吳生兵，曹　健，汪天明，周美啟

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)　針灸基礎(chǔ)與技術(shù)安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥　230038；

2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院微生物教研室，安徽 合肥　230038)

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艾葉揮發(fā)油抗真菌及抗帶狀皰疹病毒的實(shí)驗(yàn)研究

吳生兵1，曹健1，汪天明2，周美啟1

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)針灸基礎(chǔ)與技術(shù)安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥230038；

2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院微生物教研室，安徽 合肥230038)

[摘要]目的觀察艾葉揮發(fā)油對絮狀表皮癬菌、白色念珠菌、新型隱球菌及帶狀皰疹病毒的抑殺作用。方法分別加入艾葉揮發(fā)油120 μL/mL，經(jīng)過10～60 min 6個不同時間后取出，再放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h后觀察真菌生長情況；將帶狀皰疹病毒置于培養(yǎng)皿中，分為艾葉揮發(fā)油大劑量(120 μL/mL)、中劑量(80 μL/mL)、小劑量(40 μL/mL)3組，分別觀察艾葉揮發(fā)油作用24、48、72、96、120、144 h后，艾葉揮發(fā)油對帶狀皰疹細(xì)胞抑制作用。結(jié)果艾熏30 min可殺滅絮狀表皮癬菌，40 min可殺滅白色念珠菌，60 min可殺滅新型隱球菌；艾葉揮發(fā)油各濃度組均能明顯抑制帶狀皰疹的細(xì)胞病變，其中尤以大劑量組(120 μL/mL)效果最好。結(jié)論艾葉揮發(fā)油是熏灸抗外科感染的物質(zhì)基礎(chǔ)，這可能是熏灸治療外科感染疾病的機(jī)制之一。

[關(guān)鍵詞]熏灸；艾葉揮發(fā)油；真菌；帶狀皰疹

熏灸是灸法的一種，是指將艾條一端或以艾絨置于特制的熏灸器內(nèi)點(diǎn)燃后，以其艾煙熏灸患處的一種施灸方法。安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院已故著名老中醫(yī)周德宜教授根據(jù)歷代相關(guān)文獻(xiàn)自1950年代始就著手熏灸技術(shù)的文獻(xiàn)整理和臨床研究，初步驗(yàn)證了熏灸技術(shù)在腳癬、帶狀皰疹等外科淺表感染性疾病中的治療作用。本項(xiàng)目組在此研究工作基礎(chǔ)上，觀察了艾葉揮發(fā)油對白色念珠菌、絮狀表皮癬菌、新型隱球菌等真菌和帶狀皰疹病毒抑殺作用，以期揭示熏灸抗外科淺表感染性疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1材料

1.1藥物及菌種艾葉購于安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院；白色念珠菌、絮狀表皮癬菌、新型隱球菌、帶狀皰疹病毒由安徽中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。

1.2儀器二氧化碳培養(yǎng)箱：日本三洋；倒置熒光顯微鏡：日本奧林巴斯。

2方法

2.1艾葉揮發(fā)油的制備[1]先將艾葉用蒸餾水浸泡，再按《中華人民共和國藥典》(2010年版)水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油。

2.2艾葉揮發(fā)油抑殺真菌研究將絮狀表皮癬菌、白色念珠菌、新型隱球菌置于培養(yǎng)皿中，分別加入艾葉揮發(fā)油120 μL/mL，經(jīng)過10～60 min 6個不同時間后取出，再放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h后觀察真菌生長情況。以肉眼觀察出現(xiàn)菌落用“+”表示真菌生長，無真菌生長用“-”表示。

2.3艾葉揮發(fā)油抗帶狀皰疹病毒研究將帶狀皰疹病毒置于培養(yǎng)皿中，分為艾葉揮發(fā)油大劑量(120 μL/mL)、中劑量(80 μL/mL)、小劑量(40 μL/mL)3組，分別觀察艾葉揮發(fā)油作用24、48、72、96、120、144 h后，艾葉揮發(fā)油對帶狀皰疹病毒的抑制作用。

3結(jié)果

3.1艾葉揮發(fā)油抑殺真菌研究艾葉揮發(fā)油作用30 min可殺滅絮狀表皮癬菌，40 min可殺滅白色念珠菌，60 min可殺滅新型隱球菌。結(jié)果表明，艾葉揮發(fā)油具有抑殺真菌作用。見表1。

表1　艾葉揮發(fā)油作用不同時間的抑殺真菌作用

注：“+”表示真菌生長，“-”表示無真菌生長。

3.2艾葉揮發(fā)油抗帶狀皰疹病毒研究艾葉揮發(fā)油大劑量在120 h內(nèi)具有明顯的抑制帶狀皰疹病毒的作用，艾葉揮發(fā)油中劑量在96 h內(nèi)具有明顯的抑制帶狀皰疹病毒的作用，而艾葉揮發(fā)油小劑量在72 h內(nèi)具有明顯的抑制帶狀皰疹病毒的作用。結(jié)果提示艾葉揮發(fā)油具有抗帶狀皰疹病毒作用，且劑量越大抑制作用越持久。見表2。

表2　艾葉揮發(fā)油抗帶狀皰疹病毒作用

注：+：示細(xì)胞病變?yōu)?5%以下，：示細(xì)胞病變>25%，≤50%，：示細(xì)胞病變>50%，≤75%，-：示無細(xì)胞病變。

4討論

既往研究表明，艾灸具有抗真菌及抗病毒作用。董艷等[2]采用艾灸熏治腳氣，取得良好療效，認(rèn)為運(yùn)用灸法治療可燥濕、通絡(luò)，祛邪外出。馬仁智等[3]認(rèn)為，灰指甲的病因病機(jī)與濕邪相關(guān)，治濕宜燥，艾葉苦辛溫燥，艾熏能促進(jìn)甲下及其周圍組織的血液循環(huán)，改善和提高局部營養(yǎng)，促進(jìn)指甲的新陳代謝，艾火高溫更是能直接殺滅不耐高熱的真菌，其采用熏灸治療灰指甲，獲滿意療效。宋小鴿、唐照亮等[4-5]觀察了艾灸對感染流行性出血熱病毒(epidemic hemorrhagic fever virus，EHFV)大鼠免疫功能及抗病毒作用的影響，研究結(jié)果表明，艾灸具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對EHFV抗原的吞噬功能，對EHFV大鼠具有促進(jìn)增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫黏附活性和產(chǎn)生抗體清除EHFV感染的作用，提示艾灸具有溫陽通絡(luò)、扶正祛邪，增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞和體液免疫功能的作用。熊光明等[6]采用艾灸神闕結(jié)合西藥治療寒濕型小兒輪狀病毒腸炎，并與單純西藥治療對照，結(jié)果表明雖然兩組總有效率相當(dāng)，但加用艾灸治療顯效率優(yōu)于單純西藥治療組(P<0.05)，認(rèn)為艾灸具有通經(jīng)活絡(luò)、溫中散寒、益肝腎、健脾止瀉、調(diào)氣活血的功效，可有效促進(jìn)人體的神經(jīng)體液調(diào)節(jié)作用，提高機(jī)體免疫力，從而改善胃腸功能活動，使腹瀉癥狀得到緩解并治愈。這些研究表明，艾灸能增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞和體液免疫功能的作用，具有抗真菌及病毒的作用。但在研究中并未區(qū)分艾灸的煙熏灸及艾葉燃燒產(chǎn)生的溫?zé)峋牡母髯宰饔脵C(jī)制。

近年來，越來越多研究者開始逐漸認(rèn)識到艾葉揮發(fā)油在艾灸中所發(fā)揮的作用。沈津湛等[7]認(rèn)為，艾煙具有燥濕殺菌、通經(jīng)消瘀止痛之功效，能有效治療帶狀皰疹，并具有病程短, 較少留有后遺神經(jīng)痛的優(yōu)點(diǎn)。孫捷等[8]認(rèn)為，通過藥煙的溫?zé)幔钙の赵黾樱幬镏边_(dá)病所，起到殺菌消炎止癢、改善微循環(huán)的作用；中藥燃燒后形成的煙油，起到保護(hù)創(chuàng)面，改善局部環(huán)境，并增加藥物與體表的接觸時間，達(dá)到促進(jìn)血供，改善代謝，有利于病變吸收的效果，從而有利于促進(jìn)皮膚屏障的恢復(fù)。

本研究在既往基礎(chǔ)上，首次探索性發(fā)現(xiàn)煙熏對真菌及病毒具有明顯的抑殺作用，認(rèn)為艾葉揮發(fā)油在治療淺表感染性疾病中發(fā)揮了作用，艾葉揮發(fā)油可能是熏灸技術(shù)治療外科淺表感染性疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)。為了排除艾灸溫?zé)峋牡淖饔?，觀察單純艾葉揮發(fā)油抗真菌及病毒的作用，筆者設(shè)計此次實(shí)驗(yàn)研究。本次研究結(jié)果表明，艾葉揮發(fā)油作用30 min可殺滅絮狀表皮癬菌，作用40 min可殺滅白色念珠菌，作用60 min可殺滅新型隱球菌，艾葉揮發(fā)油對真菌抑殺作用明顯。艾葉揮發(fā)油各濃度均能明顯抑制帶狀皰疹的細(xì)胞病變，其中尤以大劑量(120 μL/mL)效果最好，提示艾葉揮發(fā)油具有抗病毒作用。據(jù)此，筆者認(rèn)為艾葉揮發(fā)油是熏灸抗外科感染的物質(zhì)基礎(chǔ)，這可能是熏灸治療外科感染疾病的機(jī)制之一。而艾葉揮發(fā)油的作用機(jī)制可能是增強(qiáng)了機(jī)體細(xì)胞和體液免疫功能，具體機(jī)制將有待于進(jìn)一步研究闡釋。

參考文獻(xiàn):

[1]劉先華,周安,劉碧山,等.艾葉揮發(fā)油體內(nèi)外抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2006,13(8):25-26.

[2]董艷，李東方，宋超，等. 艾灸可治腳氣[J]. 新中醫(yī)，2009，41(3)：32.

[3]馬仁智，孟云鳳.艾灸治療灰指甲[J].中國民間療法，1996(1)：32.

[4]宋小鴿，唐照亮，產(chǎn)美英，等.艾灸對感染流行性出血熱病毒大鼠免疫功能及抗病毒作用的影響[J].針刺研究，1992(4)：267-269.

[5]唐照亮，宋小鴿，劉冰，等.艾灸對感染流行性出血熱病毒大鼠體液因素的影響[J]. 針刺研究，1992(4)：276-279.

[6]熊光明，孫彥.艾灸神闕結(jié)合西藥治療寒濕型小兒輪狀病毒腸炎臨床觀察[J]. 中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥雜志，2013，20(24)：52-53.

[7]沈津湛，龔云. 爐式熏灸器治療帶狀皰疹方法及機(jī)制探討[J]. 針灸臨床雜志，2000，16(3)：35-36.

[8]孫捷，劉明珠. 中藥藥煙熏灸治療局限性慢性濕疹臨床研究[J].中醫(yī)學(xué)報，2015，30(10)：1540.

收稿日期：(2015-10-31；編輯：曹健)

通信作者：周美啟，meiqizhou@163.com

作者簡介：吳生兵(1977-)，男，碩士，助理研究員

基金項(xiàng)目：第二批安徽省科普產(chǎn)品與科普創(chuàng)作示范團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目；安徽高?？蒲衅脚_創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目

[中圖分類號]R245.81[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.06.022