丁　曼，華　潔，周福軍，侯文彬*

(1．天津中醫(yī)藥大學，天津　300193；2．天津藥物研究院，天津　300193)

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和胃顆粒質(zhì)量標準研究

丁曼1，華潔2，周福軍2，侯文彬2*

(1．天津中醫(yī)藥大學，天津300193；2．天津藥物研究院，天津300193)

摘要：目的建立和胃顆粒的質(zhì)量標準。方法采用薄層色譜法(TLC)對和胃顆粒中厚樸、枳實、陳皮、木香、白術藥材進行定性鑒別；采用高效液相色譜法 (HPLC)對厚樸酚、和厚樸酚進行定量測定。結(jié)果采用薄層色譜法均能檢出厚樸、枳實、陳皮、木香、白術，空白樣品無干擾，專屬性強；厚樸酚進樣量在0.050 88～1.017 6 μg(r=0.999 7)、和厚樸酚進樣量在0.024 8～0.496 μg(r=0.999 9)范圍內(nèi)與峰面積的線性關系良好；平均回收率厚樸酚為101.1%，RSD=1.5%(n=9)，和厚樸酚為97.9%，RSD=2.8%(n=9)。結(jié)論該法簡便、準確、重復性好，可用于和胃顆粒的質(zhì)量控制。

關鍵詞：和胃顆粒；質(zhì)量標準；薄層色譜；高效液相色譜

和胃顆粒源于臨床經(jīng)驗方，是由厚樸、枳實、陳皮、木香、白術、烏藥、黃芪、肉蔻和砂仁九味藥材經(jīng)提取，與適宜的輔料混合，制備而成的顆粒劑，具有消痞除滿、理氣和胃的作用，用于治療功能性消化不良(FD)等疾病。FD占消化性疾病的20%～40%[1]，發(fā)病率較高。因此，研究藥品的質(zhì)量標準，對開發(fā)出療效確切、質(zhì)量穩(wěn)定可控的新藥尤為重要。為了有效地控制藥品質(zhì)量，本實驗對所研制的和胃顆粒中厚樸、枳實、陳皮、木香、白術進行薄層定性鑒別，采用高效液相色譜法測定制劑中厚樸的厚樸酚、和厚樸酚的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器HP1100液相色譜儀；Agilent chemstation色譜工作站；G1310A泵；G1313A自動進樣器；G1316A柱溫箱；G1314A紫外檢測器；AE50型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)；SB-3200DTN超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FW100高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)；25 μL微量進樣器。

1.2試藥高效液相用甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司)；其他試劑均為分析純；水為娃哈哈純凈水；硅膠G高效薄層板(規(guī)格：100×100 mm，青島海洋化工廠)；厚樸對照藥材(批號121285-200902)、木香對照藥材(批號921-9001)、枳實對照藥材(批號936-9001)，均購買于中國藥品生物制品檢定所；陳皮對照藥材(批號120969-201109)、白術對照藥材(批號120925-201109)、和厚樸酚對照品(批號110730-201112)、厚樸酚對照品(批號110729-200412)、橙皮苷對照品(批號110721-201115)、去氫木香內(nèi)酯對照品(批號111525-201008),均購自中國食品藥品檢定研究院；和胃顆粒(批號20140505，20140507，20140509)由天津藥物研究院自制；不含厚樸、枳實、陳皮、木香、白術的空白樣品均為天津藥物研究院自制。

2方法與結(jié)果

2.1TLC鑒別

2.1.1厚樸TLC鑒別取和胃顆粒(批號20140505)研細，稱取3.6 g，加石油醚(60～90 ℃)25 mL,置于三角瓶中，密塞，溫水(50 ℃)中水浴1 h，濾過，將濾液濃縮后，加入乙酸乙酯1 mL，水浴加熱使殘渣溶解，作為供試品；取厚樸對照藥材0.35 g，同供試品的制備方法制成厚樸對照藥材樣品。另取空白樣品(不含厚樸)，同法制成厚樸空白樣品。再精密稱取和厚樸酚對照品、厚樸酚對照品各1 mg，溶解于1 mL甲醇中，制成每毫升含厚樸酚、和厚樸酚各1 mg的混合溶液，作為對照品。依照薄層色譜法[2]試驗，用點樣器吸取空白樣品、對照品、對照藥材樣品、供試品4種溶液各2 μL，點于同一硅膠G高效薄層板上，置于丙酮∶環(huán)己烷(3∶10)[3]溶液中進行展開，展距約8 cm，取出，吹干，均勻噴以香草醛硫酸(10 g·L-1)溶液，加熱至斑點顯色清晰。薄層板上，厚樸對照藥材、對照品與供試品色譜有相同顏色的斑點顯示在同一位置上。厚樸空白樣品與厚樸對照藥材和對照品色譜無相對應顏色的斑點，無干擾。

2.1.2枳實TLC鑒別取和胃顆粒(批號20140505)研細，稱取1.8 g，加甲醇25 mL，置于三角瓶中，在40 ℃、40 kHz條件下，超聲波提取30 min，濾過，將濾液濃縮后，向三角瓶中加甲醇2 mL，超聲使殘渣溶解，作為供試品；取枳實對照藥材0.3 g，同供試品的制備方法制成枳實對照藥材樣品；另取空白樣品(不含枳實、陳皮)，同法制成枳實空白樣品。依照薄層色譜法試驗，用點樣器吸取枳實空白樣品、對照藥材樣品、供試品3種溶液各2 μL，點于同一硅膠G高效薄層板上，置于乙酸乙酯∶三氯甲烷∶丙酮(8∶2∶0.5)[4]溶液中進行展開，展距約8 cm，取出，吹干，在紫外光燈(365 nm)下進行觀察。薄層板上，對照藥材色譜與供試品色譜有相同顏色的藍色熒光斑點顯示在同一位置上。枳實空白樣品與枳實對照藥材色譜無相對應顏色的斑點，無干擾。

2.1.3陳皮TLC鑒別取和胃顆粒(批號：20140505)研細，稱取1.8 g，加甲醇25 mL置于三角瓶中，在40 ℃、40 kHz條件下，超聲波提取30 min，濾過，將濾液濃縮后，向三角瓶中加甲醇2 mL，超聲使殘渣溶解，作為供試品；取陳皮對照藥材0.3 g，同供試品的制備方法制成陳皮對照藥材樣品；另取空白樣品(不含陳皮、枳實)，同法制成陳皮空白樣品。再取適量的橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品。依照薄層色譜法試驗，用點樣器分別吸取對照品5 μL，陳皮空白樣品、對照藥材樣品、供試品3種溶液各2 μL，點于同一用氫氧化鈉(5 g·L-1)溶液制備的硅膠G薄層板上，置于乙酸乙酯∶甲醇∶水(100∶30∶13)[5]溶液中進行展開，展距約8 cm，取出，吹干，噴以三氯化鋁乙醇(10 g·L-1)溶液，在紫外光燈(365 nm)下進行觀察。薄層板上，陳皮對照藥材色譜和對照品色譜與供試品色譜有相同顏色的黃色熒光斑點顯示在同一位置上。陳皮空白樣品與陳皮對照藥材和對照品色譜無相對應顏色的斑點，無干擾。

2.1.4木香TLC鑒別取和胃顆粒(批號20140505)研細，稱取5 g，加石油醚(60～90 ℃)25 mL，置于三角瓶中，密塞，溫水(50 ℃)中水浴1 h，濾過，將濾液濃縮后，向其加入乙酸乙酯0.5 mL，水浴加熱使殘渣溶解，作為供試品；取木香對照藥材0.1 g，同供試品的制備方法制成木香對照藥材樣品；另取空白樣品(不含木香)，同法制成木香空白樣品。再精密稱取去氫木香內(nèi)酯對照品1 mg，溶解于2 mL甲醇中，制成每毫升含去氫木香內(nèi)酯0.5 mg的溶液作為對照品。依照薄層色譜法試驗，用點樣器分別吸取木香空白樣品和供試品各10 μL、對照品5 μL，對照藥材樣品2 μL，點于同一硅膠G高效薄層板上，置于正己烷∶乙酸乙酯(4∶1)[6]溶液中進行展開，展距約8 cm，取出，吹干，向其均勻噴以硫酸乙醇(100 mL·L-1)溶液，加熱至斑點顯色清晰。薄層板上，木香對照藥材和對照品色譜與供試品色譜有相同顏色的紫紅色斑點顯示在同一位置上。木香空白樣品與木香對照藥材和對照品色譜無相對應顏色的斑點，無干擾。

2.1.5白術TLC鑒別取和胃顆粒(批號：20140505)研細，稱取5 g，加石油醚(60～90 ℃)25 mL,置于三角瓶中，密塞，溫水(50 ℃)中水浴1 h，濾過，將濾液濃縮后，向其加入石油醚(60～90 ℃)0.5 mL，水浴加熱使殘渣溶解，作為供試品；取白術對照藥材0.75 g，同供試品的制備方法制成白術對照藥材樣品；另取空白樣品(不含白術)，同法制成白術空白樣品。照薄層色譜法試驗，用點樣器吸取白術空白樣品、對照藥材樣品、供試品3種溶液各10 μL，點于同一硅膠G高效薄層板上；置于乙酸乙酯∶石油醚(60～90 ℃)(1∶2)[7]溶液中進行展開，展距約8 cm，取出，吹干，向其均勻噴以5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。薄層板上，白術對照藥材色譜與供試品色譜有相同顏色的斑點顯示在同一位置上。白術空白樣品與對照藥材色譜無相對應顏色的斑點，無干擾。

2.2HPLC法測定厚樸中和厚樸酚、厚樸酚的含量[2]

2.2.1色譜條件色譜柱為艾杰爾Promosil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-1 mL·L-1磷酸溶液(70∶30)；體積流量：1.0 mL·min-1；檢測波長：294 nm；柱溫：30 ℃。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取厚樸酚對照品0.5 mg、和厚樸酚對照品0.25 mg，溶解于1 mL甲醇中，制成每毫升含和厚樸酚0.25 mg、厚樸酚0.5 mg的溶液，作為對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液1 mL,置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備取和胃顆粒(批號20140505)研細，精密稱取約0.6 g，置于具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，在40 ℃、40 kHz條件下，超聲波提取20 min，放冷，用甲醇補足損失的質(zhì)量，搖勻，過濾后的濾液作為供試品溶液。

2.2.4空白樣品溶液的制備取不含厚樸的空白樣品，按2.2.3項制成厚樸空白樣品溶液。

2.2.5專屬性實驗精密吸取供試品、對照品和空白樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按照2.2.1項下色譜條件進行測定?？瞻讟悠飞V圖中，在與供試品及對照品色譜圖中相應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明空白樣品無干擾。結(jié)果見圖1。

圖1和胃顆粒的HPLC色譜圖

A.供試品；B．空白樣品；C．對照品；1．和厚樸酚；2．厚樸酚

Fig.1 HPLC chromatograms of Hewei Granules

A．sample；B．blank sample；C．reference substances；1．honokiol；2．magnolol

2.2.6線性關系考察精密吸取2.2.2項下對照品儲備液0.1，0.5，1.0，1.5和2.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測其峰面積。以峰面積積分分值為縱坐標，以對照品溶液的進樣量為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：和厚樸酚Y=1 691.9X+1.964 8，r=0.999 9，n=5，結(jié)果表明，和厚樸酚進樣量在0.024 8～0.496 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系；厚樸酚Y=3 189.2X-8.262 2，r=0.999 7，n=5，結(jié)果表明，厚樸酚進樣量在0.050 88～1.017 6 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.7精密度試驗取2.2.2項下對照品溶液(和厚樸酚0.024 8 g·L-1，厚樸酚0.050 88 g·L-1)注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。計算和厚樸酚、厚樸酚峰面積積分分值RSD分別為1.36%和1.12%。

2.2.8穩(wěn)定性試驗取2.2.3項下供試品溶液，分別于0，7，20 h精密吸取供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積積分分值，計算RSD，和厚樸酚、厚樸酚峰面積積分分值RSD分別為0.62%和0.79%，表明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.9重復性試驗取和胃顆粒(批號20140505)研細，精密稱取0.6 g，6份，分別置于具塞錐形瓶中，分別加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲波提取20 min，放冷，用甲醇補足損失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得。按照2.2.1項下色譜條件，精密吸取10 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計算和厚樸酚含量平均值為0.99 mg·g-1，RSD為1.22%；厚樸酚含量平均值為1.99 mg·g-1，RSD為1.90%，結(jié)果表明重復性試驗結(jié)果良好。

2.2.10加樣回收試驗取和胃顆粒(批號20140505)研細，精密稱取樣品9份，每份0.3 g，每3份分別加入相當于樣品量80%，100%和120%的對照品溶液，按“供試品溶液的制備”項下處理，制備9份供試品溶液，按2.2.1項色譜條件，精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，依法測定，計算回收率，結(jié)果見表1和表2。

表1和厚樸酚加樣回收試驗結(jié)果

Tab.1 Results of recovery tests of honokiol

(n=9)

表2厚樸酚加樣回收試驗結(jié)果

Tab.2 Results of recovery tests of magnolol

(n=9)

2.2.11樣品測定取3批和胃顆粒(批號20140505，20140507，20140509)，按“供試品溶液的制備”項下處理，分別對3批樣品中和厚樸酚、厚樸酚的含量進行測定。結(jié)果3 批樣品中和厚樸酚的含量分別為2.94，2.97和2.88 mg·袋-1；厚樸酚的含量分別為6.12，6.09和6.03 mg·袋-1。

3討論

原文獻中木香鑒別采用木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對照品作對照，但在實驗過程中，采用多種方法進行摸索后，還是發(fā)現(xiàn)供試品色譜中與木香烴內(nèi)酯對照品對應位置上的斑點時有時無，說明此方法對木香烴內(nèi)酯的重復性不佳，故不用木香烴內(nèi)酯對照品作對照。

本文考察了加熱回流提取法和超聲提取法的提取效果，結(jié)果表明，2種方法對含量測定結(jié)果影響不大，但超聲提取方法簡單易行。因此，選擇超聲提取的方法為和胃顆粒中和厚樸酚、厚樸酚含量測定的樣品提取方法；考察不同的提取溶劑體積分數(shù)70%的乙醇和甲醇，2種提取溶劑對含量測定結(jié)果影響不大，但用甲醇為溶劑，樣品易過濾，故選擇甲醇為和胃顆粒中和厚樸酚、厚樸酚含量測定的樣品提取溶劑；對不同提取時間(10，20和30 min)進行考察，但對含量測定結(jié)果影響不大，為了既節(jié)省檢測時間，又保證提取完全，將胃動顆粒和厚樸酚、厚樸酚含量測定樣品的超聲時間定為20 min。

本文采用HP1100液相色譜儀，對和厚樸酚、厚樸酚對照品在200～400 nm之間進行紫外吸收光譜掃描。結(jié)果和厚樸酚與厚樸酚均在波長292 nm處有最大吸收峰，并參考《中國藥典》2010版一部厚樸藥材含量測定的方法，因此，選擇與藥典方法一致的294 nm作為和胃顆粒中厚樸的測定波長。

和胃顆粒中的厚樸能增強胃底平滑肌的運動，使胃腸蠕動加快，利于胃排空[8]，具有下氣除滿等功效，為方中君藥。枳實[9]、陳皮[10]能增強功能性消化不良大鼠的胃排空速率和小腸推進率，為方中臣藥。本文對和胃顆粒制劑中的君藥厚樸的有效成分和厚樸酚與厚樸酚采用高效液相色譜法進行了含量測定，該方法專屬性強，結(jié)果準確可靠，精密度和穩(wěn)定性良好；同時，采用薄層色譜法對枳實、厚樸、白術、陳皮、木香五味藥材進行鑒別，對照藥材色譜與供試品色譜對應良好，斑點清晰且空白樣品無干擾。因此，兩者能夠控制和胃顆粒的質(zhì)量，可作為該藥的質(zhì)量控制標準。

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Study on the quality standard for Hewei Granules

DING Man1，HUA Jie2，ZHOU Fujun2，HOU Wenbin2*(1．Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin，300193，China；2．Tianjin Institute of Pharmaceutical Research，Tianjin，300193，China)

Abstract:Objective To establish a quality standard for Hewei Granules. MethodsCortex magnolia officinalis,Fructus aurantii immaturus,Pericarpium citri reticulatae,Radix aucklandiae,and Rhizoma atractylodis macrocephalae were identified by thin layer chromatography (TLC)，and the contents of magnolol and honokiol were determined by high performance liquid chromatography(HPLC). ResultsCortex magnolia officinalis,Fructus aurantii immaturus,Pericarpium citri reticulatae, Radix aucklandiae,and Rhizoma atractylodis macrocephalae could be identified by TLC. The method was specific,and the blank sample showed no interference;the calibration curve of magnolol was linear in the range of 0.050 88-1.017 6 μg(r=0.999 7).The average recovery of magnolol was 101.1%, with RSD 1.5%(n=9); the calibration curve of honokiol was linear in the range of 0.024 8-0.496 μg(r=0.999 9). The average recovery of honokiol was 97.9%,with RSD 2.8%(n=9). Conclusion The method is simple, accurate and reproducible, so it can be used for the quality control of Hewei Granules．

Key words:Hewei Granules；quality standard；TLC；HPLC

收稿日期：(2015-04-10)

通信作者：*侯文彬，男，研究員，碩士生導師

作者簡介：丁曼，女，碩士研究生

基金項目：國家“十二五”“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(2014ZX09101-021)

中圖分類號：R282

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)01-0018-05

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.006