黎秀平 詹琳 李海燕 劉廣倩

·實驗研究·

中成藥天智顆粒對血管性癡呆大鼠腦內神經(jīng)細胞增殖的影響

黎秀平 詹琳 李海燕 劉廣倩

目的研究中成藥天智顆粒對血管性癡呆大鼠腦內神經(jīng)細胞增殖的影響。方法80只健康雄性SD大鼠,將其隨機分為空白對照組、假手術組、模型對照組、治療組,各20只。模型對照組和治療組大鼠均建立血管性癡呆模型,治療組在造模后的60 d給予中成藥天智顆粒灌胃處理,分別通過尿嘧啶脫氧核苷染色法和膠質纖維酸性蛋白染色法對大鼠神經(jīng)細胞增殖情況進行測定和比較。分別對四組大鼠的學習記憶能力測試結果、免疫組織化學檢測結果進行比較。結果空白對照組和假手術組大鼠的行為學習次數(shù)、尿嘧啶脫氧核苷(BrdU)陽性細胞計數(shù)、膠質纖維酸性蛋白(GFAP)陽性細胞計數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),且均顯著優(yōu)于天智顆粒治療組和模型對照組,比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；治療組優(yōu)于模型對照組(P＜0.05)。結論中成藥天智顆?？梢砸种拼笫笮切文z質細胞的增殖,但會促進神經(jīng)前體細胞的增殖,并發(fā)揮改善大鼠的學習記憶能力的作用,效果良好。

天智顆粒；血管性癡呆；神經(jīng)細胞增殖

血管性癡呆指的腦血管病變引起腦損害并致癡呆的情況,會對患者的學習記憶能力造成較為嚴重的損傷,特別是在我國老齡化程度加深,腦血管疾病發(fā)病率不斷增加的情況下,血管性癡呆會嚴重影響老年患者的生存質量［1］。本文選擇健康的SD大鼠建模并通過中成藥天智顆粒干預血管癡呆模型后,對大鼠神經(jīng)細胞的增值情況進行分析,了解大鼠的學習記憶能力改善情況,并探討其臨床應用價值。具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取老年健康SD大鼠80只作為研究對象,大鼠月齡14～18個月,平均月齡(16.1±0.4)個月,體重500～550 g,平均體重(522.4±20.5)g。將大鼠隨機分為空白對照組、假手術組、模型對照組、治療組,每組20只。實驗前,四組大鼠一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 所有大鼠均在適宜條件下行1周的適應性喂養(yǎng)后,開始進行實驗研究。

1.2.1 動物模型建立 除空白對照組外的三組大鼠均在建模前禁食12 h,禁水4 h,經(jīng)腹腔注射3ml/kg水合氯醛實施麻醉。常規(guī)備皮消毒后,選擇在大鼠的頸正中線做縱切口,切口長度約1.5cm。其中,假手術組的大鼠切開之后,僅做雙側頸總動脈鈍性分離,但不結扎；模型對照組和治療組大鼠則實施雙重頸總動脈結扎處理,對慢性腦灌注不足的情況進行模擬,建立血管性癡呆模型。術后再次送入飼養(yǎng)室中進行飼養(yǎng),并以造模后大鼠出現(xiàn)形體消瘦、精神萎靡、皮毛光澤下降、反應遲鈍甚至是共濟失調等的情況為血管性癡呆模型造模成功。

1.2.2 實驗方法 四組大鼠均常規(guī)置于條件適宜的動物房中飼養(yǎng),60 d后空白對照組不給予任何處理,假手術組和模型對照組的大鼠均給予生理鹽水灌胃處理,治療組大鼠給予中成藥天智顆粒(河南省宛西制藥股份有限公司,國藥準字Z20040041)灌胃,給藥劑量為5 g/(kg·d)。

采用三等分Y型迷宮箱測定大鼠的學習記憶能力,大鼠受到電擊后的正常反應為：足底通電10 s內可一次性跑向安全區(qū)域。每只大鼠進行連續(xù)10次檢測,以反應正確次數(shù)≥9次為學會,并通過大鼠達到“學會”標準所需電擊次數(shù)來對其認知功能障礙程度進行判斷。

迷宮實驗結束之后,分別對大鼠進行BrdU染色和GFAP染色。經(jīng)24 h禁食,將其送至實驗室處死,經(jīng)后頸部斷頭、顱骨去除等處理,將大鼠腦部皮質進行分離,獲得左側海馬,同時切取海馬齒狀回前后組織各5mm,按照固定、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、切片等的順序對其進行處理,制作蘇木精-伊紅染色法(HE)切片備用。

每只大鼠隨機抽取6張非連續(xù)性腦組織切片,采用雙盲隨機方法在200倍光學顯微鏡下對雙側海馬區(qū)的BrdU、GFAP標記的陽性細胞進行觀察和計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

分別對四組大鼠的學習記憶能力測試結果、免疫組織化學檢測結果進行比較,結果可見空白對照組和假手術組大鼠的行為學習次數(shù)、BrdU陽性細胞計數(shù)、GFAP陽性細胞計數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；且均顯著優(yōu)于治療組和模型對照組,比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；治療組優(yōu)于模型對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 四組大鼠的學習記憶能力測試結果、免疫組織化學檢測結果比較(±s)

注：與空白對照組比較,aP1＜0.05,bP2＜0.05,cP3＞0.05；與模型對照組比較,dP4＜0.05

組別 例數(shù) 行為學習次數(shù)(次) BrdU陽性細胞計數(shù)(n) GFAP陽性細胞計數(shù)(n)治療組 20 10.55±0.56ad 8.69±1.03ad 24.11±3.08ad模型對照組 20 15.78±0.59b 3.57±0.78b 39.08±3.41b假手術組 20 7.56±0.38c 14.12±1.48c 15.98±2.99c空白對照組 20 7.23±0.34 14.59±1.82 14.07±2.89t1P1 23.198 0.000t2P2 12.907 0.000 15.045 0.000 35.827 0.000t3P3 23.109 0.000 29.762 0.000 0.552 0.891 0.691 0.743 0.901 0.553 21.382 0.000t4P4 16.091 0.000 18.620 0.000

3 討論

目前,血管性癡呆發(fā)病率已經(jīng)成為繼阿爾茨海默病后的第二大類癡呆病［2］,在所有癡呆癥患者中,所占的比例高達30.6%?；颊呋疾『笠哉J知功能障礙、記憶功能缺損等為主要臨床表現(xiàn),部分患者還伴有肢體運動障礙、語言交流障礙、視覺障礙或者人格障礙等,嚴重影響患者的生存質量［3］。

天智顆粒的組成成分主要包括：石決明、天麻、益母草、鉤藤、藤槐花、首烏、杜仲、梔子等,可以發(fā)揮清熱活血、平肝潛陽、補肝益腎的功效［4］,并能一定程度改善血管性癡呆患者的認知功能。本文以老年大鼠做動物模型,并對天智顆粒對大鼠腦內神經(jīng)細胞增殖、學習記憶能力改善的影響進行了分析,發(fā)現(xiàn)其可以抑制大鼠星形膠質細胞的增殖,但會促進神經(jīng)前體細胞的增殖,并發(fā)揮改善大鼠的學習記憶能力的作用,效果良好,雖然治療組與空白對照組、假手術組的比較尚有一定的差距,但是明顯優(yōu)于模型對照組(P＜0.05)。

已有研究證實,患者的腦部發(fā)生缺血應激性損傷之后,能夠通過促分裂素的釋放誘發(fā)腦神經(jīng)前體細胞增殖,進而誘導室管膜下區(qū)、海馬齒狀回等區(qū)正常靜息休眠的前體細胞亞群增殖分化,促進多種細胞因子的釋放,并進一步經(jīng)自分泌或旁分泌作用促進細胞增殖,神經(jīng)前體細胞數(shù)量的增加有利于患者學習記憶能力的改善。而膠質細胞在整個腦組織系統(tǒng)中發(fā)揮反應并反饋神經(jīng)元活動信號的作用,通過特征性蛋白質膠質纖維酸性蛋白,能夠對星形膠質細胞活化情況進行反映。一般情況下,腦缺血發(fā)生之后,患者的星形膠質細胞會出現(xiàn)迅速增殖,并可能對神經(jīng)纖維傳導、突觸構建等過程造成影響,改變神經(jīng)元、膠質細胞的比例,并參與老年癡呆的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述,中成藥天智顆粒發(fā)揮抑制大鼠星形膠質細胞增殖的作用,提示其對于改善血管性癡呆也有一定作用。

［1］吳斌,徐清,顧君董,等.天智顆粒治療輕、中度血管性癡呆療效觀察.中國健康心理學雜志,2013,21(12):1774-1775.

［2］馬永明,耿亞.天智顆粒治療血管性癡呆58例.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育,2013,11(16):20-22.

［3］靳瑋.甲酯化脂氧素A4對血管性癡呆大鼠認知功能的影響及對ERK/Nrf2和PI3K/Akt信號轉導通路的作用.河北醫(yī)科大學,2014.

［4］李建波,張殿印,侯玉琴.天智顆粒治療血管性癡呆59例療效觀察.中國實用神經(jīng)疾病雜志,2012,15(3):84-86.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.211

2015-12-11］

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