陳光榮方 鑫

（1.安徽省蕪湖市鳩江區(qū)清水街道農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，安徽蕪湖 241060；

2.安徽省锏陵市義安區(qū)鐘鳴鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，安徽锏陵 244122）

雞場(chǎng)禽白血病感染的情況調(diào)查

陳光榮1方 鑫2

（1.安徽省蕪湖市鳩江區(qū)清水街道農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，安徽蕪湖 241060；

2.安徽省锏陵市義安區(qū)鐘鳴鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，安徽锏陵 244122）

為了解地方散養(yǎng)土雞場(chǎng)禽白血病的感染情況，挑選本地區(qū)兩個(gè)產(chǎn)蛋率較低的散養(yǎng)土雞場(chǎng)，選擇34周齡散養(yǎng)土雞，單獨(dú)隔離，分別采集363份蛋清樣品和泄殖腔棉拭子樣品，對(duì)樣品分別進(jìn)行p27抗原檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛋清樣品陽(yáng)性率為43.8%（159/363），高于泄殖腔棉拭子36.3%（113/363）。調(diào)查表明，地方散養(yǎng)土雞場(chǎng)已存在禽白血病感染情況。在選擇檢測(cè)樣品方面，蛋清是一種更優(yōu)的材料。

禽白血病 p27抗原

根據(jù)病毒中和試驗(yàn)宿主范圍、囊膜糖蛋白的特性以及其他一系列標(biāo)準(zhǔn)，將禽白血病病毒劃分為A到J 10個(gè)亞群，其中分離自雞的有6個(gè)亞群（A、B、C、D、E、J）。1997年禽白血病在世界范圍內(nèi)大爆發(fā)，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，禽白血病開(kāi)始受到養(yǎng)禽業(yè)的高度重視并成為研究的熱點(diǎn)。為了了解本地區(qū)散養(yǎng)土雞禽白血病感染情況，我們對(duì)本地區(qū)兩個(gè)產(chǎn)蛋率較低散養(yǎng)土雞場(chǎng)進(jìn)行了禽白血病感染情況調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 檢測(cè)樣品

從本地區(qū)兩個(gè)散養(yǎng)土雞場(chǎng)選擇34周齡散養(yǎng)土雞采集泄殖腔棉拭子363份、雞蛋蛋清363份。

1.1.2 試劑盒

禽白血病病毒p27抗原檢測(cè)試劑盒購(gòu)自IDEXX公司。

1.1.3 試劑及溶液

PBS：0.01M，pH7.2；PBST：PBS中加0.5%Tween-20。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集與預(yù)處理

對(duì)34周齡散養(yǎng)土雞分別采集母雞蛋清和泄殖腔棉拭子。

取蛋清200ul，備用；泄殖腔棉拭子置于試管中，加入1ml滅菌 PBS（pH7.2），反復(fù)凍融3次，上清備用。

1.2.2 ELISA試劑盒檢測(cè)ALV抗原

蛋清和泄殖腔棉拭子樣品，采用IDEXX公司禽白血病抗原檢測(cè)試劑盒進(jìn)行p27抗原檢測(cè)。

結(jié)果判定：陽(yáng)性對(duì)照的平均值減去陰性對(duì)照的平均值必須大于0.200，陰性對(duì)照平均值必須小于或等于0.150。

被檢樣品中是否含有P27抗原與其A650和陽(yáng)性對(duì)照的平均值的值有關(guān)，陽(yáng)性對(duì)照樣品已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化處理，顯示顯著的抗原水平（大約lOng/m1）。若S/P＜0.2，樣品為陰性；若S/P＞O.2，樣品為陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

從本地區(qū)兩個(gè)散養(yǎng)土雞場(chǎng)選擇34周齡散養(yǎng)土雞，針對(duì)同一只母雞同時(shí)采集蛋清和泄殖腔棉拭子為試驗(yàn)樣品，比較二者之間的符合情況。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A雞場(chǎng)雞群泄殖腔棉拭子樣品的陽(yáng)性率為31.6%，蛋清樣品的陽(yáng)性率為43.7%。其中蛋清樣品和泄殖腔棉拭子皆為陽(yáng)性的有45個(gè)，38個(gè)通過(guò)泄殖腔棉拭子為陰性而蛋清為陽(yáng)性，15個(gè)泄殖腔棉拭子為陽(yáng)性而蛋清為陰性。

B雞場(chǎng)雞群中泄殖腔棉拭子樣品的陽(yáng)性率為30.6%，蛋清樣品的陽(yáng)性率為43.9%；其中蛋清樣品和泄殖腔棉拭子皆為陽(yáng)性的有41個(gè)，35個(gè)通過(guò)泄殖腔棉拭子為陰性而蛋清為陽(yáng)性，12個(gè)泄殖腔棉拭子為陽(yáng)性而蛋清為陰性。兩組數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)蛋清樣品陽(yáng)性率為43.8%（159/363），高于泄殖腔棉拭子36.3%（113/363）。

3 討論

（1）本試驗(yàn)在選擇不同樣品檢測(cè)p27抗原的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)蛋清樣品的抗原陽(yáng)性率43.8%（159/363），高于泄殖腔棉拭子的陽(yáng)性率36.3%（113/363），這一結(jié)果與Crittenden［1］等研究結(jié)果一致。這可能是由于檢測(cè)樣品來(lái)源不同及其所含ALV抗原的含量差異造成的。蛋清可直觀地檢測(cè)母雞先天性排毒，肛拭在采集過(guò)程中不可避免地附帶有機(jī)體的其他組織細(xì)胞，其ALV抗原有可能來(lái)自于內(nèi)源性ALV和先天性感染的外源性ALV，那么，肛拭檢測(cè)的陽(yáng)性有可能一部分來(lái)自于內(nèi)源性病毒的感染。而蛋清中ALV抗原主要來(lái)源于外源性的ALV［2］。如果雞群中既有外源性白血病病毒的感染，又有內(nèi)源性病毒的存在，那么，泄殖腔棉拭子檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果就有可能一部分來(lái)源于內(nèi)源性病毒感染。在種雞場(chǎng)的凈化過(guò)程中，關(guān)鍵是根除有傳染性可引起疾病的外源性白血病病毒，同時(shí)盡量減少因誤淘汰而給種雞場(chǎng)帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失。在選擇檢測(cè)樣品方面，蛋清是一種較好的材料。相對(duì)而言，肛拭中病毒的含量較少時(shí)，利用DAS-ELISA可能檢測(cè)不到ALV群特異性抗原，造成肛拭比蛋清材料檢出低，同時(shí)，由于人為的誤差泄殖腔棉拭子有時(shí)不能真實(shí)地反映雞ALV的感染情況，那么，作為比較理想的材料，應(yīng)選擇蛋清。

（2）張冰等［3］通過(guò)對(duì)帶毒母雞排毒時(shí)間的觀察發(fā)現(xiàn)，在產(chǎn)蛋的前4周，蛋清中都能查到ALV群特異性抗原，而在產(chǎn)蛋的中后期，部分雞產(chǎn)的蛋檢測(cè)不到其群特異性抗原。因?yàn)橄忍煨愿腥镜碾u對(duì)病毒產(chǎn)生免疫耐受，并且感染的母雞能在蛋中持續(xù)間歇性排毒并將病毒傳給子代［4、5］。張勝斌［6］等對(duì)三黃雞各個(gè)日齡段雞只的p27抗原檢測(cè)陽(yáng)性率分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在5周齡前p27抗原的檢測(cè)陽(yáng)性率0%，隨著日齡的增大，陽(yáng)性率也慢慢升高。在22周齡時(shí)達(dá)到第一個(gè)高峰值27.27%（也稱(chēng)檢測(cè)敏感期），然后隨即下降。到29周齡時(shí)又突然上升，一直到44周齡都維持在相對(duì)比較高的陽(yáng)性率，特別是34周齡時(shí)達(dá)到第二個(gè)峰值。因此我們選擇34周齡散養(yǎng)土雞，采集樣品進(jìn)行檢測(cè)。

（3）禽白血病的流行給全國(guó)的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的損失，因而有效防控外源性ALV感染顯得尤為重要。調(diào)查表明，地方散養(yǎng)土雞場(chǎng)已存在禽白血病感染情況。迄今為止該病尚無(wú)有效的疫苗和治療藥物，只有通過(guò)檢測(cè)及時(shí)淘汰污染雞，建立凈化雞群才能減小損失。

［1］張冰，宋勤葉.種雞場(chǎng)雞白血病凈化的研究［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2002，38（5）：3-5.

［2］張勝斌，吳天威.地方優(yōu)良雞種禽白血病病毒感染調(diào)查及凈化［J］.中國(guó)家禽，2010，32（12）：11-16.