李　杰，歐余航，陳　強*

(1.中國人民解放軍第175醫(yī)院/廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院藥劑科，漳州　363000；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州　350122)

?

復(fù)方九節(jié)茶乳膏的抗炎鎮(zhèn)痛及皮膚安全性的初步研究

李杰1，歐余航2，陳強2*

(1.中國人民解放軍第175醫(yī)院/廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院藥劑科，漳州363000；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州350122)

摘要：目的初步評價復(fù)方九節(jié)茶乳膏的抗炎、鎮(zhèn)痛作用及其使用安全性。方法采用醋酸扭體法和小鼠耳廓腫脹模型觀察鎮(zhèn)痛、抗炎作用，并進(jìn)行家兔皮膚刺激實驗和豚鼠皮膚過敏實驗。 結(jié)果復(fù)方九節(jié)茶乳膏能顯著性減少冰醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)；抑制由二甲苯所致小鼠耳廓腫脹。復(fù)方九節(jié)茶乳膏對家兔完整皮膚無刺激性，單次給藥破損皮膚組1只家兔出現(xiàn)輕度水腫，24 h后恢復(fù)正常；豚鼠實驗未出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)。結(jié)論 復(fù)方九節(jié)茶乳膏具有明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎作用；復(fù)方九節(jié)茶乳膏對家兔皮膚無明顯刺激性作用，對豚鼠皮膚無明顯致變態(tài)反應(yīng)作用。

關(guān)鍵詞：復(fù)方九節(jié)茶乳膏；抗炎;鎮(zhèn)痛；安全性

九節(jié)茶為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb.) Nakai的干燥地上部分[1]。復(fù)方九節(jié)茶乳膏是由九節(jié)茶、冰片制成的外用中藥乳膏劑，二藥合用具有活血化瘀、消腫止痛的功效，可用于關(guān)節(jié)扭傷、肌肉拉傷、韌帶捩?zhèn)燃毙攒浗M織損傷。本實驗主要采用醋酸扭體法觀察鎮(zhèn)痛作用；采用小鼠耳廓腫脹模型觀察抗炎作用。根據(jù)《中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，《中藥天然藥物免疫毒性(過敏性、光過敏反應(yīng))研究技術(shù)指導(dǎo)原則》對該制劑進(jìn)行了家兔皮膚刺激性以及豚鼠皮膚致敏性實驗研究，進(jìn)一步探討該制劑臨床使用的安全性。

1儀器與材料

1.1儀器DRL-1型實驗室乳化機(上海迪真化工設(shè)備有限公司)；CP214電子天平(奧豪斯儀器有限公司)；8 mm打孔器。

1.2試藥硬脂酸98 g，十八醇35 g，甘油122 g，液狀石蠟108 g，吐溫-80 54.5 g，山梨酸鉀3 g，九節(jié)茶浸膏100 g，加水適量制成復(fù)方九節(jié)茶乳膏1 000 g(動物給藥按廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)收載的藥材用量換算)；九節(jié)茶乳膏(不含冰片，自制)；空白基質(zhì)(自制)；扶他林(北京諾華制藥有限公司)；復(fù)方醋酸地塞米松乳膏(沈陽圣元藥業(yè)有限公司)；二甲苯，冰醋酸，2，4-二硝基氯代苯(分析純，成都西亞化工股份有限公司，批號201205120)、丙酮(分析純，衡陽市凱信化工試劑有限公司，批號20120425)。

1.3實驗動物昆明種小白鼠，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，清潔級，由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，許可證編號：SCXK(滬)2007-0005；健康成年新西蘭兔，體質(zhì)量2.5～3.0 kg，雌雄各半，由上海市松江區(qū)松聯(lián)實驗動物場提供，許可證編號：SCXK(滬)2012-0011；豚鼠體質(zhì)量300～350 g，雌雄各半，由上海市松江區(qū)松聯(lián)實驗動物場提供，許可證編號：SCXK(滬)2012-0011。

2方法

2.1(復(fù)方)九節(jié)茶乳膏制備取處方量的九節(jié)茶水提醇沉上清液、甘油、山梨酸鉀、吐溫-80和適量純化水，加熱至80 ℃作為水相；另取處方量的十八醇、液體石蠟和硬脂酸在80 ℃水浴上熔化后作為油相。油相水相均保溫5 min，然后將油相水相同時緩緩加入到容器中，按同一方向攪拌至呈棕黃色乳狀液，等溫度降至約60 ℃時，加入冰片，連續(xù)攪拌并冷卻至室溫，即得復(fù)方九節(jié)茶乳膏(不加冰片，連續(xù)攪拌至室溫，即得九節(jié)茶乳膏)。

2.2抗炎鎮(zhèn)痛實驗

2.2.1二甲苯致小鼠耳腫脹取小鼠50只，隨機分5組,每組10只，雌雄各半，分別為復(fù)方九節(jié)茶乳膏組；陽性組(復(fù)方醋酸地塞米松)；九節(jié)茶乳膏組；空白基質(zhì)組；空白組(生理鹽水10 mL·kg-1)。將藥物涂于左右耳，每隔30 min涂藥1次，共3次。于末次涂藥60 min后，以蒸餾水洗去藥物，用干棉球擦凈。給小鼠右耳涂以二甲苯0.05 mL·只-1，與左耳作對照，1 h后通過頸椎脫臼法處死小鼠，立即用直徑8 mm打孔器沿小鼠左右耳廓相同部位打孔取材，分別稱質(zhì)量，以左、右耳片質(zhì)量(mg)之差為腫脹程度，計算各組腫脹度[2]。求出每組小鼠的平均值，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

2.2.2小鼠醋酸扭體反應(yīng)取小鼠50只，隨機分5組，每組10只，雌雄各半，分別為復(fù)方九節(jié)茶乳膏組；陽性組(扶他林)；九節(jié)茶乳膏組；空白基質(zhì)組；空白組(生理鹽水10 mL·kg-1)。將每組小鼠背部脫毛約2×2 cm2，第2天涂藥，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥1 h后，每鼠ip 6 mL·L-1冰醋酸溶液0.2 mL致痛，記錄20 min內(nèi)每只小鼠的扭體次數(shù)[3]。計算各給藥組小鼠的平均扭體數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

2.3皮膚刺激性實驗

2.3.1單次給藥皮膚刺激性實驗取健康成年新西蘭兔8只，在給藥前24 h用80 g·L-1硫化鈉將新西蘭兔背部脊柱兩側(cè)毛脫掉，脫毛面積每側(cè)約10 cm×10 cm。隨機分2組，每組4只，分為完整皮膚組和破損皮膚組。破損皮膚組使用滅菌針頭將新西蘭兔背部脫毛部位的消毒皮膚劃“#”字破口，破口橫豎約3 cm，且以滲血為度，并使左右兩側(cè)皮膚破損程度一致。2組新西蘭兔左側(cè)背均涂抹復(fù)方九節(jié)茶乳膏1.0 g，右側(cè)背均涂抹空白乳膏基質(zhì)1.0 g，用3層紗布覆蓋，再用醫(yī)用橡皮膏固定6 h后，用溫水洗凈藥物，觀察涂抹部位1，24，48和72 h皮膚刺激反應(yīng)，按表1、表2相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分[4-8]。

表1皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)

Tab.1The standard of grading for skin irritation test

紅斑分值水腫分值無紅斑0無水腫0輕度紅斑(勉強可見)1輕度水腫(勉強可見)1中度紅斑(明顯可見)2中度水腫(明顯隆起)2重度紅斑3重度水腫(皮膚隆起1mm,輪廓清楚)3紫紅色紅斑到輕度焦痂形成4重水腫(皮膚隆起1mm以上并有擴(kuò)大)4最高總分值8

表2皮膚刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn)

Tab.2 The standard of grading for skin irritation strength

平均分值評價0～0.49無刺激性0.5～2.99輕度刺激性3.0～5.99中度刺激性6.0～8.00強刺激性

2.3.2多次給藥皮膚刺激實驗實驗動物、背部脫毛面積、實驗分組均同單次給藥皮膚刺激實驗。2組新西蘭兔左側(cè)背均涂抹復(fù)方九節(jié)茶乳膏1.0 g·只-1·d-1，右側(cè)背均涂抹空白乳膏基質(zhì)1.0 g·只-1·d-1，連續(xù)涂抹1周，停藥后觀察1周。分別記錄1，24，48和72 h給藥部位出現(xiàn)紅斑、水腫及其他異常情況。

2.4皮膚過敏性實驗

2.4.1致敏接觸取白色豚鼠30只，將豚鼠隨機分為3組，即復(fù)方九節(jié)茶乳膏組、空白基質(zhì)組和陽性對照組(2，4-二硝基氯代苯)，每組10只，雌雄各半。于給受試藥物前24 h，用剪刀先將長毛發(fā)剪掉，再使用80 g·L-1硫化鈉溶液將豚鼠背部兩側(cè)脫毛，每側(cè)面積約為10 cm2。致敏接觸:將受試藥物分別涂于豚鼠背部左側(cè)脫毛區(qū)，給藥組涂復(fù)方九節(jié)茶乳膏0.2 g·只-1，空白基質(zhì)組涂乳膏基質(zhì)0.2 g·只-1，陽性對照組涂10 g·L-12，4-二硝基氯代苯0.2 mL·只-1，給藥6 h后，用溫水洗凈藥物。實驗第7天和第14天，采用相同方法重復(fù)操作一次，連續(xù)觀察每組動物受試區(qū)域的水腫及紅斑情況，并做詳細(xì)記錄[9-11]。見表3。

表3皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)

Tab.3 The standard of grading for skin sensitization test

致敏發(fā)生率/%皮膚致敏性評價0～10無致敏性11～30輕度致敏性31～60中度致敏性61～80高度致敏性81～100極高度致敏性

2.4.2激發(fā)接觸于致敏接觸末次給藥后14 d，采用相同方法將受試藥物分別涂于豚鼠背部右側(cè)去毛區(qū)。其中陽性對照用1 g·L-12，4-二硝基氯代苯。給藥6 h后，用適量溫水洗凈受試物，即刻觀察，于24，48和72 h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，按表1和表3評價標(biāo)準(zhǔn)記錄各時間過敏反應(yīng)分值。

反應(yīng)平均分值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/合計動物數(shù)

致敏率(%)=發(fā)生過敏動物數(shù)/合計動物數(shù)×100%

3結(jié)果

3.1二甲苯致小鼠耳腫脹見表4。

表4復(fù)方九節(jié)茶乳膏對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

Tab.4 The effect of CompoundSarcandraglabraOintment in the xylene-induced mice′s auricular swelling test

±s，n=10)

注：與空白組比較φ:P<0.01；與空白基質(zhì)組比較:**P<0.01，*P<0.05。

由表4可知，復(fù)方九節(jié)茶乳膏組與空白基質(zhì)組及空白組比較有極顯著性差異(P<0.01)；復(fù)方九節(jié)茶乳膏組與陽性組(復(fù)方醋酸地塞米松)比較無顯著性差異(P>0.05)；九節(jié)茶乳膏組與空白基質(zhì)組及空白組比較有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，且復(fù)方九節(jié)茶乳膏組的效果優(yōu)于九節(jié)茶乳膏組。復(fù)方九節(jié)茶乳膏能顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹。

3.2小鼠醋酸扭體反應(yīng)見表5。

表5復(fù)方九節(jié)茶乳膏對小鼠醋酸扭體的影響

Tab.5 The effect of CompoundSarcandraglabraOintment in the mice’s wrenching body test

±s，n=10)

注：與空白組比較φ:P<0.01；與空白基質(zhì)組比較**:P<0.01。

由表5可知，復(fù)方九節(jié)茶乳膏組與空白基質(zhì)組及空白組比較均有顯著性差異(P<0.01)；九節(jié)茶乳膏組與空白基質(zhì)組及空白組比較均有顯著性差異(P<0.01)；復(fù)方九節(jié)茶乳膏組能顯著減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù)。

3.3皮膚刺激性實驗見表6。

表6復(fù)方九節(jié)茶乳膏對家兔完整和破損皮膚刺激反應(yīng)結(jié)果

Tab.6 The result of CompoundSarcandraglabraOintment on the integral and damaged rabbit skin irritation test

組別動物數(shù)/只觀察時間和反應(yīng)平均分值1h14h48h72h刺激強度完整皮膚給藥側(cè)40000無刺激性對照側(cè)40000無刺激性破損皮膚給藥側(cè)40.25000無刺激性對照側(cè)40000無刺激性

單次給藥皮膚刺激性實驗結(jié)果見表6。經(jīng)觀察及評分比較，單次給復(fù)方九節(jié)茶乳膏對家兔正常皮膚刺激反應(yīng)分值為0，表明無刺激性。對損傷皮膚刺激的平均反應(yīng)值在1 h為0.25，24 h以后為0，表明對損傷皮膚有輕度刺激性。多次給藥皮膚刺激實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，復(fù)方九節(jié)茶乳膏對家兔正常皮膚和損傷皮膚刺激反應(yīng)性分值均為0，表明多次給藥對皮膚無刺激性。提示單次給藥對損傷皮膚有輕度刺激性。本制劑對損傷皮膚應(yīng)慎用。

3.4皮膚過敏性實驗見表7。

表7復(fù)方九節(jié)茶乳膏對豚鼠皮膚的過敏反應(yīng)結(jié)果

Tab.7 The result of CompoundSarcandraglabraOintment on guinea pig skin sensitization test

組別動物數(shù)/只觀察時間和反應(yīng)平均分值1h14h48h72h致敏率/%給藥組100.20.1000陰性對照組1000000陽性對照組101.51.51.01.090

由表7可見，復(fù)方九節(jié)茶乳膏組，在去掉受試藥物后即刻觀察24 h，可見1只豚鼠皮膚出現(xiàn)輕度紅斑，但未觀察到動物有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性變態(tài)反應(yīng)?？瞻谆|(zhì)組在去掉受試物后未觀察到動物皮膚有嚴(yán)重的全身性變態(tài)反應(yīng)。根據(jù)實驗組與對照組豚鼠皮膚反應(yīng)的差別以及致敏率情況，可認(rèn)為復(fù)方九節(jié)茶乳膏及其基質(zhì)均為弱致敏物質(zhì)。

4討論

在進(jìn)行二甲苯致小鼠耳腫脹抗炎實驗時，考察了背部給藥和雙耳給藥，結(jié)果雙耳給藥組的效果明顯優(yōu)于背部給藥組，可能是由于受試藥物直接作用于致炎部位，起效明顯。在進(jìn)行小鼠醋酸扭體反應(yīng)實驗時，發(fā)現(xiàn)冰醋酸的濃度低或高，扭體次數(shù)均過少或過多，同時發(fā)現(xiàn)實驗動物的體質(zhì)量、實驗環(huán)境的溫度和安靜程度對扭體次數(shù)均有較大影響。初步藥效實驗結(jié)果表明，復(fù)方九節(jié)茶乳膏能顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，減少冰醋酸所致小鼠扭體次數(shù)。九節(jié)茶乳膏對抗炎鎮(zhèn)痛模型也有一定療效，復(fù)方九節(jié)茶乳膏中加入冰片后抗炎鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于九節(jié)茶乳膏，認(rèn)為二者有協(xié)同作用(需進(jìn)一步驗證)。進(jìn)一步安全性實驗表明，復(fù)方九節(jié)茶乳膏對豚鼠無明顯致敏作用，家兔完整皮膚和破損皮膚的刺激性實驗也無明顯刺激性。表明該藥是一種具有一定抗炎鎮(zhèn)痛作用及安全性較好的外用乳膏劑。

參考文獻(xiàn)：

[1]廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(第一冊)[S].廣州：廣東科技出版社，2004：4-5.

[2]黃山，郭立瑋，卞慧敏，等.通絡(luò)止痛軟膏抗炎、鎮(zhèn)痛作用的實驗研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(35):5243-5244，5247.

[3]朱全剛，陸松偉，汪龍，等.三利巴布膏劑的消腫止痛作用及皮膚刺激性研究[J].實用疼痛學(xué)雜志，2009，5(6):417-420.

[4]《中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京:國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.2005.

[5]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:140-143.

[6]李艷，艾儒棣，譚正懷，等.復(fù)方苦蛇乳膏皮膚刺激性和過敏性實驗研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，3(1):14-15.

[7]李得堂，唐洪梅，蔡慶群，等.療筋涂膜劑的皮膚給藥安全性評價[J].西北藥學(xué)雜志，2011，26(2):118-120.

[8]巨麗紅，翟攀，張建懷.復(fù)方潔舒洗劑毒性研究[J]. 西北藥學(xué)雜志，2010,25(6):441-442.

[9]潘海邦，于博.三黃片調(diào)和物外用安全性研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(15):238-240.

[10]《中藥天然藥物免疫毒性(過敏性、光過敏反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.中藥天然藥物免疫毒性(過敏性、光過敏反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京:國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.2005.

[11]田元春，伍小燕，盧鮮云，等.十一方藥酒急性毒性、皮膚刺激性和過敏性實驗[J].中國新藥雜志，2011，20(14):1341-1343，1350.

Preliminary study of anti-inflammatory and analgesic effects and safety of CompoundSarcandraglabraOintment

LI Jie1，OU Yuhang2，CHEN Qiang2*(1.Department of Pharmacy，the 175th Hospital of PLA，the Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University，Zhangzhou 363000，China；2.Department of Pharmacy，F(xiàn)ujian Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350122，China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the anti-inflammatory and analgesic effects and enepidermic safety of Compound Sarcandra glabra Ointment. MethodsThe auricular swelling test，the wrenching body test caused by the irritation of acetic acid in mice，guinea pig skin sensitization test and the rabbit skin irritation test were conducted. ResultsCompound Sarcandra glabra Ointment could reduce the swelling of mice in auricular swelling test and reduce the times of bodies wrenching caused by the irritation of acetic acid sharply．There was no irritation on the integral rabbit skin， but one rabbit damaged skin group appeared slight edema after a singal dose and recovered 24 h after the administration. Skin allergic reactions such as erythema and edema or systemic allergic reactions were not observed in the Guinea pig's skin test . ConclusionCompound Sarcandra glabra Ointment could suppress inflammation and alleviatie pains without irritative, allergic and toxic effects.

Key words:Compound Sarcandra glabra Ointment；anti-inflammatory; analgesic；safety

收稿日期：(2015-03-02)

通信作者：*陳強，男，研究員

作者簡介：李杰，女，藥師

基金項目：福建省科技廳重點項目(編號：2011I0003)

中圖分類號：R265

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)01-0064-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.020