李文兵　王洛臨　李智勇　張誠(chéng)光　范宋玲廣東省第二中醫(yī)院，廣東　廣州　510095

正交試驗(yàn)法優(yōu)選香元消痔巴布貼提取工藝

李文兵王洛臨李智勇張誠(chéng)光范宋玲
廣東省第二中醫(yī)院，廣東廣州510095

【摘要】目的:優(yōu)選香元消痔巴布貼的最佳水提工藝.方法:采用正交試驗(yàn)法，以浸膏質(zhì)量和小檗堿的含量為指標(biāo)，對(duì)加水用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)進(jìn)行優(yōu)選.結(jié)果:香元消痔巴布貼水提的最佳提取工藝為每次加10倍量水，提取2次，每次1. 5h.結(jié)論:優(yōu)選的水提取工藝方法可行、工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性好.

【關(guān)鍵詞】香元消痔巴布貼;提取工藝;小檗堿;正交試驗(yàn)

Optimization of Extract Technology for Xiangyuan xiaozhi cataplasm by Orthogonel Design

LI Wen－bing WANG Luo－lin LI Zhi－yong ZHANG Cheng－guang FAN Song－ling
Guangdong Second Provincial Traditional Medicine Hospital，Guangzhou 510095，China

Abstract:Objective To optimize the extract process of Xiangyuan xiaozhi cataplasm．Methods The optimum conditions of Xiangyuan xiaozhi cataplasm were selected with the extractum and the active components berberine hydrochloride as the indicators．Results The optimal process was 10 times water adding into herbal pieces，then reflux extracting 2 times and 1. 5 hours for each time．Conclusion The optimal extration process is stable and reasonable，which can effectively extract the active ingredients of Xiangyuan xiaozhi cataplasm．

Key words:Xiangyuan xiaozhi cataplasm; Orthogonel Design; berberine hydrochloride

香元消痔巴布貼處方是廣東省第二中醫(yī)院的經(jīng)驗(yàn)處方，由黃柏、地榆、元胡等八味中藥材組成，具有清熱解毒、散寒除濕、涼血止血的功效，主要用于濕熱所致的內(nèi)外痔、混合痔瘡.黃柏為本方的君藥.現(xiàn)代研究表明，黃柏中的生物堿為有效成分，試驗(yàn)選擇小檗堿含量和水溶性固形物質(zhì)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)影響提取效果的提取次數(shù)、加水量和提取時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，以確定其最佳提取工藝[1－3].現(xiàn)報(bào)道如下.

1　儀器與試藥

1. 1儀器安捷倫1200型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司) ; DHG9203A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司) ; HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海梅香儀器有限公司) ; XS205DU型分析天平(瑞士梅特勒托利多).

1. 2試藥小檗堿對(duì)照品(批號(hào)110713－200301，中國(guó)食品藥品檢定研究院) ;黃柏、槐花、地榆、元胡等購(gòu)于廣州市藥材公司，經(jīng)廣東省第二中醫(yī)院李慶勇副主任中藥師鑒定，均為《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版收載的正品;水為超純水;甲醇為色譜純;其余試劑均為分析純.

2　方法與結(jié)果

2. 1正交試驗(yàn)因素水平的確定采用正交試驗(yàn)法，在預(yù)試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，以提取液中總浸膏得量和小檗堿的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)影響提取工藝的主要因素有加水倍量、提取時(shí)間、提取次數(shù)進(jìn)行優(yōu)選，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1.

表1　水提工藝試驗(yàn)因素水平設(shè)定

2. 2藥材提取

2. 2. 1樣品的制備按處方比例，稱(chēng)取藥材共9份，按照L9( 3)4正交表安排分別進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)提取，過(guò)濾，合并，提取液濃縮并定容至500ml，即得;分別測(cè)定固形物得量和小檗堿含量.

2. 2. 2陰性對(duì)照溶液制備按處方比例稱(chēng)取除黃柏外的其余藥材，按“2. 2. 1”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液.

2. 3總固形物得量的測(cè)定精密量取各正交試驗(yàn)樣品25ml，置已知恒重的蒸發(fā)皿內(nèi)，水浴蒸干，置105℃烘箱中，干燥3h，取出置干燥器中冷卻0. 5h，稱(chēng)重，計(jì)算總固體得量.計(jì)算公式:

2. 4小檗堿的含量測(cè)定

2. 4. 1色譜條件色譜柱: Kromasil C18色譜柱( 4. 6mm× 250mm，5μm) ;柱溫: 25℃;流動(dòng)相:乙腈－0. 1 %磷酸( 50∶50) (每100ml流動(dòng)相加入十二烷基硫酸鈉0. 1g) ;流速: 1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng): 265nm;進(jìn)樣量: 10μl，理論塔板數(shù)以鹽酸小檗堿計(jì)不低于4000.

2. 4. 2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取小檗堿對(duì)照品適量，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含1. 005mg小檗堿的對(duì)照品溶液.

2. 4. 3供試品溶液的制備分別精密吸取正交試驗(yàn)所得各樣品溶液2ml，置25ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)0. 45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，作為供試品溶液.

2. 4. 4系統(tǒng)性試驗(yàn)按“2. 4. 1”項(xiàng)下色譜條件，分別取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl進(jìn)樣，進(jìn)行系統(tǒng)性試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖1－3，小檗堿分離度良好，陰性無(wú)干擾，理論塔板數(shù)按小檗堿峰計(jì)算不低于4000.

圖1　小檗堿對(duì)照液相色譜圖

圖2　供試品溶液液相色譜圖

圖3　陰性對(duì)照液相色譜圖

2. 4. 5線性關(guān)系考察精密取上述對(duì)照品溶液2、5、10、15、20 μl注入高級(jí)液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y =2. 53X－33. 44，r = 0. 9998，結(jié)果表明，小檗堿在濃度范圍2. 01～20. 1μg內(nèi)線性關(guān)系良好.

2. 4. 6精密度試驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，按“2. 4. 1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定.結(jié)果小檗堿峰面積的RSD為1. 26%，表明儀器精密度良好.

2. 4. 7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份樣品，分別于0、1、2、4、8、12h，進(jìn)樣10μl，按“2. 4. 1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定.結(jié)果小檗堿峰面積積分值RSD為1. 58%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2. 4. 8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品5份，按“2. 4. 3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積并計(jì)算含量.結(jié)果測(cè)得小檗堿平均含量的RSD為0. 55%，表明該方法重復(fù)性良好.

2. 4. 9加樣回收率試驗(yàn)精密吸取已知含量的樣品6份，分別精密加入小檗堿對(duì)照品1. 005 mg，按2. 4. 1項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果小檗堿平均回收率為98. 86%，RSD為1. 76%，表明此方法可行.

2. 5數(shù)據(jù)處理與工藝優(yōu)選用綜合加權(quán)評(píng)分法，總固形物量和小檗堿含量9次試驗(yàn)的最大值為100分，將各指標(biāo)成分的總量分別轉(zhuǎn)換為評(píng)分值，總固體得率的加權(quán)系數(shù)為0. 4，小檗堿含量的加權(quán)系數(shù)為0. 6，將每次試驗(yàn)的各指標(biāo)成分的評(píng)分值乘以相應(yīng)的加權(quán)系數(shù)后求和，得綜合評(píng)分值，以綜合評(píng)分值計(jì)算正交試驗(yàn)結(jié)果，并進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表2、3.

表2　水提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表3　方差分析

結(jié)果表明，由直觀分析可知因素主次為提取次數(shù)( A)＞提取時(shí)間( C)＞水用量( B).方差分析表明，三個(gè)因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果均有顯著的影響，確定最佳提取工藝為:每次分別加10倍量水，提取1. 5K，回流提取2次，即A2B2C3.

2. 6最佳工藝驗(yàn)證按正交試驗(yàn)結(jié)果的最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)3次，結(jié)果見(jiàn)表4.

表4　最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，三個(gè)平行試驗(yàn)的綜合評(píng)分結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果之間差異不大，提示所優(yōu)選的提取工藝條件基本穩(wěn)定.

3　討論

本文選擇將香元消痔巴布貼中黃柏、槐花、地榆、元胡等水提取進(jìn)行工藝研究，根據(jù)各藥材化學(xué)成份性質(zhì)分析，黃柏中的主要有效成分鹽酸小檗堿為季銨鹽易溶于水，課題組經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)顯示，鹽酸小檗堿轉(zhuǎn)移率較高，最后確定以提取液中總固形物含量和小檗堿的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，最佳提取工藝為:每次分別加10倍量水，提取1. 5h，回流提取2次，即A2B2C3.

通過(guò)驗(yàn)證該提取工藝，用高效液相色譜法測(cè)定小檗堿的含量，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、方法簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，能有效地控制該制劑的質(zhì)量，而且該工藝生產(chǎn)成本低、生產(chǎn)工藝穩(wěn)定、有效成分提取率高，適合于醫(yī)院制劑小規(guī)模的生產(chǎn).

參考文獻(xiàn)

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收稿日期:( 2014. 11. 19)

作者簡(jiǎn)介:李文兵( 1972－)，廣東湛江人，主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)研究.E－mail: liwenbing312@163. com

基金項(xiàng)目:廣東省中醫(yī)藥局立項(xiàng)資助科研課題(編號(hào): 20131117).

【文章編號(hào)】1007－8517 ( 2015) 04－0017－03

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類(lèi)號(hào)】R283. 6