiàn)角膜渾濁水腫，也稱為“藍眼病”。

急性病例中病犬剖檢見有血樣腹水，肝臟腫大，色淡呈黃褐色并混有多量暗紅色斑點，膽囊壁水腫、出血和肥厚。

3　預(yù)防措施

該病的預(yù)防首先要禁止從該病發(fā)生區(qū)域引進犬種，防止病毒傳入；其次對于從外引入的犬種，應(yīng)做好檢疫監(jiān)督工作，并做好隔離防范措施；最后對于患病后康復(fù)的犬一定要單獨飼養(yǎng)，最少隔離半年以上犬傳染性肝炎的危害性非常大，在實際養(yǎng)殖中要定期給犬做健康免疫，一般多用滅活疫苗或減毒活疫苗，市售的多為混合疫苗，而從20世紀(jì)90年代以來興起的基因治療研究領(lǐng)域中發(fā)展起來的核酸疫苗能有效誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生特異性的細胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答，已成為了一個新的發(fā)展方向。

3.1滅活疫苗

滅活疫苗是用免疫原性強的病原微生物或其代謝產(chǎn)物，接種于動物、雞胚、組織或細胞培養(yǎng)物中生長繁殖后，經(jīng)滅活處理使其失去致病力，但仍保留免疫原性而制成的生物制劑。近年來，公安部警犬研究所用南京農(nóng)業(yè)大學(xué)分離的犬傳染性肝炎病毒株，經(jīng)MDCK細胞增殖，制成了犬傳染性肝炎病毒細胞培養(yǎng)滅活苗，實驗結(jié)果比較滿意。犬接種后，無明顯的負反應(yīng)。免疫后血清抗體下降至1：14時，仍能抵抗強毒的攻擊。

3.2減毒活疫苗

減毒活疫苗是通過不同的方法手段，使病原體的毒力即致病性減弱或喪失后獲得的一種由完整的微生物組成的疫苗制品。常用的有犬傳染性肝炎弱毒疫苗，斷奶后每只犬皮下注射1.5ml，間隔3～4周再注射2ml。以后每半年注射1次，每次2ml。

3.3核酸疫苗

又稱為基因疫苗、基因免疫或核酸免疫，目前研究最多的就是DNA疫苗，所以一般泛指的核酸疫苗就是DNA疫苗。

3.3.1DNA疫苗的免疫佐劑研究

有實驗證實DDA、CPG-ODN、Lipofectamine TM 2000 三種免疫佐劑均能增強DNA疫苗pVAX1-CpG-Loop對小鼠的體液免疫和細胞免疫。免疫的小鼠能夠產(chǎn)生對 Loop 蛋白特異性免疫記憶。證明免疫佐劑與低劑量 DNA 疫苗共免疫結(jié)合低劑量DNA疫苗加強免疫的策略是一種非常有效和有潛力的免疫策略。這一方面肯定了DNA疫苗pVAX1-CpG-Loop 的研究思路，為疫苗制備時佐劑的選擇提供了依據(jù)，另一方面，也為 DNA 疫苗pVAX1-CpG-Loop 的免疫學(xué)評價積累了數(shù)據(jù)。

3.3.2DNA疫苗的安全性研究

安全性研究結(jié)果表明DNA 疫苗對 BALB/c小鼠的健康狀況、體重增長和血常規(guī)均沒有顯著影響；DNA疫苗pVAX1-CpG-Loop對生殖及F1代無明顯影響；多次免疫實驗中末次免疫后12周所有的被檢組織均沒有擴增出Loop基因，說明DNA疫苗沒有整合到宿主基因組中；末次免疫后4周組織病理觀察結(jié)果均顯示BALB/c小鼠存在肝和腎損傷，但這種損傷在末次免疫后6個月恢復(fù)，表明該DNA疫苗對肝和腎損傷是一過性的。

3.3.3DNA疫苗在宿主體內(nèi)的生物學(xué)分布

采用高劑量和低劑量免疫小鼠，均在肝、脾、腎和注射部位肌肉中發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒DNA的存在，其他臟器未檢測到質(zhì)粒DNA，說明免疫劑量的大小與其在宿主體內(nèi)的生物學(xué)分布無關(guān)。

采用肌肉注射免疫和聯(lián)合免疫兩種免疫方法，用于檢測不同免疫途徑對其生物學(xué)分布的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肌肉注射免疫組，質(zhì)粒DNA存在于肝、脾、腎和注射部位的肌肉；聯(lián)合免疫組包括肌肉注射、皮下注射和滴鼻三種免疫方式，除在肝、脾、腎、注射部位的肌肉外，肺部也發(fā)現(xiàn)有質(zhì)粒DNA 的存在。質(zhì)粒DNA在宿主體內(nèi)的分布表明其在體內(nèi)的分布與免疫方式有關(guān)，且不存在于生殖器官。

4　總結(jié)

目前對于核酸疫苗的研究，已涵蓋病毒、細菌和原蟲在內(nèi)的多種傳染性病原的預(yù)防。現(xiàn)有報道核酸疫苗對狂犬病、豬瘟、結(jié)核病、鼠疫桿菌等感染都有預(yù)防作用。針對犬傳染性肝炎的核酸疫苗仍在試驗階段，市場對于疫苗的有效性和安全性問題比較關(guān)注，前期的實驗室工作已證實該疫苗具有較好的保護性，目前為止也沒有關(guān)于DNA疫苗毒副作用的報道。在投放使用以前，完備的臨床前研究，并輔以大量的試驗工作可能建立對DNA疫苗風(fēng)險性的全面認(rèn)識，使這種新型疫苗得到更好的應(yīng)用和發(fā)展。