楊麗霞，王志程，李雪英，張邦能，郭　敏，姜良恩，劉銅華

(1.甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州730050； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029；3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000； 4.甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州730050；5.北京中醫(yī)藥大學(xué)， 北京100029)

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·實驗研究·

鐮形棘豆總黃酮對糖尿病KKAy小鼠血脂及瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素的影響*

楊麗霞1，王志程2，李雪英3，張邦能4，郭敏4，姜良恩3，劉銅華5

(1.甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州730050； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029；3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000； 4.甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州730050；5.北京中醫(yī)藥大學(xué)， 北京100029)

摘要目的：觀察鐮形棘豆總黃酮對2型糖尿病KKAy小鼠血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素的影響，探討其對糖尿病脂代謝的作用及機(jī)制。方法：將40只雄性SPF級KKAy小鼠隨機(jī)分為模型對照組，鐮形棘豆總黃酮低、中、高劑量組，吡咯列酮組5組，每組8只；另選8只C57BL/6J小鼠為正常對照組。正常對照組和模型對照組灌服生理鹽水，鐮形棘豆總黃酮低、中、高劑量組依次按100，200，400 μg/g體質(zhì)量灌胃，吡咯列酮組灌服10 μg/g吡咯列酮，1 d 1次，連續(xù)4周。4周后，眼眶靜脈取血，離心取血清。采用全自動生化分析儀測血清TC、TG、HDL-C、LDL-C，ELISA法檢測小鼠血清瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素。結(jié)果：與模型對照組對比，鐮形棘豆總黃酮各劑量組血脂變化不明顯，中、高劑量組的TG水平有降低趨勢，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與模型對照組對比，鐮形棘豆總黃酮低劑量組和吡咯列酮組瘦素、脂聯(lián)素升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。各藥物組抵抗素水平與模型對照組對比，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：鐮形棘豆總黃酮能夠促進(jìn)糖尿病小鼠瘦素、脂聯(lián)素的大量分泌，在一定程度上改善糖尿病小鼠脂代謝，預(yù)防胰島素抵抗。

關(guān)鍵詞鐮形棘豆總黃酮；2型糖尿??；KKAy小鼠；血脂；瘦素；脂聯(lián)素；抵抗素

近年來，隨著社會經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人們生活水平的不斷提高，肥胖和2型糖尿病已成為兩種常見的內(nèi)分泌和代謝疾病。研究顯示：肥胖是2型糖尿病的獨立危險因素，由肥胖引起的脂肪組織分泌脂肪因子失衡與2 型糖尿病的發(fā)生關(guān)系密切[1]。目前，已發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子主要有瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素、內(nèi)脂素、腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6等[1]。這些脂肪因子廣泛作用于胰島素靶細(xì)胞，通過影響胰島素細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，引起胰島素抵抗而導(dǎo)致機(jī)體糖、脂代謝異常。因此，調(diào)節(jié)脂肪因子代謝對于預(yù)防胰島素抵抗，防止糖、脂代謝異常具有重要意義。大量研究表明，植物黃酮類化合物在改善胰島素抵抗、降糖、降脂方面作用顯著[2-4]。本課題選用藏藥鐮形棘豆總黃酮為研究對象，通過觀察其對自發(fā)性2型糖尿病動物模型KKAy小鼠血脂指標(biāo)和脂肪因子瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素的影響，探討其在糖尿病脂代謝方面的作用及機(jī)制，為其臨床運(yùn)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1動物

7～8周齡SPF級雄性KKAy小鼠40只(空腹血糖均在7.0 mmol/L以上)，C57BL/6J小鼠8只，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK(京)2009-0004。動物飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)屏障級動物實驗室。KKAy小鼠采用高脂飼料喂養(yǎng)，C57BL/6J小鼠采用普通飼料喂養(yǎng)，飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，許可證號：SCXK(京)2009-0008。單籠飼養(yǎng)，每天自由飲水、攝食。

1.2藥品、試劑與儀器

鐮形棘豆，產(chǎn)地青海，由青海優(yōu)潤堂商貿(mào)有限責(zé)任公司提供；總黃酮由上海友思生物技術(shù)有限公司提取分離，純度為26.58%；鹽酸吡格列酮片，北京太洋藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號為130605。血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)生化試劑盒，北京利德曼生化股份有限公司產(chǎn)品，批號依次為408271H、408083F、407231F、406062D；瘦素、脂聯(lián)素 ELISA試劑盒，美國ALPCO公司產(chǎn)品，批號依次為020713，812RBL；抵抗素 ELISA試劑盒，捷克BioVendor公司產(chǎn)品，批號為CS103 VA-SS。2700型全自動生化儀，日本奧林巴斯公司產(chǎn)品；Bio-Rad 680型酶標(biāo)儀，美國伯樂公司產(chǎn)品。

1.3動物分組與給藥

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，設(shè)C57BL/6J小鼠為正常對照組，將KKAy小鼠分為模型對照組，鐮形棘豆總黃酮低、中、高劑量組，吡咯列酮組5組，每組8只。正常對照組和模型對照組灌服生理鹽水，鐮形棘豆總黃酮低、中、高劑量組依次按100,200,400 μg/g體質(zhì)量灌胃，吡咯列酮組灌服10 μg/g吡咯列酮，灌胃量為10 μL/g，所有藥品用生理鹽水配成所需的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，1 d 1次，連續(xù)4周。

1.4檢測指標(biāo)

灌胃4周后，禁食8 h，麻醉，取眼眶內(nèi)靜脈血液。血液靜置2 h后以4 ℃、3 500 r/min離心20 min,取血清，-20 ℃保存。采用全自動生化分析儀測血清TC、TG、HDL-C、LDL-C，ELISA法檢測小鼠血清瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素水平。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1各組小鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C對比

與正常對照組對比，模型對照組小鼠TC、TG、HDL-C均有不同程度地升高，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；LDL-C變化不明顯。與模型對照組對比，鐮形棘豆總黃酮各劑量組血脂指標(biāo)變化不明顯，中、高劑量組的TG水平有降低趨勢，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1各組小鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C對比

2.2各組小鼠瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素對比

與正常對照組對比，模型對照組小鼠瘦素、脂聯(lián)素水平顯著升高，抵抗素水平降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組對比，鐮形棘豆總黃酮低劑量組和吡咯列酮組的小鼠瘦素、脂聯(lián)素升高著，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。各藥物組抵抗素水平較模型對照組差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。

注：與正常對照組對比，*P<0.05；與模型對照組對比，#P<0.05。

3討論

糖尿病是危害人類健康的常見慢性病之一，在我國已成流行趨勢。2009年全國糖尿病調(diào)查結(jié)果顯示：2009年我國農(nóng)村人群糖尿病的發(fā)病率為8.2%，城市人群為11.4%，糖尿病患者高達(dá)9 200 萬，糖尿病前期患者1.48億，20歲以上成年人的糖尿病患病率平均為9.7%[5]。糖尿病的發(fā)病因素很多，機(jī)制復(fù)雜，胰島素抵抗是糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)[6]，因此，研究改善胰島素抵抗對于預(yù)防糖尿病等許多慢性疾病具有重要的意義。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，肥胖引起的脂肪因子分泌失衡與胰島素抵抗關(guān)系密切[7]。本課題主要研究了3個 脂肪因子：瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素。瘦素是一種脂肪組織分泌的激素，主要由皮下脂肪細(xì)胞分泌入血，與其受體結(jié)合，發(fā)揮控制食欲、促進(jìn)能量消耗的作用[8]。脂聯(lián)素是新發(fā)現(xiàn)的一種脂肪因子,被認(rèn)為是一種反映胰島素敏感性的標(biāo)志物，尤其是作為肝臟胰島素敏感性和脂質(zhì)含量的標(biāo)志物，不僅具有增強(qiáng)胰島素敏感性、抗炎、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等多種作用，還具有抑制肝臟的糖異生和調(diào)節(jié)肝臟脂肪酸代謝等作用，可逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗，有效改善2 型糖尿病[9]。抵抗素是一種可以對抗胰島素，使血糖水平升高，促進(jìn)脂肪細(xì)胞增生而導(dǎo)致肥胖發(fā)生的脂肪因子，與胰島素抵抗密切相關(guān)；可以抑制脂肪細(xì)胞中胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，使脂肪細(xì)胞內(nèi)游離脂肪酸含量明顯增加，并分泌入血，從而導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生，因此，有效控制血清抵抗素水平有助于治療2 型糖尿病[10]。

本研究結(jié)果顯示：鐮形棘豆總黃酮對糖尿病小鼠瘦素、脂聯(lián)素的分泌具有顯著的促進(jìn)作用；但對抵抗素幾乎沒作用，說明瘦素、脂聯(lián)素對藥物敏感性較抵抗素較高。該藥對血脂指標(biāo)作用不明顯，僅對三酰甘油具有降低趨勢，這可能與小鼠本身的血脂水平有關(guān)系。本課題采用的是7～8周齡小鼠，處在糖尿病早期階段，血脂代謝異常程度不是非常嚴(yán)重，因此藥物的作用發(fā)揮不是很明顯；但脂肪因子異常是胰島素抵抗的誘發(fā)因素，往往先于血脂異常，藥物能夠調(diào)節(jié)瘦素、脂聯(lián)素的分泌，說明該藥對于抑制胰島素抵抗具有較好的作用。另一方面，藥效與藥物純度、藥量及治療時間長短也有一定的關(guān)系。本次研究所用藥物純度為26.58%，雖然藥物純度較前人研究有所提高，但作為新藥開發(fā)的目標(biāo)來說，純度還是不夠，這是進(jìn)一步研究中需要改進(jìn)的地方。本研究雖然觀察到鐮形棘豆總黃酮對調(diào)節(jié)瘦素、脂聯(lián)素具有較好的作用；但其作用機(jī)制尚不明確，且僅限于動物實驗，故對其作用機(jī)制及臨床的深入研究，尚需進(jìn)一步開展。

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(編輯陶珠)

文章編號:1001-6910(2016)04-0061-03

中圖分類號:R587.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

doi:10.3969/j.issn.1001-6910.2016.04.29

作者簡介

楊麗霞(1979-)，女(漢族)，甘肅定西人，副主任醫(yī)師，博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藏藥防治糖尿病的作用機(jī)制研究。

* 基金項目：國家自然科學(xué)基金(81202971)；甘肅省青年科技基金計劃(1107RJYA081)

收稿日期：2015-11-23；修回日期：2016-01-29