王紅光鄒 清

（1.重慶市潼南區(qū)玉溪鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 402674；2.重慶市潼南區(qū)塘壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 402678）

潼南區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查

王紅光1鄒 清2

（1.重慶市潼南區(qū)玉溪鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 402674；2.重慶市潼南區(qū)塘壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 402678）

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌引起的以保育階段仔豬多發(fā)性漿膜炎為特征的一種傳染病，表現(xiàn)為不同程度的漿膜炎和體腔積液癥狀；該菌位于健康仔豬上呼吸道，有 15 個(gè)血清型，極易產(chǎn)生耐藥性。豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病等免疫抑制性疾病的隱性感染繼發(fā)該病而引起保育仔豬大規(guī)模死亡的病例報(bào)道較多，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的健康發(fā)展及規(guī)模豬場(chǎng)養(yǎng)殖效益。目前，提高飼養(yǎng)管理及使用敏感抗生素是該病的主要防控方式。

本文通過對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)實(shí)地調(diào)查并結(jié)合電話采訪，采用副豬嗜血桿菌正向間接血凝試劑盒對(duì)重慶市渝東地區(qū)3個(gè)區(qū)縣規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，并對(duì)疑似病仔豬采集跗關(guān)節(jié)液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室分離鑒定及藥敏試驗(yàn)，為了解該地區(qū)規(guī)

1 材料與方法

1.1 主要藥品和試劑

副豬嗜血桿菌正向間接血凝試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所產(chǎn)品；胰蛋白大豆培養(yǎng)基、嗜血桿菌屬培養(yǎng)用 V 因子試劑盒、微量生化發(fā)酵管、藥敏試紙盒，均為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品。

1.2 調(diào)查區(qū)域和待檢樣本

重慶市渝東地區(qū)云陽縣、梁平縣、萬州區(qū)3個(gè)區(qū)縣存欄30～200頭左右母豬的規(guī)模豬場(chǎng) 30～70 日齡仔豬。采用前腔靜脈采血方法收集血液樣本。分離病料來自疑似病仔豬跗關(guān)節(jié)液。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

購自重慶市種豬場(chǎng)榮昌縣石河麒豪分場(chǎng)健康正常的 6 頭體重12 kg/頭左右榮昌小公豬。

1.4 臨床調(diào)查

采取描述流行病學(xué)調(diào)查法對(duì) 16個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌免疫、感染及防控措施等進(jìn)行臨床調(diào)查；編號(hào)，登記，備用。同時(shí)，按 5個(gè)/區(qū)縣規(guī)模豬場(chǎng)對(duì)被調(diào)查的 3 個(gè)區(qū)縣共 15 個(gè)30～200 頭母豬的規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行電話采訪，編號(hào)并記錄調(diào)查結(jié)果，備用。

1.5 渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)檢測(cè)

1.5.1 血液樣本采集和制備

按 3～6 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)/區(qū)縣、10～25 個(gè)血樣/規(guī)模豬場(chǎng)、3～5 mL/頭仔豬對(duì)被采樣豬場(chǎng)的 30～70 日齡保育仔豬前腔靜脈采血，編號(hào)，靜置 15～30 min，4 ℃靜置傾斜過夜。取上層液體 5 000 r/ min 離心 15 min，取上清液，編號(hào)4℃保存，備用。

1.5.2 血清樣本的副豬嗜血桿菌血清學(xué)檢測(cè)

采用副豬嗜血桿菌正向間接血凝試驗(yàn)診斷試劑盒。具體操作及判定標(biāo)準(zhǔn)參照魏光河等的報(bào)道。

1.6 疑似菌株的分離和藥敏試驗(yàn)

1.6.1 培養(yǎng)基的制備

參照莎莎等制備胰蛋白大豆瓊脂（TSA）、胰蛋白大豆肉湯、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，無菌檢驗(yàn)并4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6.2 疑似菌株的分離鑒定

參照魏光河、莎莎等對(duì)副豬嗜血桿菌正向血凝試驗(yàn)呈強(qiáng)陽性及陽性豬只的關(guān)節(jié)液樣品從顯微形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)等作實(shí)驗(yàn)室副豬嗜血桿菌分離鑒定。統(tǒng)計(jì)并記錄分離菌株數(shù)量，命名及編號(hào)，備用。

1.6.3 分離菌株藥敏試驗(yàn)

參照魏光河對(duì)疑似菌株作紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)，重復(fù)1次，取其平均值作為試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參考杭州天和微生物試劑有限公司《藥敏實(shí)驗(yàn)紙片法的抑菌范圍解釋標(biāo)準(zhǔn)》推薦的紙片擴(kuò)散標(biāo)準(zhǔn)。

1.7 渝東地區(qū)三區(qū)縣及各規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌陽性率差異分析

采用 SPSS17.0.1 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)3 區(qū)縣副豬嗜血桿菌感染率作單因子方差分析，判定標(biāo)準(zhǔn)：P>0.05，差異不顯著；P<0.05，判定為差異顯著；P<0.01，差異極顯著。

2 結(jié)果

重慶渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌病的臨床調(diào)查調(diào)查可知，三區(qū)縣養(yǎng)豬業(yè)集約化程度、養(yǎng)殖水平總體均偏低；青霉素類、四環(huán)素類、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類藥品及中草藥提取物注射液為該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)使用頻率較高的藥品。

3 討論

（1）整個(gè)被調(diào)查地區(qū)副豬嗜血桿菌陽性率平均為19.2%，初步說明該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的感染總體偏低，這和該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低下，還處于傳統(tǒng)養(yǎng)殖的散養(yǎng)至初步集約化發(fā)展的過渡階段，各種豬只的貿(mào)易相對(duì)較滯后，外源性疾病尤其以圓環(huán)病毒感染、豬繁殖與呼吸綜合征等免疫抑制性疾病相對(duì)較少有關(guān)。本文80.6%的自繁自養(yǎng)及種豬大部分購自本地區(qū)的臨床調(diào)查結(jié)果印證了該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低。3區(qū)縣各規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌陽性率差異不顯著P>0.05，與3區(qū)縣75%的被調(diào)查豬場(chǎng)均為非標(biāo)準(zhǔn)化豬舍及粗放式養(yǎng)殖直接相關(guān)。

（2）4份副豬嗜血桿菌血清學(xué)陽性關(guān)節(jié)液共分離鑒定出 3 株疑似副豬嗜血桿菌，75%的一致性證實(shí)了副豬嗜血桿菌正向血凝診斷試劑盒的靈敏和準(zhǔn)確性。由于跗關(guān)節(jié)液的采集相對(duì)不易操作及應(yīng)激較大，豬場(chǎng)負(fù)責(zé)人不配合采集工作是本次關(guān)節(jié)液樣本數(shù)相對(duì)較少的直接原因，沒能較全面反應(yīng)和了解渝東3區(qū)縣副豬嗜血桿菌的實(shí)驗(yàn)室診斷感染率為本次研究的不足。

（3）藥物使用頻率直接影響規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌耐藥程度。3株疑似副豬嗜血桿菌分離菌株對(duì)第3代頭孢類藥物高度敏感；對(duì)四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉素類明顯耐藥，這與本文臨床調(diào)查獲知四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉類為該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)高頻率使用藥品結(jié)果一致。該3株分離菌株與魏光河分離的重慶渝西株、徐成剛分離的廣東株藥敏譜各異，這與副豬嗜血桿菌血清型多、易耐藥等病原特點(diǎn)有關(guān)。