王　云，管國倩，曹俊平，易理偉，劉　超，張旭東，李建銀，楊永建

(蘭州大學(xué)藥學(xué)院，蘭州　730000)

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高原舒顆粒對小鼠抗疲勞作用的實驗研究

王云，管國倩，曹俊平，易理偉，劉超，張旭東，李建銀*，楊永建

(蘭州大學(xué)藥學(xué)院，蘭州730000)

摘要：目的觀察高原舒顆粒的抗疲勞作用。方法采用肝糖原、血清尿素、血乳酸測定實驗和負(fù)荷游泳實驗，灌胃給予小鼠不同劑量的高原舒顆粒，比較各組小鼠力竭性游泳時間、肝糖原、血清尿素及血乳酸濃度水平的變化。結(jié)果與蒸餾水組相比較，高劑量組力竭性游泳時間明顯延長(P<0.01)，運動后肝糖原儲備量增加(P<0.05)，血清尿素濃度下降(P<0.05)，運動20 min后血乳酸濃度降低(P<0.05)。與紅景天陽性對照組相比，高劑量組在各組實驗中均無明顯差異(P>0.05)。結(jié)論高原舒顆粒對小鼠具有抗疲勞作用。

關(guān)鍵詞：高原舒顆粒；抗疲勞；紅景天膠囊

柳茶是以薔薇科繡線菊亞科植物窄葉鮮卑花(Sibiraealaevigata(Linn.) Maxim.)的嫩枝和葉入藥，是常見藏民用藥，具有健脾胃的功效，用于清胃熱、助消化，也可用于治療關(guān)節(jié)炎和局部癤腫[1]。近些年的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，其在脂類代謝、調(diào)節(jié)免疫功能、肝保護、抗腫瘤、抗氧化及抑菌、促消化、降糖、抗疲勞作用等方面具有廣泛的藥理作用[2-12]。在參考相關(guān)文獻(xiàn)和本實驗室研究的基礎(chǔ)上，我們制備了高原舒復(fù)方顆粒，并以小鼠為對象，觀察該復(fù)方顆粒緩解疲勞的效果，為進(jìn)一步開發(fā)本藥提供實驗依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器UV-2550分光光度計(日本島津公司生產(chǎn))；F3單道移液器(美國賽默飛世爾科技公司生產(chǎn))；XK80-A型漩渦混勻器(江蘇新康醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))；HH-2型恒溫水浴鍋(國華電器有限公司生產(chǎn))；計時器、XSC恒溫游泳箱(北京博創(chuàng)生物科技有限公司)。

1.2試藥高原舒顆粒主要成分為柳茶、黃芪和當(dāng)歸提取物，輔料為糊精和甘露醇。柳茶采自甘肅省甘南藏族自治州合作市郊當(dāng)州草原，海拔3 200 m，并經(jīng)蘭州大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)研究所鑒定。黃芪和當(dāng)歸為甘肅省道地藥材，購買于甘肅隴西縣百草堂藥業(yè)有限責(zé)任公司。紅景天膠囊由洛陽紅景天雪域制品有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號20140901，規(guī)格0.35 g·粒-1，用量為每次3粒，每天3次。肝糖原測試盒、血清尿素測試盒、血乳酸測試盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3動物健康清潔級昆明種小鼠240只，6周年齡，體質(zhì)量18～22 g，雄性，蘭州大學(xué)動物實驗中心提供。動物生產(chǎn)許可證號：SCXK2009(甘)-0004。實驗飼料，蘭州大學(xué)動物實驗中心提供。

2方法

2.1動物分組與給藥方法實驗前適應(yīng)生長3 d，游泳測試后進(jìn)入正式實驗。將小鼠隨機分為4組，每組60只，分別用于負(fù)荷游泳時間觀察、肝糖原測定、血清尿素測定和血乳酸測定。每大組隨機分為蒸餾水組，低、中、高劑量高原舒顆粒組和紅景天膠囊陽性對照組，每組10 只。紅景天陽性對照組，按照人與小鼠換算標(biāo)準(zhǔn)換算后每日灌胃成人等量紅景天(0.647 g·kg-1·d-1)；高原舒顆粒中劑量組按照成人一天推薦服用中藥量換算為小鼠的灌胃量(5.500 g·kg-1·d-1)，低劑量組為中劑量組劑量的一半(2.750 g·kg-1·d-1)，高劑量組為中劑量組劑量的2倍(11.000 g·kg-1·d-1)；蒸餾水組給予蒸餾水為10 mL·kg-1·d-1。用藥30 d。

2.2負(fù)荷游泳實驗實驗前小鼠進(jìn)行游泳訓(xùn)練3次，實驗時在小鼠尾部系上10%體質(zhì)量的鉛絲，放入25 ℃恒溫游泳箱中，保證小鼠游泳范圍充足，避免相互碰撞。用秒表記錄小鼠從游泳開始至死亡的時間為負(fù)荷游泳時間(完全沉沒水后計數(shù)8 s)[13]。

2.3肝糖原測定實驗?zāi)┐谓o藥后30 min后，將小鼠放入25 ℃的游泳箱中90 min，迅速處死，取肝臟約100 mg，采用肝糖原試劑盒進(jìn)行肝糖原測定，操作按照試劑盒操作方法。

2.4血清尿素測定實驗?zāi)┐谓o藥30 min后，30 ℃下，小鼠不負(fù)荷游泳90 min，然后拔眼球取血，放入加入肝素的離心管中，4 000 r·min-1離心10 min，取血清用尿素氮試劑盒測定尿素含量。

2.5血乳酸測定實驗?zāi)┐谓o藥30 min后，從內(nèi)眥靜脈從取血50 μL，放入加有蛋白沉淀液的離心管中。不負(fù)荷置于30 ℃水中游泳10 min，注意觀察小鼠游泳并保證小鼠時刻游動，分別在運動后0和20 min同法取血50 μL。以4 000 r·min-1離心10 min，制得乳酸上清液，使用全血LD試劑盒測定血乳酸含量并計算血乳酸曲線下面積，血乳酸曲線下面積=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0 min的血乳酸值+2×游泳后休息20 min的血乳酸值)。

3結(jié)果

3.1高原舒對小鼠體質(zhì)量的影響各組之間體質(zhì)量均無顯著性差異(P>0.05)，見表1。

3.2高原舒顆粒對小鼠游泳時間的影響與蒸餾水組相比，隨著給藥濃度的增加，負(fù)荷游泳時間逐漸延長，高劑量組的游泳時間延長了38%(P<0.01)；陽性對照組延長了42%(P<0.01)。高劑量組與陽性對照組并無顯著性差異(P>0.05)，見表1。

3.3高原舒顆粒對小鼠肝糖原儲備量的影響與蒸餾水組相比，隨著給藥濃度的增加，肝糖原儲備量逐漸增加，高劑量組的肝糖原儲備量增加了26%(P<0.05)；陽性對照組增加了33%(P<0.05)。高劑量組與陽性對照組并無顯著性差異(P>0.05)，見表1。

3.4高原舒顆粒對運動后小鼠血清尿素濃度的影響與蒸餾水組相比，隨著給藥濃度的增加，血清尿素濃度逐漸下降，高劑量組下降了20%(P<0.05)；陽性對照組下降了19%(P<0.05)。高劑量組與陽性對照組并無顯著性差異(P>0.05)，見表1。

3.5高原舒顆粒對小鼠血乳酸濃度的影響與蒸餾水組相比，運動后20 min，高劑量組血乳酸濃度下降23%(P<0.05)，血乳酸曲線下面積減少14%(P<0.05)；陽性對照組血乳酸濃度下降30%(P<0.05)，血乳酸曲線下面積減少20%(P<0.05)。高劑量組和陽性對照組仍無顯著差異(P>0.05)，說明高劑量組和陽性對照組均有利于血中乳酸的清除(P<0.05)，見表2。

表1高原舒顆粒對小鼠體質(zhì)量、游泳時間、肝糖原儲備量及血清尿素的影響

Tab.1 The effect of Gaoyuanshu Granules on body weight，the time of loaded swimming，the levels of glycogen storage and the blood urea nitrogen in mice

±s)

組別體質(zhì)量/g游泳時間/min肝糖原儲備量/mg·g-1血清尿素/mmol·L-1蒸餾水組36.10±0.005.62±0.8814.41±1.348.89±1.13低劑量組36.67±3.306.22±0.7114.89±1.218.10±0.83中劑量組36.78±5.897.18±0.7117.13±2.247.78±0.78高劑量組37.21±3.157.77±0.99**18.19±2.07*7.10±0.99*紅景天組39.35±5.048.02±1.35△△19.18±1.73△△7.24±0.99△

注：高劑量組與蒸餾水組相比*P<0.05，**P<0.01；陽性對照組與蒸餾水組相比△P<0.05，△△P<0.01。

表2高原舒顆粒對小鼠運動后血乳酸濃度的影響

Tab.2 The effect of Gaoyuanshu Granules on the level of lactic acid

±s)

組別運動前乳酸/mmol·L-1運動后乳酸/mmol·L-10min休息20min血乳酸曲線下面積蒸餾水組4.69±1.618.17±0.866.25±0.81206.89±28.42低劑量組4.59±1.728.24±1.676.08±1.32212.80±46.29中劑量組4.45±1.437.67±1.235.56±1.63193.07±33.32高劑量組4.39±1.697.46±1.294.81±0.37*182.79±30.56*紅景天組4.46±1.487.34±6.714.36±1.33△172.11±22.64△

注：高劑量組與蒸餾水組相比*P<0.05；陽性對照組與蒸餾水組相比△P<0.05。

4討論

運動耐力是觀察反映機體疲勞最直接的方法，通過負(fù)荷游泳可以觀察小鼠的運動耐力。實驗結(jié)果顯示，負(fù)荷游泳時間明顯延長。

糖是機體運動的能量來源，長時間運動，肌糖原消耗增加，為保持血糖平衡，肝糖原儲備減少，如果肝糖原儲備水平較對照組高，并具有顯著差異，說明藥物具有抗疲勞作用。劇烈運動時，肌肉缺氧，進(jìn)行無氧代謝，產(chǎn)生大量乳酸，乳酸的濃度可以反映機體疲勞的產(chǎn)生和消除速度。血清尿素濃度可以反映體內(nèi)蛋白質(zhì)分解的情況，當(dāng)機體長時間運動、不能通過糖和脂肪獲取足夠能量時，蛋白質(zhì)分解會加強，血尿素氮的水平會明顯增加。身體的運動耐力越差，產(chǎn)生的尿素氮就會越多。同時采用具有明確抗疲勞作用的紅景天制劑作為陽性對照，更能客觀地評價藥效[14]。研究結(jié)果表明，高原舒顆粒高劑量組能明顯延長小鼠游泳時長，提高肝糖原儲備量，減少血中尿素氮和血乳酸的產(chǎn)生，與陽性對照組相比并無顯著性差異，說明高原舒顆粒具有抗疲勞作用。

柳茶藥理研究表明，其具有肝保護、免疫增強和助消化的作用，這可能與其發(fā)揮抗疲勞作用相關(guān)，具體有效成分及作用機制仍需要做深入地探究；黃芪能直接擴張冠脈血管，增加冠脈血流量，進(jìn)而增強心肌收縮，增加心排出量[15]；當(dāng)歸有效成分為5-羥甲基-2-糠醛(5-HMF) ，相關(guān)研究表明其可以增強小鼠抗缺氧能力[16]。因此，本實驗采用三者結(jié)合并制備一種方便應(yīng)用的制劑。高原舒顆粒中的君藥柳茶是以藏藥鮮卑花的葉子入藥，具有不破壞資源、來源廣泛的特點。當(dāng)歸和黃芪為甘肅省道地藥材，三者結(jié)合有利于中藏藥的研發(fā)。對于該制劑在人體上的應(yīng)用，仍需進(jìn)一步研究。

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Anti-fatigue effects of Gaoyuanshu Granules in mice

WANG Yun，GUAN Guoqian，CAO Junping，YI Liwei，LIU Chao，ZHANG Xudong，LI Jianyin*，YANG Yongjian (Lanzhou University，College of Pharmacy，Lanzhou 730000，China)

Abstract:Objective To investigate the anti-fatigue effect of Gaoyuanshu Granules. Methods Mice were treated with different doses of Gaoyuanshu Granules. The loaded swimming time, liver glycogen，blood urea nitrogen and lactic acid in plasma were determined. The outcomes were compared among groups. Results As compared with the distilled water negative control group，the loaded swimming time and the reserves amount of liver glycogen increased after exercise in high dose group of Gaoyuanshu Granules(P<0.01 or P<0.05).In addition，the blood urea nitrogen decreased(P<0.05).Meanwhile，20 min after the movement，the lactic acid levels decreased(P<0.05).There was no obvious difference between the high dose of Gaoyuanshu Granules and the postive control group of Hongjingtian Capsules(P>0.05).Conclusion Gaoyuanshu Granules have anti-fatigue function.

Key words:Gaoyuanshu Granules；anti-fatigue；Hong Jingtian Capsules

收稿日期：(2015-05-12)

通信作者：*李建銀，男，講師

作者簡介：王云，男，碩士研究生

基金項目：甘肅省自然科學(xué) (編號：1208RJZA254)

中圖分類號：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號：1004-2407(2016)01-0061-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.019