李雁萍

（山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，山西太原 030024）

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免疫層析試紙條檢測(cè)實(shí)驗(yàn)感染豬旋毛蟲(chóng)抗體的研究

李雁萍

（山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，山西太原 030024）

［摘 要］旋毛蟲(chóng)又稱(chēng)“旋毛形線蟲(chóng)”，感染此病而誘發(fā)的旋毛蟲(chóng)病對(duì)人體危害大。目前，檢驗(yàn)肉質(zhì)中旋毛蟲(chóng)的方法，有肌肉壓片鏡檢法和人工消化法，因各有弊端難以推廣使用。筆者推薦免疫層析試紙條檢測(cè)豬旋毛蟲(chóng)，方法：制備免疫層析試紙條，實(shí)驗(yàn)用豬30頭，均采購(gòu)本地規(guī)模豬場(chǎng)。分為2組，1組為感染組，20頭；1組為正常組，10頭。感染組，每頭經(jīng)5000條旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)感染，試紙條進(jìn)行血清及肉汁抗體檢測(cè)，并與鏡檢法進(jìn)行比較。結(jié)果：使用的免疫層析試紙條，具有操作簡(jiǎn)單、便捷快速、不需專(zhuān)業(yè)技能等優(yōu)點(diǎn)，更便于推廣應(yīng)用。而且，更適合試紙條檢測(cè)肉汁中旋毛蟲(chóng)抗體可用于新鮮肉及冷凍豬肉中旋毛蟲(chóng)檢疫的初篩。

［關(guān)鍵詞］旋毛蟲(chóng)抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

1　前言

旋毛蟲(chóng)又稱(chēng)“旋毛形線蟲(chóng)”，感染此病而誘發(fā)的旋毛蟲(chóng)病對(duì)人體危害大。而致病程度，同樣與諸多因素相關(guān)。例如：食入幼蟲(chóng)囊的數(shù)量、侵害人體的部位、機(jī)體本身功能狀態(tài)。尤其，自身機(jī)體對(duì)旋毛蟲(chóng)免疫抗體能力的強(qiáng)弱，同樣關(guān)系到此病的危害。多數(shù)情況，輕者癥狀不明顯，重者臨床癥狀復(fù)雜。診治不及時(shí)，將在發(fā)病后1周死亡。

目前，檢驗(yàn)肉質(zhì)中旋毛蟲(chóng)的方法，有經(jīng)典的肌肉壓片鏡檢法，以及國(guó)際旋毛蟲(chóng)病委員推薦的人工消化法。肌肉壓片鏡檢法有存在漏檢的可能，尤其對(duì)肌肉不成囊的偽旋毛蟲(chóng)檢出率較低。人工消化法是目前檢測(cè)旋毛蟲(chóng)病的“硬標(biāo)準(zhǔn)”，但存在操作復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)的問(wèn)題。

對(duì)此，20世紀(jì)90年代，出現(xiàn)一種新的檢測(cè)技術(shù)—膠體金免疫層析法，具有操作簡(jiǎn)單、使用便捷、檢出率快等優(yōu)點(diǎn)。鑒于此，筆者制備免疫層析試紙條，實(shí)驗(yàn)嘗試檢測(cè)豬體中的旋毛蟲(chóng)。同時(shí)，為驗(yàn)證此試紙條用于旋毛蟲(chóng)的檢疫效果，采集經(jīng)旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)感染后豬的血清和肉汁抗體，用試紙條檢測(cè)與鏡檢結(jié)果比較效果。

2　免疫層析試紙條檢測(cè)實(shí)驗(yàn)感染豬肉汁抗旋毛蟲(chóng)抗體的研究

2.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象

蟲(chóng)種：實(shí)驗(yàn)選用旋毛蟲(chóng)，為本地太原豬源旋毛蟲(chóng)，由小鼠傳代保種。

豬體：實(shí)驗(yàn)選用豬體，為2月齡健康本地豬。準(zhǔn)備用30頭，均采購(gòu)本地規(guī)模豬場(chǎng)。分為2組，1組為感染組，20頭；1組為正常組，10頭。

2.2豬體感染

實(shí)驗(yàn)選用豬體，為2月齡健康本地豬。實(shí)驗(yàn)組用豬20頭，取5000條旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)，每頭經(jīng)口腔感染。感染后1周，無(wú)菌剖殺。剖殺前，采取血清。剖殺后，取膈肌一小塊，壓片鏡檢，檢查有無(wú)旋毛蟲(chóng)感染。取實(shí)驗(yàn)豬臀肌、膈肌，將其分別密封放置在塑料管內(nèi)，置于-20℃貯藏。檢測(cè)時(shí)，待4℃下，制備肉汁。

2.3免疫層析試紙的制備

免疫層析試紙條的制備，用枸緣酸三鈉還原氯金酸，制備顆粒直徑為15 nm的膠體金溶液。測(cè)定膠體金的適宜SPA標(biāo)記量，制備膠體金標(biāo)SPA，用玻璃纖維吸附標(biāo)記物，冷凍干燥制成結(jié)合墊。將旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)排泄分泌（excre-tory-secretory，ES）抗原和人免疫球蛋白IgG（ Sigm。公司產(chǎn)品）在硝酸纖維素膜（NCM）上分別包被檢測(cè)（test，T）線和質(zhì)控（control，C）線，室溫干燥后用3%的脫脂奶粉封閉；將結(jié)合墊、包被好的NCM、吸水材料組裝在支持板上，并切割成3mm寬的試紙條，即為免疫層析試紙條，注明生產(chǎn)批次和時(shí)間，密封后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4檢測(cè)方法

準(zhǔn)備檢測(cè)時(shí)，取試紙條，將測(cè)試端插入待測(cè)樣本。樣本豬血清，1：32稀釋?zhuān)蝗庵?：2稀釋?zhuān)郎y(cè)10～20s后，有液體泳動(dòng)NCM上時(shí)，取試紙條平放，半小時(shí)內(nèi)觀察變化情況。一般情況下，檢測(cè)線和質(zhì)控線顯2條紫紅色線時(shí)，可判定為陽(yáng)性。僅一條質(zhì)控線顯紫紅色時(shí)，可判定為陰性。如果不出現(xiàn)質(zhì)控線，則表明試紙條失效。

2.5檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)5000旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)感染，用試紙檢測(cè)血清抗體，陽(yáng)性率為100%；用試紙檢測(cè)臀肌、膈肌肉汁抗體，陽(yáng)性率為100%。用試紙檢測(cè)正常對(duì)照組血清和肉汁，均為陰性。而且，膈肌、臀肌壓片鏡檢，蟲(chóng)體檢測(cè)率同樣高達(dá)100%。而且，每克腿肌，幼蟲(chóng)含量平均在231.36條。而正常組豬膈肌、腿肌，經(jīng)鏡檢，均未發(fā)現(xiàn)有旋毛幼蟲(chóng)。

3　結(jié)果討論

有學(xué)者嘗試以100、300、500條旋毛蟲(chóng)感染昆明小鼠，3組小鼠感染后不同時(shí)間用ELISA檢測(cè)肉汁與血清抗體水平均具有相關(guān)性；3組小鼠感染后6w用試紙條檢測(cè)時(shí)血清與肉汁抗體陽(yáng)性率均為100%。筆者還發(fā)現(xiàn)感染旋毛蟲(chóng)的小鼠隔肌蟲(chóng)荷與血清及肉汁抗體水平無(wú)相關(guān)性，每克小鼠肌肉僅含0.88條幼蟲(chóng)時(shí)，試紙條檢測(cè)時(shí)亦為陽(yáng)性。本文應(yīng)用試紙條對(duì)5 000旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)感染豬后10w的血清及肉汁檢測(cè)時(shí)的抗體陽(yáng)性率均為100%。

國(guó)外學(xué)者Nockler等，分別取200條、1000條、20000條旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)感染豬只，感染后2個(gè)月，宰殺取血清、膈肌肉汁，用ELISA檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)被感染血清、肉汁中的旋毛蟲(chóng)抗體水平有著很強(qiáng)的相關(guān)性。由此可得出這樣的結(jié)論，當(dāng)豬只宰殺后，血清采集較困難時(shí)，完全可經(jīng)酮體采集肉汁替代血清檢測(cè)抗體。國(guó)外學(xué)者Kapel等，經(jīng)同樣的感染實(shí)驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)心肌抗體最高。其次，舌肌、膈肌、咬肌。而本次實(shí)驗(yàn)，經(jīng)感染后的膈肌肉汁、臀肌肉汁，抗體檢測(cè)陽(yáng)性率均為100%；膈肌、臀肌，壓片鏡檢蟲(chóng)體檢出率同樣達(dá)100%。由此可見(jiàn)，經(jīng)鏡檢和試紙對(duì)旋毛蟲(chóng)病的檢測(cè)敏感程度相同。此外，使用的免疫層析試紙條，對(duì)囊蟲(chóng)病、弓形蟲(chóng)病等寄生蟲(chóng)病均為交叉反應(yīng)。同時(shí)，具有操作簡(jiǎn)單、便捷快速、不需專(zhuān)業(yè)技能等優(yōu)點(diǎn)，更便于推廣應(yīng)用。經(jīng)檢測(cè)被感染豬肌肉冷藏-20℃8個(gè)月的肉汁抗體，與新鮮豬肉抗體檢出率相似。

參考文獻(xiàn)

［1］ 王中全，王潔，崔晶，等.免疫層析試紙條檢測(cè)輕度感染小鼠肉汁抗旋毛蟲(chóng)抗體的研究［J］.中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2008，24 （1）：9-12.

［2］ 秦銀霞，崔晶，王中全.免疫層析試紙條診斷旋毛蟲(chóng)病的研究［J］.中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2007，（9）：866-868.

［3］ 王潔，崔晶，王中全，等.小鼠實(shí)驗(yàn)感染不同種旋毛蟲(chóng)后肉汁抗體水平的研究［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，30（5）：393-397.