張興利　吳鵬飛　邱宏春　孔榮

ITP患者激素治療前后血清IL-18、CXCL10表達(dá)水平的變化及意義探討

張興利吳鵬飛邱宏春孔榮

【摘要】目的 研究原發(fā)免疫性血小板減少癥（primary immune thrombocytopenia，ITP）患者血清中白細(xì)胞介素-18（Interleukin-18，IL-18）、CXC趨化因子配體10（CXC chemo-kine ligand-10，CXCL10）的表達(dá)水平，探討其在ITP發(fā)病中的臨床意義。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）定量檢測(cè)45例ITP患者、20例健康者（正常對(duì)照組）血清IL-18、CXCL10的水平。結(jié)果 激素治療前ITP患者血清IL-18、CXCL10的表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組（t=5.126，6.576，P＜0.05），治療后兩者與治療前比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=10.616，7.399，P＜0.05）。激素治療有效組IL-18、CXCL10的表達(dá)水平與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（q = 0.521，0.871，P＞0.05），而無(wú)效組IL-18的表達(dá)水平仍高于有效組和正常對(duì)照組（q=6.137，5.867，P＜0.05）；無(wú)效組CXCL10的表達(dá)水平同樣高于有效組和正常對(duì)照組（q=8.933，7.642，P ＜ 0.05）。初發(fā)未治療ITP患者血清IL-18、CXCL10表達(dá)呈正相關(guān)性（r=0.539，P＜0.05）。結(jié)論 ITP患者不同時(shí)期血清中IL-18、CXCL10的表達(dá)水平不同，且兩者具有顯著相關(guān)性，提示其可能在ITP的發(fā)病及治療過(guò)程中發(fā)揮一定的作用，聯(lián)合檢測(cè)有望在ITP的病情監(jiān)測(cè)、預(yù)后判斷等方面提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】原發(fā)免疫性血小板減少癥；白細(xì)胞介素18；CXC趨化因子配體10

作者單位：215300 江蘇省昆山市第三人民醫(yī)院血液腫瘤科

Changes and Significance of Serum IL-18 and CXCL10 Levels in Patients With ITP Before and After Hormone Therapy

ZHANG Xingli WU Pengfei QIU Hongchun KONG Rong, Department of Hematology and Oncology, the Third People's Hospital of Kunshan, Kunshan 215300, China

[Abstract]Objective To study the expression of Interleukin-18(IL-18)and CXC chemo-kine ligand-10(CXCL10)in primary immune thrombocytopenia(ITP)and clarify their clinical significance. Methods Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect the expression of IL-18 and CXCL10 in serum samples from 45 ITP patients, 20 volunteers(normal control group)served as controls. Results The expression levels of IL-18 and CXCL10 in ITP untreated group were significantly higher than normal control group(t=5.126, 6.576, P<0.05). Both IL-18 and CXCL10 of post-treatment group were significantly different with untreated group(t=10.616, 7.399, P<0.05). Additionally, the levels of IL-18 and CXCL10 in effective-treatment group were not significantly different with normal control(q=0.521, 0.871, P>0.05). However, the levels of IL-18 in ineffective-treatment group were still significantly higher than effective-treatment group and normal control group(q=6.137, 5.867, P<0.05). The levels of CXCL10 in ineffective-treatment group were also significantly higher than effective-treatment group and normal control group(q=8.933, 7.642, P<0.05). There was positive correlation between serum expression levels of IL-18 and CXCL10 in ITP untreated group(r=0.539, P<0.05). Conclusion Different expressions of serum IL-18 and CXCL10 were found in ITP patients, which reflected they may play an important role in pathogenesis and therapy of ITP. United detection of serum IL-18 and CXCL10 may be used as reference indexes of ITP’ clinical stages and prognosis.

[Key words]Primary immune thrombocytopenia, Interleukin-18, CXC chemo-kine ligand-10

原發(fā)免疫性血小板減少癥（primary immune thrombocytopenia，ITP）是一種獲得性自身免疫性出血性疾病。研究表明，Th1/Th2細(xì)胞的平衡在自身免疫病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，其平衡失調(diào)與ITP的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[1]。目前，在多種疾病中發(fā)揮重要作用的IL-18、CXCL10在ITP患者血清中的表達(dá)水平方面的研究還很少。為此，我們檢測(cè)了45例ITP患者的血清IL-18、CXCL10在激素治療前后表達(dá)水平的變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料和方法

1.1 一般資料

45例ITP患者均為江蘇省昆山市第三人民醫(yī)院血液腫瘤科2012年1月～2014年6月新診斷的ITP患者，根據(jù)《成人原發(fā)免疫性血小板減少癥診斷與治療中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)（2011年版）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。其中男性11例，女性34例，年齡12～91歲，平均年齡（46.78±19.49）歲。選取20例健康體檢者，近期均無(wú)局部及全身感染性疾病，均排除肝、心、腎、肺及其他惡性疾病，也無(wú)其他慢性疾病史。本研究通過(guò)昆山市第三人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并經(jīng)入組者知情同意。

1.2標(biāo)本采集

抽取正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（激素治療前及治療至血小板正常后）清晨靜息狀態(tài)下空腹靜脈血3～5 ml，標(biāo)本靜置2 h后，3 000 r/min離心15 min，分離血清，于-80℃凍存待測(cè)，避免反復(fù)凍溶。

1.3主要試劑及儀器

IL-18 ELISA試劑盒、CXCL10 Elisa試劑盒均購(gòu)自上海藍(lán)基生物公司。酶標(biāo)儀器：型號(hào)：MK3，Thermo公司。-80℃超低溫冰箱：中國(guó)海爾有限公司。

1.4治療方法

對(duì)所有入組患者均采用地塞米松靜滴[劑量按潑尼松1 mg/（Kg·d），以潑尼松：地塞米松=5 mg：0.75 mg換算]，至血小板達(dá)正常水平后改潑尼松口服。結(jié)果：45例ITP患者在運(yùn)用激素治療后有40例患者血小板水平在一周內(nèi)升至正常（平均6.18天），有5例患者在運(yùn)用激素治療兩周后血小板仍＜30×109/L或者血小板計(jì)數(shù)增加不到基礎(chǔ)值的兩倍，視為治療無(wú)效。

1.5檢測(cè)方法

采用ELISA檢測(cè)每份血清中待測(cè)因子的水平，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件包分析，所有數(shù)據(jù)處理前行正態(tài)性檢驗(yàn)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，采用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（x-±s）表示，治療前后組均數(shù)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析進(jìn)行組間兩兩比較，行SNK法q檢驗(yàn)。兩變量關(guān)聯(lián)性

分析采用線(xiàn)性相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1ITP患者激素治療前、后血清IL-18、CXCL10表達(dá)水平

ITP患者激素治療前血清IL-18、CXCL10水平均高于正常對(duì)照組（t=5.126，6.576，P＜0.05）；治療后血清IL-18、CXCL10水平與治療前比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=10.616，7.399，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1　各組血清IL-18、CXCL10表達(dá)水平（x-±s）

2.2ITP患者激素治療后不同療效組血清IL-18、CXCL10表達(dá)水平

激素治療有效組患者的血清IL-18水平與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（q=0.521，P＞0.05）；無(wú)效組患者的血清IL-18水平高于正常對(duì)照組和有效組（q=6.137，5.867，P＜0.05）。激素治療有效組患者的血清CXCL10水平與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（q=0.871，P＞0.05）；無(wú)效組患者的血清CXCL10水平高于正常對(duì)照組和有效組（q=8.933，7.642，P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2　ITP患者激素治療后不同療效組血清IL-18、CXCL10表達(dá)水平（x-±s）

2.3初發(fā)未治療ITP患者血清IL-18、CXCL10的相關(guān)性

運(yùn)用SPSS13.0軟件包對(duì)45例初發(fā)未治療ITP患者的血清IL-18、CXCL10值繪制散點(diǎn)圖（圖1），結(jié)果顯示IL-18、CXCL10值之間具有線(xiàn)性相關(guān)趨勢(shì)。進(jìn)一步做線(xiàn)性回歸與相關(guān)分析，結(jié)果顯示兩者具有正相關(guān)性（r =0.539，P＜0.05）。

3　討論

圖1　初發(fā)未治療ITP患者的血清IL-18、CXCL10值散點(diǎn)圖

也包括細(xì)胞免疫的失調(diào)，T細(xì)胞的異常在ITP的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到的作用越來(lái)越受到重視。一般認(rèn)為ITP多傾向于 Th1細(xì)胞反應(yīng)[2]。Th1細(xì)胞主要分泌TNF、IFN-γ等細(xì)胞因子，這類(lèi)細(xì)胞因子能清除胞內(nèi)病原體，介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。在活動(dòng)期ITP患者中，一些T淋巴細(xì)胞基因上調(diào)，其中與Th1優(yōu)勢(shì)有關(guān)的IFN-γ等因子水平顯著升高[3]。近年來(lái)，有關(guān)IL-10、TNF-α等細(xì)胞因子在ITP中的表達(dá)情況研究較多[4-5]，但是IL-18、CXCL10在ITP患者血清中的表達(dá)水平方面的研究卻很少。我們的研究發(fā)現(xiàn)，ITP患者激素治療前血清IL-18、CXCL10的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組，提示IL-18、CXCL10在ITP患者的疾病發(fā)生過(guò)程中可能起到一定的作用。

IL-18最初被命名為“IFN-γ誘生因子”，具有強(qiáng)大的誘生IFN-γ能力，能夠加強(qiáng)FasL介導(dǎo)的Th1類(lèi)細(xì)胞毒效應(yīng)，是Th1和Th2細(xì)胞分化的重要決定因子。作為T(mén)細(xì)胞炎癥介質(zhì)的強(qiáng)力誘導(dǎo)者，IL-18在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、再生障礙性貧血等疾病的患者中已經(jīng)檢測(cè)出其表達(dá)失衡。任敏[6]等檢測(cè)了34例類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者外周血清IL-18水平，RA活動(dòng)組的表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，高度活動(dòng)組顯著高于低度活動(dòng)組，提示血清中IL-18作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的下游致炎因子，在RA發(fā)病機(jī)制中起重要作用。單寧寧[7]等分析29例再生障礙性貧血（AA）患者血清IL-18水平，結(jié)果顯示AA患者血清IL-18較正常對(duì)照組明顯升高，其中重型AA患者升高更為明顯，提示其在AA患者的免疫紊亂和發(fā)生、發(fā)展中起著一定作用。

CXCL10能趨化招募活化的T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞遷移，主要介導(dǎo)Th1型炎癥反應(yīng)，通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)免疫細(xì)胞的遷移、活化，參與多種疾病的免疫調(diào)控。許多研究表明，CXCL10參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。孟鳳苓[8]等采用雙抗夾心ELISA法檢測(cè)不同臨床階段Graves病（GD）患者和正常對(duì)照者血清CXCL10水平，發(fā)現(xiàn)GD未治療組及復(fù)發(fā)組高于緩解組及正常對(duì)照組，提示其可以作為評(píng)估GD患者疾病免疫狀態(tài)外周血的標(biāo)志物。黃海峰等[9]檢測(cè)35例尋常型銀屑病患者血清CXCL10的表達(dá)情況，研究發(fā)現(xiàn)患者血清CXCL10的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組。張銘明[10]等檢測(cè)96例系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者血清CXCL10表達(dá)水平并對(duì)亞組進(jìn)行分析，結(jié)果顯示CXCL10的表達(dá)水平與SLE疾病活動(dòng)性密切相關(guān)，尤其對(duì)狼瘡腎炎及疾病活動(dòng)的早期檢測(cè)具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，ITP患者在經(jīng)過(guò)激素治療后血清IL-18、CXCL10表達(dá)水平與治療前相比均顯著下降，其中有效組IL-18、CXCL10的表達(dá)水平與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而無(wú)效組的表達(dá)水平無(wú)明顯下降，顯著高于有效組及正常對(duì)照組。這提示IL-18、CXCL10在ITP的發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮一定的作用，其表達(dá)水平的變化可能與預(yù)后有關(guān)。同時(shí)，對(duì)初發(fā)未治療ITP患者血清IL-18、CXCL10的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析表明，兩者具有正相關(guān)性。分析原因，IL-18具有強(qiáng)大的誘生IFN-γ能力，而在IFN-γ的刺激下CXCL10分泌增加，兩者共同作用，調(diào)控Th1型炎癥反應(yīng)。因此，上述結(jié)果表明，在ITP的發(fā)病及治療過(guò)程中IL-18、CXCL10可能相互作用，共同發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。聯(lián)合檢測(cè)IL-18、CXCL10有望在ITP的病情監(jiān)測(cè)、預(yù)后判斷及治療方案的選擇等方面提供依據(jù)。

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基金項(xiàng)目：昆山市社會(huì)發(fā)展科技計(jì)劃項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)KS1334

通訊作者：張興利，E-mail：zhangxingli2013204@163.com

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.24.029

【文章編號(hào)】1674-9308（2015）24-0045-03

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

【中圖分類(lèi)號(hào)】R558