唐古生，　柳　敏，　胡曉霞，　高　磊，　楊建民，　王健民

(上海市長(zhǎng)海醫(yī)院血液內(nèi)科，上海 200433)

慢性淋巴細(xì)胞白血病CD5漏檢臨床案例分析及對(duì)策

唐古生，柳敏，胡曉霞，高磊，楊建民，王健民

(上海市長(zhǎng)海醫(yī)院血液內(nèi)科，上海 200433)

摘要：目的分析不同熒光素標(biāo)記抗體對(duì)慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)B細(xì)胞表面CD5檢測(cè)結(jié)果差異及其對(duì)臨床診斷的影響。方法采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)3例CD5表達(dá)強(qiáng)度不同的慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)患者的免疫表型，采用SYSMEX XE2100 全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)血常規(guī)；以1例急性B淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)患者作為陰性對(duì)照。結(jié)果采用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗體檢測(cè)4例患者骨髓異常B淋巴細(xì)胞CD5表達(dá)，CD5陽(yáng)性細(xì)胞未見獨(dú)立成群，陽(yáng)性細(xì)胞比例分別為47.1%、17.7%、6.7%和7.9%；以≥20%為標(biāo)準(zhǔn)，僅病例1陽(yáng)性。以PE-Cy7熒光素標(biāo)記抗體重新檢測(cè)，病例1和2的CD5陽(yáng)性細(xì)胞獨(dú)立成群，病例3 CD5表達(dá)呈連續(xù)表達(dá)模式，陽(yáng)性細(xì)胞比例分別上升至91.1%、70.3%和38.2%。而對(duì)照病例4(B-ALL患者)2次檢測(cè)CD5比例均為陰性。病例1、2、3符合典型CLL免疫表型。結(jié)論CLL患者B細(xì)胞表面常異常表達(dá)CD5，但其表達(dá)強(qiáng)度顯著低于T細(xì)胞表面CD5表達(dá)。采用弱熒光素標(biāo)記抗體檢測(cè)B細(xì)胞表面CD5表達(dá)，會(huì)出現(xiàn)漏檢進(jìn)而影響臨床診斷。對(duì)弱表達(dá)抗原選擇合適的熒光素標(biāo)記，并進(jìn)行驗(yàn)證和比對(duì)確定其準(zhǔn)確性，是正確提供疾病免疫表型的重要保障。

關(guān)鍵詞：CD5；免疫表型；慢性淋巴細(xì)胞性白血??；流式細(xì)胞儀；漏檢

中圖分類號(hào)：

文章編號(hào)：1673-8640(2015)01-0021-05R446.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.01.006

Abstract:ObjectiveTo analyze the variation of CD5 caused by different fluorescein-labeled antibodies on B cells in patients with chronic lymphocytic leukemia(CLL) and the influence on clinical diagnosis. MethodsFlow cytometry and SYSMEX XE2100 automated hematology analyzer were used for the detection of immunophenotype and blood cell counts of 3 CLL patients with different expression intensities of CD5, respectively. 1 patient with B-cell acute lymphocytic leukemia(B-ALL) was selected as negative control. ResultIn 4 patients with abnormal B lymphocytes, using fluorescein isothiocyanate(FITC) fluorescein-labeled antibody, no independent groups expressing CD5 were identified, and the proportions of CD5 positive cells were 47.1%, 17.7%, 6.7% and 7.9%. For ≥20% as standard, there was only 1 positive case. Re-tested with PE-Cy7 fluorescein-labeled antibody, however, there were independent groups of CD5 positive cells in case 1 and 2, and there was still a continuous expression pattern of CD5 in case 3. The proportions of CD5 positive cells increased to 91.1%, 70.3% and 38.2% in these 3 specimens from CLL patients. In case 4, the specimen from B-ALL patient, the proportions of CD5 positive cells were negative in the 2 conditions. Case 1, 2 and 3 were typical CLL phenotyping. ConclusionsCD5 is often abnormally expressed on B cells in CLL patients, but its expression intensity is significantly lower than that on T cells. Using weak fluorescein-labeled antibodies might miss CD5 expression on B cells, and thus it will affect the clinical diagnosis because of leak detection. It should select appropriate fluorescein-labeled antibodies for weakly expressed antigens and conduct validation and comparison to determine its accuracy, which is an important safeguard for the provision of correct disease phenotype.

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81270638)；國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(81102249)

作者簡(jiǎn)介：唐古生，男，1978年生，博士，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)檠合到y(tǒng)惡性疾病免疫學(xué)臨床診斷。

收稿日期：(2014-02-26)

Analysis on the missing detection of CD5 in chronic lymphocytic leukemia and its countermeasuresTANGGusheng,LIUMin,HUXiaoxia,GAOLei,YANGJianmin,WANGJianmin.(DepartmentofHematology,ChanghaiHospital,Shanghai200433,China)

Key words: CD5; Immunophenotype; Chronic lymphocytic leukemia; Flow cytometry; Leak detection

目前，最新的國(guó)內(nèi)外慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma, SLL)診斷標(biāo)準(zhǔn)中均納入了免疫表型的要求[1-3]。典型的CLL免疫表型為CD19+、CD5+、CD23+、CD43+/-、CD10-、 CD22dim、CD20dim、sIgdim和cyclin D1-。在CLL鑒別診斷中常采用CLL免疫表型積分，其中CD5+、CD23+、FMC-、sIgdim、CD22/CD79bdim/-各積1分。CLL患者通常積分為4~5分，積分低于4分者需要結(jié)合淋巴結(jié)、脾臟、骨髓組織學(xué)及遺傳學(xué)檢查等進(jìn)行鑒別診斷。因此，細(xì)胞膜表面CD5標(biāo)志的檢測(cè)對(duì)于CLL的診斷和鑒別診斷具有非常重要的意義。然而我們?cè)诔Ｒ?guī)CLL免疫表型檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，異常B細(xì)胞表面CD5表達(dá)明顯低于成熟T淋巴細(xì)胞表面CD5的表達(dá)。如果采用弱熒光素如異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)導(dǎo)致白血病細(xì)胞表面CD5抗原表達(dá)率偏低，甚至漏檢。現(xiàn)從近期確診的CLL病例中選擇典型的3例患者，分析該問(wèn)題在實(shí)際臨床工作中的表現(xiàn)及其解決策略。

材料和方法

一、對(duì)象

選擇2013年6至7月于上海市長(zhǎng)海醫(yī)院血液科門診確診為CLL且CD5表達(dá)量呈低中高分布的典型患者3例(以Pa1~Pa3表示)，以急性B淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)患者 1例(以Pa4表示)作為陰性對(duì)照。4例患者的臨床特征和實(shí)驗(yàn)室檢查見表1。CLL診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)慢性淋巴細(xì)胞白血病診治指南(2011年版)[1]。B-ALL診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)成人急性淋巴細(xì)胞白血病診斷與治療專家共識(shí)(2012年)[4]。

表1　患者臨床資料特征

二、試劑和儀器

所用的單克隆抗體為美國(guó)Beckman-Coulter或BD公司產(chǎn)品，其中CD5檢測(cè)采用BD公司預(yù)混的三色組合：CD5-FITC、CD10-藻紅蛋白(phycoerythrin, PE)、CD19-Per-CP。本研究中重復(fù)檢測(cè)CD5時(shí)，采用CD5-PE-Cy7和CD19-APC單標(biāo)抗體，CD5抗體為同一克隆號(hào)。流式細(xì)胞儀為美國(guó)BD公司FACSAria I型，熒光激發(fā)光波長(zhǎng)488 nm和633 nm，系統(tǒng)分析軟件為DIVA 6.0.1。血常規(guī)檢測(cè)采用SYSMEX XE2100 全自動(dòng)血液分析儀(Sysmex公司)。

三、檢測(cè)方法

采集所有患者外周血乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝標(biāo)本2 mL，常規(guī)檢測(cè)血常規(guī)；骨髓穿刺獲取骨髓液標(biāo)本3 mL，EDTA抗凝，涂片形態(tài)學(xué)證實(shí)無(wú)稀釋。 調(diào)整細(xì)胞數(shù)至每管白細(xì)胞總數(shù)為5×106，各指標(biāo)根據(jù)抗體的顏色標(biāo)記做適當(dāng)組合。按說(shuō)明書推薦用量加入抗體標(biāo)本計(jì)數(shù)分管后先按各組合分別加入不同顏色標(biāo)記的抗體，空白對(duì)照管加入采用各種顏色的同型對(duì)照。室溫避光孵育15 min，2 mL Tris-NH4Cl裂解液裂解紅細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline, PBS)洗滌后上機(jī)。檢測(cè)輕鏈的標(biāo)本在加入抗體之前先用PBS洗滌3遍，以去除血漿中輕鏈對(duì)抗體的阻斷結(jié)合作用。檢測(cè)前常規(guī)進(jìn)行儀器質(zhì)控監(jiān)測(cè)及熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)。檢測(cè)時(shí)首先根據(jù)前向散射光(forward scatter, FSC)和側(cè)向散射光(side scatter, SSC)信號(hào)、CD45和SSC對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行設(shè)門，膜表面標(biāo)志表達(dá)以≥20%判斷為陽(yáng)性。

結(jié)果

4例患者的外周血和骨髓形態(tài)學(xué)檢測(cè)、初次檢測(cè)免疫表型表達(dá)結(jié)果見表1。4例患者CD5陽(yáng)性細(xì)胞占CD19比例情況見圖1。

分析時(shí)以CD19陽(yáng)性細(xì)胞設(shè)門選定B細(xì)胞[圖1(a)，P3門]，以未加抗體空白對(duì)照管，設(shè)定十字門初始位置，同時(shí)以CD19陰性和SSC低信號(hào)細(xì)胞群內(nèi)CD5陽(yáng)性細(xì)胞(含T細(xì)胞)和CD5陰性細(xì)胞作為內(nèi)對(duì)照[見圖1(a)，P4門]，確定最終門的位置，計(jì)算CD5+CD19+/CD19+比例。圖中可見，4例患者CD19+B細(xì)胞均明顯成群，前3例(Pa1~Pa3)患者具有相似的SSC信號(hào)，Pa4 CD19+細(xì)胞SSC信號(hào)明顯增加[見圖1(a)，Pa4]。無(wú)論是FITC或PE-Cy7熒光素標(biāo)記，4例患者T細(xì)胞CD5+細(xì)胞均獨(dú)立成群，而 B細(xì)胞異常表達(dá)CD5時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著低于自身T細(xì)胞表面CD5表達(dá)[見圖1(b)、(c)]。以FITC標(biāo)記檢測(cè)CD5表達(dá)，前3例患者(Pa1~Pa3)B細(xì)胞表面CD5+細(xì)胞均未獨(dú)立成群，呈連續(xù)表達(dá)模式，CD5+細(xì)胞占CD19陽(yáng)性細(xì)胞比例分別為47.1%、17.7%、6.7%，Pa4未見B細(xì)胞表面明顯CD5表達(dá)成群(見圖1(b)，Q2)。以膜表達(dá)≥20%為標(biāo)準(zhǔn)，僅Pa1 CD5表達(dá)陽(yáng)性，Pa2、Pa3、Pa4 CD5表達(dá)均應(yīng)判為陰性。

注：以FSC、SSC和CD45、SSC設(shè)門圈定有核細(xì)胞后，以CD19+細(xì)胞設(shè)門[見(a)，P3門]，判斷CD5+細(xì)胞占CD19+細(xì)胞比例[見(b)、(c)]；以CD19-和SSC低信號(hào)細(xì)胞群內(nèi)CD5+細(xì)胞(含T細(xì)胞)和CD5-細(xì)胞作為內(nèi)對(duì)照[見圖1(a)，P4門]，設(shè)定十字Maker的位置，確定CD5+CD19+/CD19+細(xì)胞比例[Q2門內(nèi)數(shù)值(%)]；(b)列為FITC標(biāo)記檢測(cè)CD5表達(dá)，(c)列為PE-Cy7標(biāo)記檢測(cè)CD5表達(dá)

圖1FITC標(biāo)記降低了檢測(cè)CLL患者B細(xì)胞表面CD5的檢出率

以高亮度的PE-Cy7標(biāo)記的CD5抗體重新檢測(cè)這4例患者CD5表達(dá)。結(jié)果顯示Pa1和Pa2的CD19+CD5+細(xì)胞獨(dú)立成群，其占CD19+細(xì)胞比例分別顯著上升為91.1%、70.3%，見圖1中的Pa1和Pa2；而CD5表達(dá)仍呈連續(xù)表達(dá)模式，但CD5+細(xì)胞比例顯著上升，占38.2%，見圖1中的Pa3。此時(shí)，以膜表達(dá)≥20%為標(biāo)準(zhǔn)，3例患者CD5表達(dá)均可判為陽(yáng)性。而Pa4采用PE-Cy7標(biāo)記CD5檢測(cè)時(shí)， CD5+細(xì)胞比例與FITC標(biāo)記時(shí)接近，少部分細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度高，疑似門內(nèi)混雜T細(xì)胞所致，且所占比例均未達(dá)到陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，因此CD5表達(dá)判為陰性。

討論

近年來(lái)白血病的免疫分型已成為血液惡性腫瘤診斷不可缺少的重要依據(jù)之一，已經(jīng)被納入多種白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也是白血病治療后微小殘留灶檢測(cè)的重要方法之一。但在實(shí)際臨床使用中，涉及的流式細(xì)胞儀型號(hào)多樣、試劑種類繁多、選擇抗體組合的經(jīng)驗(yàn)和習(xí)慣的也不同、各種指標(biāo)采用的標(biāo)記熒光素也大不相同，因此臨床檢測(cè)結(jié)果變異較大，準(zhǔn)確性難以評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果難以相互比對(duì)，結(jié)果分析需要較強(qiáng)的專業(yè)理論基礎(chǔ)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。在選擇不同熒光素標(biāo)記的指標(biāo)時(shí)，其原則是需要同時(shí)考慮熒光強(qiáng)度和抗原表位密度，對(duì)表達(dá)少的抗原表位應(yīng)盡可能選擇強(qiáng)度強(qiáng)的熒光素。然而在實(shí)際使用過(guò)程中，并不是每個(gè)實(shí)驗(yàn)室、針對(duì)每種疾病都能認(rèn)識(shí)到這一點(diǎn)，并加以評(píng)估驗(yàn)證和進(jìn)行正確的臨床應(yīng)用。而且有些抗原表位在某些細(xì)胞上高表達(dá)，某些細(xì)胞上低表達(dá)，對(duì)這類抗原的檢測(cè)更需要對(duì)抗原本身的表達(dá)特點(diǎn)有深刻的了解，才能正確選擇標(biāo)記熒光素的種類，做出正確的檢測(cè)結(jié)果。對(duì)于一些常見檢測(cè)指標(biāo)如B細(xì)胞表面CD5/CD19/CD10等，試劑廠家通常會(huì)生產(chǎn)一些標(biāo)記了各種熒光素的預(yù)混的抗體組合，以減少常規(guī)操作步驟，減少操作誤差。然而實(shí)際應(yīng)用中，這些預(yù)混的組合因?yàn)轭A(yù)先標(biāo)記熒光素的限制，是否適合用于特定疾病指標(biāo)的檢測(cè)仍需要進(jìn)一步的臨床驗(yàn)證。

對(duì)于CLL的免疫表型檢測(cè)，目前的診斷標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)提供了需要檢測(cè)的主要指標(biāo)。但在實(shí)際的臨床工作中可能存在由于使用不恰當(dāng)?shù)臒晒馑貥?biāo)記，使得部分指標(biāo)的檢出率偏低，某些重要指標(biāo)甚至影響了疾病的診斷。在國(guó)內(nèi)對(duì)于CLL診斷的研究中，確診為CLL患者的CD5陰性率從2.9%~28.2%不等，跨度非常大，且絕大部分報(bào)道CLL患者的CD5陰性率超過(guò)10%[5-12]。而國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道CD5陰性B-CLL比例較低。大樣本前瞻性研究發(fā)現(xiàn)確診病例中僅約6.8%的患者為CD5-的非典型或變異型B-CLL[13-14]，國(guó)內(nèi)CD5-CLL的比率明顯高于國(guó)外。這與目前國(guó)內(nèi)外CLL的診斷標(biāo)準(zhǔn)把CD5+作為CLL的主要診斷依據(jù)似乎有一定的沖突。發(fā)生這種現(xiàn)象的原因可能與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段和技術(shù)有一定的關(guān)系。因此本研究對(duì)確診的CLL患者的CD5采用不同熒光素標(biāo)記抗體進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)弱熒光素可能對(duì)CLL患者CD5檢測(cè)的影響。

本研究在既往臨床工作中針對(duì)臨床懷疑是CLL患者的標(biāo)本，初次篩查CD5、CD10、CD19的試劑為預(yù)混的三色組合：CD5-FITC、CD10-PE、CD19-PerCP。發(fā)現(xiàn)盡管采用CD5-FITC可以正確檢測(cè)出部分CD5表達(dá)量較高的患者， CD5-FITC陽(yáng)性B細(xì)胞在流式散點(diǎn)圖中也可以呈現(xiàn)獨(dú)立成群。但依然有部分患者盡管外周血B細(xì)胞絕對(duì)數(shù)、骨髓形態(tài)學(xué)和免疫表型特點(diǎn)均提示CLL診斷可能，但患者B淋巴細(xì)胞CD5未達(dá)到陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞表面異常CD5的表達(dá)強(qiáng)度明顯低于患者體內(nèi)T細(xì)胞表面CD5表達(dá)，而該預(yù)混試劑組合中CD5采用熒光強(qiáng)度最弱的FITC進(jìn)行標(biāo)記?？紤]到弱熒光素標(biāo)記弱表達(dá)抗原可能會(huì)造成該抗原檢測(cè)的假陰性結(jié)果，因此采用熒光強(qiáng)度較強(qiáng)的PE-Cy7標(biāo)記CD5抗體，重新對(duì)這些患者進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分患者CD5陽(yáng)性細(xì)胞比例均呈大幅度上調(diào)。本研究所列舉的3例患者中原來(lái)未能達(dá)到陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)的2例患者其CD5表達(dá)也判為陽(yáng)性。綜合本實(shí)驗(yàn)室外周血B細(xì)胞絕對(duì)數(shù)、骨髓形態(tài)學(xué)和臨床癥狀體征、其它免疫分子表達(dá)等各方面的證據(jù)，本研究中前3例患者均最終確診為CLL。從本研究所提供的流式圖形來(lái)看，病例2和3若按照CD5-FITC檢測(cè)結(jié)果判斷應(yīng)歸類于CD5-CLL，而按照CD5-PE-Cy7檢測(cè)結(jié)果判斷，這樣歸類顯然是不合適的，應(yīng)該屬于CD5+CLL患者。本研究所證實(shí)的這種人為檢測(cè)差異的存在可能是國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道的CD5-CLL患者比例明顯高于國(guó)外的現(xiàn)象的重要原因。同時(shí)以明確為陰性表達(dá)的B-ALL患者標(biāo)本(病例4)作為陰性對(duì)照，也證實(shí)本研究中第2次采用PE-Cy7標(biāo)記重新檢測(cè)發(fā)現(xiàn)3例患者CD5表達(dá)顯著上調(diào)，并非是由于該熒光素提高了檢測(cè)背景，而是由于其本身熒光強(qiáng)度高，提高了弱表達(dá)抗原的檢測(cè)能力所致。所以，異常B細(xì)胞表面CD5的準(zhǔn)確檢測(cè)對(duì)于CLL的診斷和鑒別診斷異常重要。CD5漏檢可人為增加CLL與其它CD5陰性或弱陽(yáng)性慢性淋巴細(xì)胞增殖性疾病鑒別診斷的難度，甚至出現(xiàn)誤診，如脾邊緣區(qū)淋巴瘤、濾泡淋巴瘤以及毛細(xì)胞白血病等。

本研究結(jié)果顯示FITC標(biāo)記的CD5抗體檢測(cè)T細(xì)胞表面CD5沒(méi)有問(wèn)題。因?yàn)槠銫D5呈高表達(dá)，在流式散點(diǎn)圖上可見到陽(yáng)性細(xì)胞獨(dú)立成群。然而B細(xì)胞表面表達(dá)CD5強(qiáng)度要弱很多，此時(shí)采用FITC標(biāo)記就可能造成CD5表達(dá)檢出率偏低，導(dǎo)致臨床診斷困難。國(guó)內(nèi)多個(gè)實(shí)驗(yàn)室曾采用FITC標(biāo)記抗體檢測(cè)B細(xì)胞表面CD5[5-6]，存在CLL患者白血病細(xì)胞表面CD5漏檢的可能。因此建議各實(shí)驗(yàn)室在使用該類試劑時(shí)，預(yù)先采用各種熒光素標(biāo)記的CD5對(duì)確診為CLL的病例進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)FITC標(biāo)記的CD5在本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)系統(tǒng)中是否能夠正確提供CD5表達(dá)率的檢出情況，有條件時(shí)建議優(yōu)先選擇熒光強(qiáng)度較高的熒光素標(biāo)記抗體檢測(cè)CD5表達(dá)。在臨床白血病和淋巴瘤其他免疫表型檢測(cè)中，對(duì)弱表達(dá)抗原選擇合適的熒光素標(biāo)記，并在臨床實(shí)踐中加以驗(yàn)證和比對(duì)，確定其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，對(duì)于提供疾病正確的免疫表型，進(jìn)而為相關(guān)疾病的診斷提供充分的依據(jù)顯得異常重要，應(yīng)引起臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室流式檢測(cè)和報(bào)告人員的足夠重視。

參考文獻(xiàn)

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì). 中國(guó)慢性淋巴細(xì)胞白血病的診斷與治療指南(2011年版)[J]. 中華血液學(xué)雜志,2011,32(7): 498-501.

[2]范磊, 徐衛(wèi), 李建勇. 慢性淋巴細(xì)胞白血病2011年NCCN診療指南解讀[J]. 白血病·淋巴瘤, 2011, 20(2):121-122.

[3]HALLEK M. Chronic lymphocytic leukemia: 2013 update on diagnosis, risk stratification and treatment[J]. Am J Hematol, 2013, 88 (9): 803-816.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì),中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)血液腫瘤專業(yè)委員會(huì).中國(guó)成人急性淋巴細(xì)胞白血病診斷與治療專家共識(shí)[J]. 中華血液學(xué)雜志, 2012,33(9): 789-792.

[5]盧娟, 翟志敏, 張愛梅,等. 免疫表型在B慢性淋巴細(xì)胞白血病診斷和鑒別診斷中的意義[J]. 中國(guó)綜合臨床,2009,25(2): 170-172.

[6]許曉東,常乃柏,趙聲明,等. 慢性淋巴細(xì)胞白血病患者31例免疫表型分析[J]. 中華老年醫(yī)學(xué)雜志, 2010, 29(2): 135-137.

[7]張青艷, 陳智超, 趙阿蘭, 等.慢性淋巴細(xì)胞白血病的臨床免疫表型分析[J]. 山東醫(yī)藥, 2013,53(11): 1-3.

[8]劉艷榮, 常艷, 王卉, 等.慢性淋巴細(xì)胞系統(tǒng)白血病免疫表型分析[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2003, 26(1): 17-21.

[9]許芳, 程澍, 翁香琴, 等.112例CD5陽(yáng)性與15例CD5陰性慢性淋巴細(xì)胞白血病的比較分析[J].中華血液學(xué)雜志,2008, 29(2):134-135.

[10]易莎，張小斌,陳燕.103例慢性淋巴細(xì)胞白血病患者免疫表型的研究[J].臨床血液學(xué)雜志,2010, 23(2): 86-88.

[11]馬勤芬, 周惠芬, 朱明清, 等.51例慢性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)特征研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志, 2007, 15(4): 696-699.

[12]秦繼霞 , 方美云, 孫國(guó)珍, 等. 免疫分型聯(lián)合核型檢查對(duì)初診慢性淋巴細(xì)胞白血病的診斷價(jià)值[J]. 白血病·淋巴瘤, 2012, 21(11): 681-683.

[13]CAVALCANTI JU'NIOR GB, SALES VS, CAVALCANTI E SILVA DG, et al. Detection of CD5 in B-cell chronic lymphoproliferative diseases by flow cytometry: a strong expression in B-cell chronic lymphocytic leukemia[J]. Acta Cir Bras, 2005, 20(Suppl 1): 101-107.

[14]GEISLERr CH, LARSEN JK, HANSEN NE, et al. Prognostic importance of flow cytometric immun-ophenotyping of 540 consecutive patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia[J]. Blood, 1991, 78(7):1795-1802.

(本文編輯：范基農(nóng))