劉衛(wèi)梅

（河南省焦作市第二人民醫(yī)院 病理科，河南 焦作 454001）

胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤，近年發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。Rb、p16和cyclinD1三者屬于CDK4/cyclinD1/p16/Rb途經(jīng)，它的異常與腫瘤的產(chǎn)生及進(jìn)展相關(guān)。通過(guò)對(duì)正常胃黏膜組織、胃黏膜異常增生和胃癌早期Rb、p16和cyclinD1表達(dá)的研究，探討三者在胃癌發(fā)生中的相互聯(lián)系及其作用。

1 資料與方法

1.1 資料

選取早期胃癌22例、增生異常23例和正常胃黏膜15例，標(biāo)本均為本院2011年1月‐2012年7月手術(shù)切除標(biāo)本，早期胃癌均為管狀腺癌（組織學(xué)類型），所有切除標(biāo)本均用10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片（4 μm厚），免疫組織化學(xué)試劑盒、抗體和顯色劑均購(gòu)于武漢博士德生物有限公司。

1.2 方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)Rb、p16和cyclinD1基因在22例早期胃癌、23例異型增生以和15例正常胃黏膜組織中的表達(dá)。免疫組化S-P法：切片常規(guī)脫蠟、水洗和電磁爐抗原熱修復(fù)，依次按說(shuō)明步驟進(jìn)行操作。cyclinD1抗體稀釋度為1∶75；Rb抗體稀釋度為1∶50；p16抗體稀釋度為1∶100，用已知明確陽(yáng)性的組織切片做陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline,PBS）替代一抗。

1.3 結(jié)果判定

棕黃色顆粒均勻一致定位于細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)為陽(yáng)性；細(xì)胞核或細(xì)胞漿無(wú)棕黃色顆粒的為陰性；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于20%為（+），即弱陽(yáng)性；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在20%～50%為（++），即陽(yáng)性；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于50%為（+++），即強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

p16陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，cyclinD1及Rb陽(yáng)性定位于細(xì)胞核；cyclinD1低表達(dá)于正常胃黏膜中。cyclinD1在胃癌早期、異型增生和正常胃黏膜中的過(guò)表達(dá)率分別為40.9%（9/22）、30.4%（7/23）和0%（0/15），cyclinD1在胃癌早期中與正常胃黏膜過(guò)表達(dá)率相比存在表達(dá)過(guò)度（P＜0.05）；Rb在胃癌早期、增生異常和正常胃黏膜中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.6%（14/22）、82.6%（19/23）和100%（15/15），Rb在胃癌早期中與正常胃黏膜陽(yáng)性表達(dá)率相比表達(dá)下降（P＜0.05）；p16在胃癌早期、增生異常及正常胃黏膜中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為59.1%（14/22）、82.6%（19/23）和100.0%（15/15），p16在胃癌早期與正常胃黏膜陽(yáng)性表達(dá)率相比表達(dá)減低（P＜0.05）。cyclinD1、Rb和p16在胃癌早期與異型增生、異型增生與正常黏膜之間的差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在胃腺癌早期中，9例cyclinD1表達(dá)過(guò)度的標(biāo)本中Rb表達(dá)全部為（+），其中有3例p16表達(dá)（-）；10例Rb表達(dá)（-）標(biāo)本中cyclinD1全部為（-），無(wú)過(guò)度表達(dá)，其中有6例p16（-）；胃早期腺癌22例患者中有16例存在上述cyclinD1、Rb和p16三種基因的異常。

3 討論

cyclinD1基因位于11q13,CDK4和CDK6激酶通過(guò)其蛋白結(jié)合并激活，Rb被磷酸化，E2F的抑制影響被Rb消除，并且DNA的合成開(kāi)啟，使細(xì)胞從G1期過(guò)度到S期，細(xì)胞失去控制的增值及生長(zhǎng)，cyclinD1的過(guò)度表達(dá)在很多惡性腫瘤中都存在，比如乳腺癌[1]、頭頸部鱗癌[2]和食管鱗癌[3]等；CDK4/CDK6的抑制因子是P16，它定位于9p21，在腫瘤增殖的調(diào)控中，CDK4/CDK6被cyclinD1和p16蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，起到負(fù)性調(diào)控作用，一起協(xié)助對(duì)腫瘤增殖周期的調(diào)控，CpG島的甲基化異常是P16失活的原因[4]，p16表達(dá)缺失在肝癌等許多腫瘤中都存在；視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤易感基因，即Rb基因，長(zhǎng)約180 kb，基因定位在13q14.2和q14.3，表達(dá)于人類各種組織之中，110 kD蛋白為其編碼的蛋白產(chǎn)物，其蛋白產(chǎn)物抑制細(xì)胞的生成，這種正常的產(chǎn)物的缺少或缺失，會(huì)引起腫瘤細(xì)胞失去控制的生長(zhǎng)、增殖。Rb基因突變、丟失和重排的變化很早就被發(fā)現(xiàn)，并且它是第一個(gè)被確定的抑癌基因。筆者探討應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)正常胃黏膜15例，異型增生23例，胃腺癌早期癌22例標(biāo)本中p16，Rb及cyclinD1三者的表達(dá)情況，結(jié)果表明cyclinD1胃腺癌早期與正常胃黏膜過(guò)表達(dá)率相比存在差異（過(guò)度表達(dá)）（P＜0.05）；p16及Rb胃腺癌早期與正常胃黏膜陽(yáng)性表達(dá)率存在差異（表達(dá)降低）（P＜0.05）；異型增生中存在3種基因的異常；但與正常胃黏膜相比，陽(yáng)性表達(dá)率差異不明顯（P＞0.05）。以上結(jié)果表明Rb、p16及cyclinD1的異常在胃腺癌的早期發(fā)生中起到異常重要的作用，是胃腺癌早期發(fā)生的根本緣由。在本身表達(dá)缺失和cyclinD1過(guò)度表達(dá)都可能引起Rb抑癌基因功能喪失，兩者中有其一非正常就具有同樣的結(jié)果，無(wú)需同時(shí)存在兩者非正常，Ralhan等[5]的研究與此大致相同。這充分說(shuō)明了在胃管狀腺癌的早期發(fā)生及進(jìn)展過(guò)程中一般都存在CDK4/cyclinD1/p16/Rb途徑的非正常，此途徑在胃癌早期的發(fā)生過(guò)程中起異常重要的作用。

[1]Weinstat-Saslow D,Merino MJ,Manrow RE,et al.Overexpression of cyclin D mRNA distinguishes invasive and in situ breast carcinomas from nun-malignant lesions[J].Nat Med,1995,1(12):1257-1260.

[2]Xing EP,Nie Y,Wang LD,et al.Aberrant methylation of p16INK4a and delelion of p15INK4b are frequent events in human esophageal cancer in Linxian,China[J].Carcinogenesis,1999,20(1):77-84.

[3]Liew CT,Li HM,Lo KW,et al.High frequency of p16INK4A gene alterations in hepatocellular caminoma[J].Oncogene,l999,18(3):789-795.

[4]Shinohara M,Aoki T,Sato S,et al.Cell cycle-regulated factors in esophageal cancer[J].Dis Esophagus,2002,15(2):149-154.

[5]Ralhan R,Mathew R,Arora S.Frequent alterations in the expression of tumor suppress or genes p16INK4A and pRb in esophageal squamous cell carcinoma in the Indian population [J].J Cancer Res Clin Oncol,2000,126(11):655-660.