陸麗麗綜述， 劉 丹審校

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髓樣細胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子-1的研究進展

陸麗麗綜述， 劉 丹審校

髓樣細胞觸發(fā)受體(triggering receptors expressed on myeloid cells，TREMs)是免疫球蛋白超家族中的一個受體家族，人類TREMs基因簇定位于6號染色體的p21.1[1]。TREMs家族中的成員都含有特征性的單一V形細胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，一個短胞質(zhì)尾區(qū)和一個含有賴氨酸殘基的跨膜結(jié)構(gòu)域，從而可以與酪氨酸激酶結(jié)合蛋白12(DNAX-activation protein of 12 kDa，DAP12)信號通路相連接[2]。不同于其他的TREMs家族成員，在髓樣細胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子-1(TREMs like transcript-1，TLT-1)的胞漿結(jié)構(gòu)域還包含一個免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)，可以招募酪氨酸蛋白磷酸酯酶[3]，因此認為TLT-1是TREMs受體家族中的抑制性成員。已有研究表明，TLT-1可以調(diào)節(jié)血小板的活化和炎癥反應(yīng)[4]。缺乏TLT-1的小鼠表現(xiàn)為血小板的聚集能力明顯受損，容易出現(xiàn)內(nèi)毒素血癥引起的敗血癥性休克[5]。目前，TLT-1的接頭異構(gòu)體與短胞漿結(jié)構(gòu)域已經(jīng)被報道[6]，這表明不同的TLT-1衍生物可能具有不同的細胞生物學(xué)功能。

1 TLT-1的一般特征和特異性表達

1.1 TLT-1的一般特征 TLT-1是TREMs家族中的一員，它們的基因共同存在于人類6號染色體和鼠的17號染色體上，所以TLT-1與TREMs具有顯著的同源性，也具有單一V形細胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。但與TREM-1和TREM-2不同的是，TLT-1并不與DAP12相結(jié)合[1]。TLT-1的長胞質(zhì)尾區(qū)由一個富含脯氨酸區(qū)域和一個典型的ITIM構(gòu)成[7]。研究表明含有ITIM的受體可以抑制通過ITAM受體傳導(dǎo)的信號[8]，DAP12就是一種ITAM依賴蛋白，而TREM-1和TREM-2又是通過與DAP12結(jié)合傳遞信號，所以TLT-1可能是TREM家族中的抑制性成員[9]。

TLT-1和CD62P共同存在于未分化骨髓來源的巨核細胞和巨核細胞來源的細胞內(nèi)[4]，在體外用促血小板生成素(TPO)處理未分化的骨髓7～10 d后，通過運用共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，有大量的未成熟巨核細胞生成，這些細胞的直徑都是50～75 μm，并且含有豐富的α-顆粒和多葉的大細胞核，但是不能形成成熟的血小板[10]，這表明TLT-1和CD62P共同存在于這些早期的巨核細胞內(nèi)。為了證明TLT-1在細胞生成的早期階段就已經(jīng)被組裝運輸?shù)溅?顆粒內(nèi)，對經(jīng)過抗TLT-1抗體處理過的骨髓進行染色后發(fā)現(xiàn)，有大量的預(yù)先組裝的前TLT-1顆粒圍繞在多葉的大細胞核周圍，這些都說明TLT-1是在巨核細胞內(nèi)生成和組裝的。

1.2 TLT-1的特異性表達 TLT-1存在于巨核細胞和血小板的α-顆粒內(nèi)，當(dāng)血小板被凝血酶或脂多糖(LPS)激活時，TLT-1會特異性地表達于巨核細胞和外周血中血小板的表面，促進Ca2+的內(nèi)流和血小板的聚集[5,6]，這表明TLT-1在止血和/或血栓的形成中起著獨特的作用。既往通過Northern印記法顯示，TLT-1與TREM-1的mRNA在未分化骨髓中呈共表達狀態(tài)[3]。為了驗證TLT-1是否在白細胞上表達，人們進行了許多實驗[4]，首先通過比較鼠的骨髓細胞來源的樹突狀細胞和純化的血小板中TLT-1和TREM-1 mRNA的表達水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TLT-1在血小板上呈高表達狀態(tài)，而TREM-1只在樹突狀細胞上有微量的表達。從小鼠外周血中提取mRNA進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TLT-1信號的表達水平與骨髓密切相關(guān)，TLT-1的mRNA在外周血中呈高表達狀態(tài)，但是在胸腺和淋巴結(jié)中沒有表達。因此推測TLT-1可能只存在于外周血中的血小板和它的骨髓前體細胞上。Washington AV[4]及其同事還發(fā)現(xiàn)，血小板上存在兩種抑制性受體，第一種是血小板內(nèi)皮細胞粘附分子(PECAM);第二種就是TLT-1。雖然PECAM也在與內(nèi)皮細胞上表達，但是TLT-1卻只存在于血小板上，而不在內(nèi)皮細胞上表達，所以TLT-1被稱為血小板特異性的抑制性受體，TLT-1的表達的特異性使它稱為巨核細胞和血小板的標志。

2 TLT-1及其衍生物的功能

2.1 TLT-1的功能 血小板的活化會引起α-顆粒內(nèi)容物的釋放，伴隨著細胞表面的多種蛋白受體的表達也會的增加。這是因為血小板活化后α-顆粒膜會與細胞膜相融合，α-顆粒中的內(nèi)容物也隨之釋放并表達于血小板表面，其中表達增加最明顯的就是CD62P和TLT-1[11～13]。 研究發(fā)現(xiàn)，用LPS分別處理缺乏TLT-1的小鼠和野生型小鼠，結(jié)果表明缺乏TLT-1的小鼠的血漿中D-二聚體水平明顯增高，血小板不能有效的聚集，出血時間明顯延長，而且在內(nèi)毒素血癥時更容易死亡[5]。這表明機體在發(fā)生炎癥反應(yīng)時，TLT-1具有調(diào)節(jié)止血的作用。此外，TLT-1還可以增強大鼠噬堿性白血病細胞內(nèi)的Ca2+信號，而TLT-1又不與DAP12活化鏈相結(jié)合，所以這表明TLT-1是一種共信號受體[6]。Giomarelli B[14]等研究發(fā)現(xiàn)，通過高度特異性的人單克隆抗體從絲狀噬菌體表面篩選出的單鏈Fv片段(scFvs)能與TLT-1結(jié)合，抑制TLT-1的作用?？筎LT-1 scFvs能夠抑制凝血酶介導(dǎo)的血小板聚集，而且這種抑制作用是特異性，在高劑量的激動劑的作用下這種抑制作用是可逆的。這可能為新的抗血小板治療藥物的研究提供了新的思路。

晶體研究發(fā)現(xiàn)[9]，TLT-1與TREM-1的結(jié)構(gòu)相似，特別是它們胞質(zhì)尾端的環(huán)形結(jié)構(gòu)，這表明TLT-1與TREM-1之間存在相互作用，這可能揭示了血小板與骨髓細胞之間相互作用的一種新機制。TREM-1會放大感染或無菌性炎癥，TREM-1水平的升高與急性炎癥(如缺血再灌注、胰腺炎和出血性休克)或慢性炎癥(如炎癥性腸病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)有關(guān)。TLT-1與TLT-1來源的多肽能抑制TREM-1信號，顯示出抗炎能力，因此TLT-1是TREM-1的天然的抑制劑[15]。

Louisa D[16]等研究發(fā)現(xiàn)TLT-1是一種新型的棕櫚?；鞍?，而且是cys196發(fā)生了棕櫚?；LT-1的全長有7個半胱氨酸殘基，其中4個存在于胞外結(jié)構(gòu)域形成二硫鍵，另外的3個半胱氨酸殘基存在于細胞內(nèi)，cys196正好在跨膜結(jié)構(gòu)域之后。血小板上的許多棕櫚?；鞍锥急蛔C實存在于脂質(zhì)筏內(nèi)，但是TLT-1卻只有一小部分。這可能是由于免疫受體酪氨酸活化基序含有PECAM-1蛋白，所以TLT-1的棕櫚酰化會影響其進入脂質(zhì)筏。目前，關(guān)于棕櫚酰化在TLT-1功能中的具體作用機制仍不清楚，但是棕櫚?；赡軙绊慣LT-1的磷酸化。

2.2 TLT-1s的功能 研究表明[17]，TLT-1s是TLT-1在巨噬細胞上的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，TLT-1的全長由322個氨基酸構(gòu)成，而TLT-1s可能只有202個氨基酸，與全長的TLT-1相比TLT-1s僅缺少N端的細胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，因此猜測TLT-1s可能是DAP12和FcRγ的真實調(diào)節(jié)分子。雖然TLT-1s有一個非常短的細胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，但是含有一個完整的跨膜結(jié)構(gòu)域和含有免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)的胞質(zhì)尾區(qū)結(jié)構(gòu)域。TLT-1基因由6個外顯子和5個內(nèi)顯子組成，TLT-1s的基因位于TLT-1基因的2號內(nèi)顯子。TLT-1 和 TLT-1s表現(xiàn)為不同的組織分配模式，TLT-1在血小板和巨核細胞上大量表達，而TLT-1s卻不在血小板上表達，TLT-1s只表達于巨噬細胞和破骨細胞上。含有ITIM的受體被證實可以通過招募磷酸酯酶(如SHP-1,SHP-2,和SHIP蛋白)來抑制依賴ITAM(受體酪氨酸活化基序)受體傳導(dǎo)的信號。例如ITIM依賴性受體通過招募磷酸酯酶和共刺激受體去調(diào)節(jié)破骨細胞的生成[18,19]。對于破骨細胞的生成來說，ITAM對鈣信號的調(diào)節(jié)是非常重要的。在缺乏ITAM信號調(diào)節(jié)者DAP12和FcRr的小鼠體內(nèi)，因為破骨細胞的形成受損[20]，所以骨骼石化癥非常嚴重；而SHP-1和SHIP-1被敲除的小鼠，因為破骨細胞的顯著增生而患有嚴重的骨質(zhì)疏松癥[21，22]。TLT-1s會抑制破骨細胞前體細胞上的TREM信號，所以TLT-1s可能是侵蝕性骨病的一個特異性治療靶點。

2.3 sTLT-1的功能 研究表明，血小板被激活后TLT-1在表達于血小板表面的同時，會裂解生成一種可溶性的TLT-1片段(sTLT-1)。sTLT-1存在于健康個體的血清而非血漿當(dāng)中，但是在敗血癥或急性病毒感染的患者血漿中sTLT-1的水平會明顯升高[23]，sTLT-1會促進血小板的聚集，加速血管損傷部位血液的凝固，在維持血管的完整性和止血方面起重要作用；而且sTLT-1的水平與敗血癥時彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)的發(fā)生密切相關(guān)[5]。DIC是敗血癥、心血管疾病和癌癥等疾病的標志，Gladiany Ramos[24]等研究表明，sTLT-1表達水平的增加程度與DIC的病情嚴重程度一致。因為癌癥與DIC的發(fā)生有關(guān)，所以檢測癌癥患者體內(nèi)sTLT-1的表達水平可以在一定程度上反映DIC的嚴重程度，這也表明TLT-1在腫瘤的進展中發(fā)揮作用[25]。

Marc Derive[15]等研究發(fā)現(xiàn)sTLT-1通過抑制白細胞的活化和調(diào)節(jié)血小板與中性粒細胞的相互作用而參與敗血癥時炎癥反應(yīng)的調(diào)控。sTLT-1是TLT-1的一個胞外結(jié)構(gòu)域，是一個含有17個氨基酸的序列(LR17)，通過競爭TREM-1配體而發(fā)揮作用。sTLT-1與sTREM-1的行為方式一致，能夠特異性的調(diào)控TREM-1的活化，使細胞因子的產(chǎn)生減少，提高細菌的清除能力。TREM-1缺如的動物容易被多種細菌感染，早期或晚期用LR17治療膿毒癥小鼠可提高生存率。這表明血小板來源的sTLT-1是膿毒癥相關(guān)性炎癥反應(yīng)的一個強有力的內(nèi)源性調(diào)節(jié)器，為膿毒癥相關(guān)的炎癥反應(yīng)的治療開辟了新的前景。sTLT-1促進血小板的聚集是通過與纖維蛋白原結(jié)合，促進肌動蛋白的聚合進而促使血小板粘附于內(nèi)皮細胞上。血小板與內(nèi)皮細胞的粘附和趨化因子在內(nèi)皮細胞表面的沉積，又會促進動脈粥樣硬化的形成[26,27]。不穩(wěn)定斑塊的破裂會導(dǎo)致脂質(zhì)核心暴露于血流中，觸發(fā)血小板的粘附、聚集、釋放的瀑布式反應(yīng)，導(dǎo)致動脈粥樣硬化性血栓的形成，因此sTLT-1可能是動脈粥樣硬化性血栓形成過程中的一個推動者。

3 問題與展望

TLT-1的表達與血小板的活化密切相關(guān)，檢測TLT-1的表達水平可以間接預(yù)測血小板的活化程度。在血栓相關(guān)性疾病中血小板的活化起重要作用，公認的腦梗死急性發(fā)病的病理基礎(chǔ)是動脈粥樣硬化性血栓形成，所以檢測TLT-1在不同時期的表達水平可能為腦梗死急性發(fā)病的防治提供新的科學(xué)依據(jù)。當(dāng)然，到目前為止這些還都是猜測，但是我們相信隨著大量研究的開展、研究程度的不斷深入以及研究手段的不斷進步，TLT-1家族的成員、功能以及在疾病中的具體作用機制終將被揭示，并為相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷和治療提供新的理論依據(jù)。

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1003-2754(2016)10-0952-03

R744.1

2016-08-10；

2016-09-29

(內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010)

劉 丹，E-mail：liudanbaotou2313@163.com

綜 述