夏良華

（內(nèi)蒙古赤峰市巴林左旗碧流臺鎮(zhèn)動物防疫站，內(nèi)蒙古赤峰 025458）

牛無乳鏈球菌的危害、檢測方法及防治

夏良華

（內(nèi)蒙古赤峰市巴林左旗碧流臺鎮(zhèn)動物防疫站，內(nèi)蒙古赤峰 025458）

1 無乳鏈球菌的危害

無乳鏈球菌是引起奶牛乳腺炎的主要病原菌之一。乳腺炎是嚴(yán)重危害畜群生產(chǎn)的一類疾病，它雖不能造成大批的畜群死亡，卻是影響全世界奶牛產(chǎn)業(yè)最重大的經(jīng)濟(jì)問題之一，奶牛乳腺炎的發(fā)生直接影響著牛奶質(zhì)量，從而嚴(yán)重地威脅著人類的健康。

2 無乳鏈球菌的檢測方法

馬保臣等的研究表明，在無乳鏈球菌的16SrRNA和23SrRNA之間的區(qū)域設(shè)計3對引物，建立了檢測無乳鏈球菌的多重PCR方法。結(jié)果表明，利用多重PCR培養(yǎng)法對無乳鏈球菌的檢測與傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)法的檢測的結(jié)果基本一致，敏感性差異不顯著，用PCR方法鑒定細(xì)菌，選取的擴(kuò)增片段是保守的，但在不同種的水平上是有一定差異的。

賈玉萍等建立了巢式PCR檢測無乳鏈球菌的方法，她們利用了鏈球菌屬16SrRNA基因的保守區(qū)設(shè)計通用引物作為鏈球菌屬的陽性控制，在保守區(qū)內(nèi)的可變區(qū)設(shè)計無乳鏈球菌的特異的引物。通過DNA提取、引物設(shè)計與合成、PCR擴(kuò)增、敏感性實驗、無乳鏈球菌檢測等一系列步驟，得出擴(kuò)增后均產(chǎn)生明顯的目的條帶，用含無乳鏈球菌101、102和103CFU/ml的奶樣過夜培養(yǎng)后，通用引物和特異引物PCR擴(kuò)增結(jié)果均為陽性，這充分說明了此方法具有較高的靈敏性和特異性。

無乳鏈球菌分離培養(yǎng)所需的條件比較嚴(yán)格，操作不當(dāng)就會造成假陰性的發(fā)生而妨礙治療，上述的方法可以解決這些問題，利用鏈球菌屬的16SrRNA基因，在保守區(qū)設(shè)計出通用引物可以更好地進(jìn)行檢測，從而正確的指導(dǎo)臨床用藥。另一方面，無乳鏈球菌感染的初期不引起明顯的變化，而用此方法經(jīng)過夜培養(yǎng)后，可檢測到1CFU/ml的鏈球菌，這對于早期預(yù)防和監(jiān)測都具有十分重要的意義。

目前，臨床上多用常規(guī)的CAMP法來檢測無乳鏈球菌，這樣不僅費時費力，而且還不能滿足臨床快速檢測的需要。蘇桂華等研究的方法是：取2～3個菌落混懸于抗原浸出液中，在35℃下溫育10～15min備用，然后，將無乳鏈球菌膠乳試劑滴入使用卡的圓圈內(nèi)1滴，再加1滴備好的抗原浸出液，混合后搖勻，如果在2min內(nèi)出現(xiàn)凝集即為陽性，操作非常簡便、快速。結(jié)果也容易判斷。因為此方法是建立在抗原抗體結(jié)合的基礎(chǔ)上的，因此具有很高的敏感性和特異性，在臨床應(yīng)用中可以作為檢測的一種輔助手段。

3 無乳鏈球菌的防治及耐藥性

致病性鏈球菌可導(dǎo)致人和動物的各種化膿性疾病、肺炎、乳腺炎、敗血癥等疾病的發(fā)生，對人畜的健康造成極大的危害，已引起了人們的高度重視。王麗平等研究表明，紅霉素等作為青霉素藥物的替代藥物是治療致病性鏈球菌感染的有效藥物。尤其是那些對?內(nèi)酰胺酶類抗生素過敏的孕婦，可選用紅霉素作為產(chǎn)前預(yù)防鏈球菌感染的抗菌藥物。鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥機(jī)制主要是由于：（1）核糖體靶位點改變，大環(huán)內(nèi)酯耐藥性鏈球菌合成核糖體甲基化酶，使23sRNA的特定腺嘌呤甲基化而阻斷大環(huán)內(nèi)酯類抗生素與核糖體的結(jié)合。（2）mefA基因編碼特異大環(huán)內(nèi)酯類外排機(jī)制增強(qiáng)，菌株主動將細(xì)胞內(nèi)抗生素濃度泵出而耐藥。（3）23rRNA和L4核糖體及L22蛋白突變。一個國家和地區(qū)的耐藥性的地理范圍和嚴(yán)重程度造成了發(fā)病率的不同，因此，應(yīng)對流行株的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)一步了解，才能更好地預(yù)防和控制耐藥性的產(chǎn)生。

4 無乳鏈球菌的疫苗應(yīng)用研究

應(yīng)用抗生素治療雖然對由無乳鏈球菌引起的疾病有效，但是維持期短，并且有一定的局限性，大量應(yīng)用抗生素會使得動物產(chǎn)生耐藥性，為今后的治療埋下隱患。而利用疫苗來對無乳鏈球菌病進(jìn)行預(yù)防已經(jīng)是一種切實有效的手段，同時，利用疫苗還有許多的優(yōu)點，如：（1）不發(fā)生藥物殘留問題（2）有助于降低無乳鏈球菌的感染程度（3）操作簡便且費用低廉。接種疫苗的目的就是增加機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)，來阻止、中和并殺滅無乳鏈球菌。

邢玫等2007年的研究表明，現(xiàn)有的鏈球菌的疫苗研究比較少，而針對無乳鏈球菌的疫苗也不十分理想。使用甲醛滅活后的無乳鏈球菌對奶牛的保護(hù)力很差，而國外有人用血纖維蛋白溶酶受體蛋白（Gapc）的基因編碼無乳鏈球菌細(xì)胞表面相關(guān)的Gapc蛋白，結(jié)果證明，Gapc的基因工程疫苗免疫后對無乳鏈球菌引起的疾病無保護(hù)性，Gapc與Mig是由無乳鏈球菌SDG8菌株分泌的兩種蛋白，應(yīng)用Gapc和Mig重組苗免疫后，Gapc能使SDG8含量明顯降低，但是Mig苗卻不能使其降低，因此，這一方面還有必要進(jìn)一步的研究。

無乳鏈球菌根據(jù)細(xì)胞壁多糖及表面抗原的不同可將其分為Ia、Ib、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ9個血清型，這當(dāng)中起主要致毒作用的是Ⅲ型莢膜多糖，因此，現(xiàn)在一般應(yīng)用Ⅲ型莢膜多糖共價耦聯(lián)破傷風(fēng)類毒素等異源蛋白制備的疫苗，能夠產(chǎn)生較高的免疫保護(hù)性。另外，以無乳鏈球菌菌體表面的蛋白質(zhì)成分為抗原制備疫苗，接種后也能產(chǎn)生理想的效果。

5 小結(jié)與討論

近年來，隨著我國生態(tài)環(huán)境的保護(hù)，畜牧業(yè)生產(chǎn)逐漸向規(guī)?；⒓s化發(fā)展，飼養(yǎng)數(shù)量也不斷擴(kuò)大，尤其是家禽和豬、牛的飼養(yǎng)正在趨向自動化、專業(yè)化、機(jī)械化的管理方式。人們生活水平不斷提高，需要畜禽產(chǎn)品的種類和數(shù)量不斷增加。如果出現(xiàn)畜禽類疾病的暴發(fā)和流行，不但要造成較大的經(jīng)濟(jì)損失，還會對人類的健康帶來嚴(yán)重影響，甚至死亡。更會造成人們的高度恐慌，如：“瘋牛病”，“禽流感”。人們懼怕因食用這種畜禽產(chǎn)品而造成感染，還會有許多人畜共患的傳染病等高發(fā)病的流行。為保證人們的健康，讓人們真正吃上“放心肉”和畜禽產(chǎn)品，保護(hù)畜牧業(yè)的持續(xù)發(fā)展，就要尋求更好的途徑，控制畜禽的各類疾病。

綜上所述，加強(qiáng)無乳鏈球菌的流行病學(xué)的調(diào)查與分析，可以為診斷提供依據(jù)，也能為擬訂防治措施提供依據(jù)，建立快速、靈敏、簡便的診斷方法，研制出符合國情的實用、有效的技術(shù)，開發(fā)各種疫苗、中西獸藥等都是未來畜禽病防治工作的重點。今后，我們要更加深入的研究無乳鏈球菌，掌握它基因變異的各種情況，為認(rèn)識和消滅病原，預(yù)防、診斷和控制疾病，做出更大的貢獻(xiàn)。