新雪片對(duì)急性咽炎大鼠模型細(xì)胞因子及病理學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究

李婷婷1，李偉妮1，李蓮華3，高雁1，王平2

(1.煙臺(tái)東誠(chéng)大洋制藥有限公司，山東 煙臺(tái) 265500；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南 250014；

3.煙臺(tái)業(yè)達(dá)醫(yī)院，山東 煙臺(tái) 264006)

摘要：目的考察新雪片對(duì)急性咽炎大鼠模型細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-6、前列腺素E2、腫瘤壞死因子-α的影響，觀察模型動(dòng)物病理形態(tài)學(xué)改善的情況，評(píng)價(jià)治療咽炎的效果。方法將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、新雪片高、中、低劑量組以及陽(yáng)性對(duì)照組。觀察給藥后急性咽炎模型大鼠血清白細(xì)胞介素-6、前列腺素E2、腫瘤壞死因子-α含量的變化，進(jìn)行咽喉部組織的病理觀察。結(jié)果與模型組比較，新雪片高、中劑量組大鼠白細(xì)胞介素-6、前列腺素E2、腫瘤壞死因子-α含量顯著降低(P<0.05)，新雪片高劑量組大鼠白細(xì)胞介素-6、前列腺素E2的含量低于陽(yáng)性對(duì)照組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；病理形態(tài)學(xué)顯示，經(jīng)新雪片治療后，模型大鼠的黏膜上皮組織增生及炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度積分顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論新雪片對(duì)急性咽炎模型大鼠具有顯著的抗炎作用。

關(guān)鍵詞：急性咽炎；大鼠；白細(xì)胞介素-6；前列腺素E2；腫瘤壞死因子-α；病理形態(tài)學(xué)

作者簡(jiǎn)介：李婷婷，女，研究方向：中藥學(xué)，E-mail:litingtinglt@163.com

通訊作者：王平，女，副研究員，研究方向：中藥藥理，Tel:0531-82949847，E-mail:wangpingjinan@163.com

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Experimental study of Xinxue Tablets on the effect of cytokines and pathomorphism

in treating acute pharyngitis of rat

LITing-ting1,LIWei-ni1，LILian-hua3,GAOYan1,WANGPing2

(1.YantaiDongchengDayangPharmaceuticalCo.,Ltd.,Yantai265500,China；2.ShandongInstituteof

TraditionalChineseMedicine,Jinan250014,China；3.YedaHospitalofYantai,Yantai264006,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of IL-6，PGE2，TNF-α by Xinxue Tablets in treating acute pharyngitis of rat，and observe improvement of pathomorphism,then to evaluate the threatment effect.Methods60 SD rats were randomly divided into normal control group,model group，Xinxue Tablets high dosage group，Xinxue Tablets middle dosage group,Xinxue Tablets small dosage group,and positive control group.To observe the change of the contents of IL-6，PGE2，TNF-α by treating with Xinxue Tablets,and to observe pathomorphism of pharyngeal mucosa tissue.ResultsCompared with model group,the contents of IL-6，PGE2，TNF-α were significantly decreased in Xinxue Tablets high dosage group and middle dosage group(P<0.05),and the contents of IL-6，PGE2 were decreased in Xinxue Tablets high dosage group compared with positive control group,but not significantly;Pathological morphology reflected that comparing with model group，the degree of pharyngeal mucosa epithelial tissue hyperplasia and integral of inflammatory cells infiltration were significantly decreased in Xinxue Tablets high dosage group and middle dosage group(P<0.05).ConclusionXinxue Tablets had the significant effect on acute pharyngitis rat models.

Key words:Acute pharyngitis;Rat;IL-6;PGE2;TNF-α;Pathomorphism

急性咽炎是耳鼻喉科臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病，是一種咽部黏膜、黏膜下組織及淋巴組織的急性炎癥。其發(fā)病率占耳鼻喉科疾病的2%～6%，且仍有上升趨勢(shì)[1]，給患者的生活帶來(lái)一定的影響。目前臨床上多采用抗生素治療，但是抗生素長(zhǎng)時(shí)間服用會(huì)產(chǎn)生耐藥性，容易轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝恃祝w延難愈。而中藥復(fù)方辨證施治，治療急性咽炎療效獨(dú)特且無(wú)毒副作用，亟待進(jìn)行新產(chǎn)品的開發(fā)。本文對(duì)新雪片進(jìn)行了藥物的藥效學(xué)研究，從分子學(xué)角度考察了藥物的治療機(jī)理，為臨床用藥提供數(shù)據(jù)支持。

1試驗(yàn)材料

1.1試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠60只，體重180～220 g，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，由湖北醫(yī)藥學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[SCXK(鄂)2011-0008]。常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)5天后開始試驗(yàn)。

1.2試驗(yàn)藥物新雪片(批號(hào)：110501，煙臺(tái)東誠(chéng)大洋制藥有限公司)；金嗓子喉片(批號(hào)：09111601，廣西金嗓子有限責(zé)任公司)。

1.3試驗(yàn)試劑氨水(500 mL，濃度25%～75%，鄭州市化學(xué)試劑廠)；白細(xì)胞介素-6(IL-6)試劑盒(上海邦奕生物科技有限公司)；前列腺素E2(PGE2)試劑盒(上海凱博生化試劑有限公司)；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)試劑盒(上海富眾生物科技發(fā)展有限公司)。

1.4試驗(yàn)儀器喉頭噴霧器(上海市嘉定區(qū)醫(yī)療設(shè)備廠)；水浴鍋(上海光地儀器設(shè)備有限公司)；TDL-5臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；BIO-RAD680酶標(biāo)儀(美國(guó)BIO-RAO公司)；奧利巴斯BX51萬(wàn)能型研究級(jí)正置顯微鏡(上海西努光學(xué)科技有限公司)；BI-2000圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)。

2試驗(yàn)方法

2.1動(dòng)物造模與給藥選用SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別設(shè)為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、新雪片高劑量組(0.3 g·kg-1)、新雪片中劑量組(0.15 g·kg-1)、新雪片低劑量組(0.075 g·kg-1)與陽(yáng)性對(duì)照組(金嗓子喉片1.08 g·kg-1)。除正常對(duì)照組以外，其余5組使用喉頭噴霧器給動(dòng)物咽部噴15%的氨水，每次噴霧3下，每天上午、下午各1次，連續(xù)3 d，造成大鼠急性咽炎模型[2,3]。造模后第4天，新雪片高劑量組(0.3 g·kg-1)、新雪片中劑量組(0.15 g·kg-1)、新雪片低劑量組(0.075 g·kg-1)與陽(yáng)性對(duì)照組(金嗓子喉片1.08 g·kg-1)分別灌胃給予相對(duì)應(yīng)的藥液，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組分別灌胃給予等體積的蒸餾水，各組均連續(xù)給藥5 d。末次給藥1 h后，麻醉各組動(dòng)物，腹主動(dòng)脈采血5 mL，分裝3管，離心，取血清，做各項(xiàng)炎癥因子的檢測(cè)，之后處死動(dòng)物，摘取各組動(dòng)物咽部黏膜及其下組織用10%的甲醛溶液固定、切片、染色，做病理切片。

2.2檢測(cè)指標(biāo)每日觀察記錄各組動(dòng)物外觀形態(tài)，咽部黏膜的形態(tài)、色澤等；動(dòng)物處死前取血用相應(yīng)的試劑盒檢測(cè)血清IL-6、PGE2、TNF-α水平。

參考文獻(xiàn)2.3病理組織記錄[4]，取咽部黏膜及其下組織做病理切片，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

表1　病理組織評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

3結(jié)果

3.1新雪片對(duì)大鼠一般狀態(tài)的影響造模3天后模型組大鼠出現(xiàn)搔抓口部，觀察大鼠咽部，出現(xiàn)充血、腫脹，飲水增多，食量下降，自發(fā)性活動(dòng)減少等現(xiàn)象；各給藥組大鼠食量相對(duì)模型組減輕，咽部紅腫減輕，動(dòng)物搔抓情況也減輕。

3.2新雪片對(duì)IL-6、PGE2、TNF-α炎癥因子的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示，新雪片高、中、低劑量組均能夠顯著降低造模大鼠血液中IL-6、PGE2、TNF-α的含量。其中，與模型組相比較，新雪片高劑量組IL-6、PGE2 具有非常顯著性差異(P<0.01)，中劑量組具有顯著性差異(P<0.05)；此外，新雪片高劑量組IL-6、PGE2 的含量低于陽(yáng)性對(duì)照組，但是不存在顯著性差異，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　新雪片對(duì)急性咽炎模型大鼠IL-6、PGE2、TNF-α的影響

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型對(duì)照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

3.3新雪片對(duì)咽部黏膜組織病理形態(tài)學(xué)的影響肉眼觀察可見(jiàn)：正常對(duì)照組大鼠咽部組織淡紅色、表面光滑，未見(jiàn)充血、腫脹等現(xiàn)象；模型對(duì)照組大鼠咽部呈充血狀態(tài)，暗紅色，光澤度欠佳，黏液性分泌物增多，部分咽后壁顆粒狀隆起，黏液腺肥大，分泌功能亢進(jìn)；新雪片組大鼠比模型對(duì)照組充血狀態(tài)減輕，光澤度增加；陽(yáng)性對(duì)照組(金嗓子喉片組)比模型對(duì)照組充血狀態(tài)減輕。肉眼觀察新雪片能有效減輕咽炎充血狀態(tài)。

病理切片觀察可見(jiàn)：正常對(duì)照組大鼠咽部組織上皮完整，黏膜為鱗狀上皮覆蓋，黏膜下層為疏松的結(jié)締組織，毛囊腺體下面為肌組織；模型組大鼠咽部組織的黏膜上皮層顯著增生，黏膜下層變薄，固有層內(nèi)血管擴(kuò)張、充血、水腫，固有膜區(qū)域與黏液腺間有大量炎性細(xì)胞(以淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞為主)浸潤(rùn)；與模型組比較，新雪片各組大鼠黏膜上皮層增生程度減輕，固有層內(nèi)血管擴(kuò)張、充血、水腫減輕，固有膜區(qū)域與黏液腺間有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；陽(yáng)性對(duì)照組(金嗓子喉片組)比模型對(duì)照組增生程度、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和充血均減輕,結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　新雪片對(duì)各組大鼠咽部組織病理形態(tài)學(xué)的影響( n=10)

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型對(duì)照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表3的數(shù)據(jù)顯示，新雪片高、中劑量組大鼠炎性細(xì)胞浸潤(rùn)方面存在顯著差異(P<0.05)，充血情況存在非常顯著性差異(P<0.01)。因此，病理學(xué)觀察表明新雪片對(duì)咽部組織具有良好的保護(hù)作用。

4結(jié)論

急性咽炎是一種常見(jiàn)的耳鼻喉科疾病，病變部位為咽黏膜，并波及黏膜下及淋巴組織的急性炎癥，常繼發(fā)于急性鼻炎或急性扁桃體之后。如果治療不及時(shí)，或反復(fù)發(fā)作，可轉(zhuǎn)為慢性咽炎，若感染向上蔓延，波及耳、鼻器官，可導(dǎo)致急性鼻炎、鼻竇炎、急性中耳炎，給患者的身體帶來(lái)嚴(yán)重危害。

中醫(yī)認(rèn)為急性咽炎多屬于實(shí)證、熱證，其病因病機(jī)為外邪侵襲，上犯肺臟，攻及咽喉所致[5]。新血片具有清熱解毒、消腫利咽的功效，治療急性咽炎療效顯著。

目前，國(guó)內(nèi)對(duì)急性咽炎療效的評(píng)價(jià)多集中在炎癥指標(biāo)上，對(duì)于直接反映“治本”效果的細(xì)胞因子的研究非常少。本研究采用高濃度的氨水在咽部噴霧，迅速使局部的血管擴(kuò)張、充血，形成急性咽炎動(dòng)物模型[6]。采用新雪片治療后，考察相應(yīng)的細(xì)胞因子IL-6、PGE2、TNF-α的含量，從而提高了炎癥評(píng)價(jià)的水平。其中，IL-6主要由T、B細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，反映了炎癥時(shí)組織受損的程度；PGE2是一種炎癥介質(zhì)，具有擴(kuò)張血管、促進(jìn)組織水腫等作用；TNF-α主要由活化的巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，可誘發(fā)機(jī)體發(fā)生惡病質(zhì)[7～9]。給予新雪片的大鼠血清IL-6、PGE2、TNF-α的含量

較模型組顯著降低，反映新雪片可以有效降低炎性細(xì)胞因子水平，減輕炎性癥狀、重新使體內(nèi)被破壞的免疫系統(tǒng)趨于平衡。此外，研究發(fā)現(xiàn)新雪片治療大鼠咽部組織的黏膜上皮增生程度積分及炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度較模型組顯著降低，從病理組織學(xué)角度驗(yàn)證了藥物的治療效果。我們將進(jìn)一步考察新雪片的臨床療效，為開創(chuàng)創(chuàng)新型新藥打下試驗(yàn)基礎(chǔ)。

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