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        新城疫病毒的最新研究進(jìn)展

        2016-02-03 16:52:52肖華平黃忍魏培楊瑞峰范建華
        中國畜牧獸醫(yī)文摘 2016年4期
        關(guān)鍵詞:獸醫(yī)學(xué)新城疫毒株

        肖華平黃 忍魏 培楊瑞峰范建華

        (1.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院,山東濰坊 26104;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所,江蘇揚(yáng)州 225125)

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        新城疫病毒的最新研究進(jìn)展

        肖華平1黃 忍1魏 培1楊瑞峰1范建華2

        (1.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院,山東濰坊 26104;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所,江蘇揚(yáng)州 225125)

        [摘 要]本文從新城疫病毒的理化特性、生物學(xué)特性,以及目前主要的診斷、鑒定方法等多方面進(jìn)行了綜述,為今后進(jìn)一步開展該病毒的防控技術(shù)研究,提供了科學(xué)的參考和依據(jù)。

        [關(guān)鍵詞]新城疫病毒理化特性生物學(xué)特性

        新城疫(Newcastledisease,ND)也稱亞洲雞瘟,是由血清1型禽副黏病毒(即新城疫病毒)引起禽類的一種以呼吸道、消化道黏膜出血為主要病變特征的高度接觸性、急性敗血性傳染病。除家禽外,至少有236種鳥可以自然或?qū)嶒?yàn)室感染,是危害養(yǎng)禽業(yè)最重要的傳染病之一,被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報(bào)告的傳染病,我國農(nóng)業(yè)部在2008年頒布的動物疫病病種目錄中,也將其列為一類動物疫病。

        1 理化特性

        新城疫病毒屬于副黏病毒科、副黏病毒亞科、腮腺炎病毒屬的成員,是Ⅰ型禽副粘病毒的代表株。

        1.1形態(tài)結(jié)構(gòu)

        病毒顆粒在電鏡下呈多形性,直徑為100~250 nm,常見有橫斷面100 nm左右的細(xì)絲。囊膜上的纖突長約8 nm,纖突能刺激宿主產(chǎn)生中和抗體。核衣殼直徑為17~18 nm,呈多盤繞的竹狀結(jié)構(gòu),圍繞中央孔中心軸呈螺旋對稱排列,主要成分是病毒、RNA及與其相連的蛋白質(zhì),其中RNA位于核衣殼中央。

        1.2抵抗力

        一般來說新城疫病毒對理化因素的抵抗力較強(qiáng),37℃可存活7~9d,雞糞內(nèi)病毒50℃可存活5個(gè)半月,雞肉內(nèi)的病毒15℃可存活98d,骨髓內(nèi)病毒可存活134d。NDV對酸、堿的耐受力較強(qiáng),在pH2和pH10條件下可存活數(shù)小時(shí);在ND爆發(fā)后經(jīng)28周仍能從蛋殼、羽毛和雞舍及雞舍內(nèi)物品中分離到NDV。3%~5%來蘇爾、酚和甲醛等化學(xué)試劑5min可將裸露的病毒粒子滅活,在37℃孵化器內(nèi),0.1%福爾馬林熏蒸6h便可將其滅活。

        1.3培養(yǎng)特性

        新城疫病毒易在9~11日齡雞胚絨毛尿囊膜上或尿囊腔中生長,特別是SPF雞胚經(jīng)常用來分離和復(fù)制病毒。因毒力不同,新城疫病毒致死雞胚的時(shí)間差異較大,強(qiáng)毒株常在24~72 h內(nèi)致死雞胚,呈現(xiàn)全身性出血性病變及腦炎。

        2 生物學(xué)活性

        2.1血凝性

        由于新城疫病毒其囊膜表面的HN糖蛋白與紅細(xì)胞表面的受體結(jié)合,新城疫病毒可凝集所有兩棲類、爬行類、禽類及小鼠、豚鼠的紅細(xì)胞,但凝集牛、綿羊、豬、馬及人O型血紅細(xì)胞的能力則隨毒株或血清型的不同而異。

        2.2神經(jīng)氨酸酶活性

        神經(jīng)氨酸酶是HN蛋白的一部分,該酶的明顯作用是將病毒逐漸從紅細(xì)胞上洗脫下來。有研究指出該酶還可作用于受體位點(diǎn),使F蛋白充分接近細(xì)胞而發(fā)生病毒與細(xì)胞膜的融合。根據(jù)病毒凝集的雞紅細(xì)胞洗脫率可將新城疫病毒分離株分為快洗脫型和慢洗脫型。

        2.3細(xì)胞融合與溶血活性

        新城疫病毒和其他副粘病毒可通過同一機(jī)制引起紅細(xì)胞溶解或細(xì)胞融合。在病毒復(fù)制時(shí),病毒囊膜附著于細(xì)胞表面的受體位點(diǎn),進(jìn)而引起病毒囊膜與細(xì)胞膜的融合,進(jìn)而導(dǎo)致兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的融合。僵硬紅細(xì)胞膜常因與病毒之間的膜融合而導(dǎo)致溶解。同血凝活性一樣,細(xì)胞融合與溶血活性也可被特異性抗血清所抑制。

        2.4其他生物學(xué)活性

        新城疫病毒不僅有誘導(dǎo)干擾素生成的作用,還具有抗腫瘤免疫、引起細(xì)胞凋亡的特性。因此這使NDV在腫瘤治療及有關(guān)衰老機(jī)理的研究等方面?zhèn)涫苤匾暋?/p>

        3 新城疫的診斷與鑒定

        3.1血清學(xué)診斷

        引起家禽傳染病的某些病毒,例如雞新城疫病毒、A 型禽流感病毒,由于具有血凝素,可以使雞或其他一些動物的紅細(xì)胞發(fā)生凝集,稱為紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。如果在這些病毒懸液中先加入特異性的免疫血清,則病毒凝集紅細(xì)胞的作用被抑制,稱為紅細(xì)胞凝集抑制現(xiàn)象。紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)常用于測定病毒的含量,例如常用于新城疫病毒初步診斷的HA和HI試驗(yàn)。

        3.2單克隆抗體技術(shù)

        Alexander 等應(yīng)用針對表面糖蛋白的單克隆抗體來進(jìn)行強(qiáng)毒株的鑒定和分型,以及區(qū)別抗原性的變異。曹殿軍等用單克隆抗體對強(qiáng)、弱毒株的鑒定進(jìn)行了研究。他們所建立的單克隆抗體1F10、6G2、2A7及1F1與中國標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒F48E9、6 株分離的黑龍江強(qiáng)毒株及Ⅰ系毒呈強(qiáng)陽性反應(yīng),而與LaSota 和V4 等弱毒株呈陰性反應(yīng),證明所建立的單抗是具有強(qiáng)毒特異性的單抗。于圣青、陳昌海和盧建紅等建立了從臨床樣品中快速診斷NDV 強(qiáng)毒感染的單抗夾心ELISA。吳紅專等在單抗夾心ELISA 和單抗PEG2ELISA 的基礎(chǔ)上首次建立了快速診斷NDV 強(qiáng)毒感染的EL ISA 試劑盒。單克隆抗體試劑盒能快速確定雞群中是否存在強(qiáng)毒感染而不進(jìn)行病毒分離和生物學(xué)試驗(yàn),且操作方便。因此,它在非典型新城疫的確診、強(qiáng)毒感染檢測及新城疫流行病學(xué)研究等方面具有廣闊應(yīng)用前景。

        3.3RNA 指紋圖譜法

        Mcmillar 等首先用RNA 指紋圖譜法對LaSota 株進(jìn)行了分析。其方法是用T1Rnase 酶降解病毒RNA,然后在聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行二維電泳并放射自顯影,得到RNA 各片段的分布圖。隨后他們又對許多株進(jìn)行了分析,確定了其圖譜和同源性。由此提出,RNA 指紋圖譜法可作為NDV 檢測和分析的一種手段。

        3.4核酸探針技術(shù)

        JareckiBlack 設(shè)計(jì)了2 個(gè)探針,該探針的長度為21 個(gè)堿基,與強(qiáng)毒株的F 蛋白裂解位點(diǎn)基因互補(bǔ),可與11 個(gè)速發(fā)性毒株、5 個(gè)中發(fā)性毒株的RNA 雜交,而不與所有7 個(gè)弱毒株的RNA 雜交,說明該探針能將弱毒株從強(qiáng)毒和中毒中區(qū)分出來。Angela利用RTPCR 擴(kuò)增出362 bp 的包括F 蛋白裂解位點(diǎn)序列的片段,制備成了相應(yīng)的探針,并用PCR 產(chǎn)物同型特異性探針來區(qū)分德國流行的強(qiáng)、弱毒株。賀東生等根據(jù)F0基因的高度區(qū)特異位點(diǎn),設(shè)計(jì)并合成了一段含48 bp 的寡核苷酸,經(jīng)光生物素標(biāo)記后制備探針,成功地雜交檢測了NDV 強(qiáng)毒株和弱毒株。用核苷酸探針方法鑒別NDV 毒株,關(guān)鍵在于被標(biāo)記的寡核苷酸的設(shè)計(jì),要求寡核苷酸處于高變區(qū)并與弱毒株的同源性差別大。寡核苷酸探針能特異地鑒別強(qiáng)、弱毒株,在臨床診斷和進(jìn)出口檢疫等方面都有較大的潛在用途。

        3.5RT-PCR 技術(shù)

        Kant 等用RT-PCR 對11個(gè)新城疫強(qiáng)毒株、4 個(gè)新城疫弱毒株進(jìn)行擴(kuò)增,該方法與傳統(tǒng)方法檢測結(jié)果基本吻合,且不需要雞胚接種,節(jié)省了時(shí)間,24 h 內(nèi)可出結(jié)果,為新城疫毒株的區(qū)別診斷提供了手段。閻玉河等根據(jù)新城疫毒株基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及毒株F0蛋白裂解位點(diǎn)的序列差異設(shè)計(jì)了2 對引物,建立了快速診斷新城疫并能鑒別新城疫強(qiáng)、弱毒株的RT-PCR 技術(shù);該法不僅可以對雞胚尿囊液進(jìn)行檢測,還可以直接用病雞組織勻漿進(jìn)行檢測,并具有較好的特異性和靈敏性。曹殿軍等根據(jù)新城疫毒株的F 基因的核苷酸序列差異,分別設(shè)計(jì)合成了兩組引物,建立了可以迅速鑒別NDV強(qiáng)、弱毒株的RT-PCR 方法,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程可在5 h 內(nèi)完成;他們還進(jìn)一步建立了直接從組織病料中檢測并鑒別強(qiáng)、弱毒株的方法。RT-PCR技術(shù)由于靈敏度高,特異性好,能夠區(qū)別強(qiáng)、弱毒株,在新城疫的診斷和流行病學(xué)普查方面頗具潛力。

        參考文獻(xiàn)

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