胃癌組織中p53與Ki-67蛋白的表達(dá)變化及意義

林丹丹，張一橋

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院，武漢 430060)

摘要：目的觀察胃癌組織中p53與Ki-67的表達(dá)變化，并探討其意義。方法胃癌組織樣本取自159例胃腺癌患者，另取組織活檢為正常胃黏膜組織標(biāo)本65例份，均經(jīng)病理檢查證實(shí)診斷。采用免疫組化法檢測癌組織及正常胃黏膜組織中p53與Ki-67蛋白表達(dá)，采用Pearson法分析胃癌組織中p53與Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果159例胃癌組織中p53蛋白表達(dá)陽性78例，陽性表達(dá)率為49.06%；Ki-67蛋白表達(dá)陽性110例，陽性表達(dá)率為69.18%。而在正常胃黏膜組織中未見p53、Ki-67蛋白表達(dá)。腫瘤直徑≥5 cm、高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中p53蛋白陽性表達(dá)率顯著高于腫瘤直徑<5 cm、低中分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織(P均<0.05)。高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中Ki-67蛋白陽性表達(dá)率顯著高于低中分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織(P均<0.05)。癌組織中p53與Ki-67蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.724，P<0.05)。結(jié)論 胃癌組織中p53蛋白與Ki-67蛋白表達(dá)均升高，二者可能協(xié)同參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

關(guān)鍵詞：胃癌；p53蛋白；Ki-67蛋白；抑癌基因

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.017

中圖分類號(hào)：R735.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

收稿日期：(2015-07-10)

胃癌的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞增殖、部分原癌基因激活、凋亡動(dòng)力學(xué)改變、抑癌基因失活或突變等有關(guān)。抑癌基因亦稱為抗癌基因，正常時(shí)起抑制細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生的作用[1]。p53是一種抑癌基因，在50%以上惡性腫瘤中會(huì)出現(xiàn)該基因突變[2]。Ki-67是一種核蛋白，與核糖體RNA轉(zhuǎn)錄有關(guān)。有研究結(jié)果證實(shí)Ki-67與許多腫瘤分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[3]。2012年7月～2015年2月，我們采用免疫組化法對(duì)胃癌組織中p53蛋白與Ki-67蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測，探討其與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料胃癌組織樣本取自本院收治的159例胃腺癌患者，另取組織活檢為正常胃黏膜組織標(biāo)本65例份，均經(jīng)病理檢查證實(shí)診斷。159例胃癌患者中男86例、女73例，年齡<60歲29例，≥60歲95例。腫瘤直徑<5 cm 124例，≥5 cm 35例；病理學(xué)分級(jí)為低中分化107例，高分化52例；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期77例，Ⅲ、Ⅳ期82例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移102例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例?；颊呔唇o予放化療治療。

1.2p53與Ki-67蛋白表達(dá)檢測均采用免疫組化法。標(biāo)本用10%甲醛溶液固定、石蠟包埋，切片厚5 μm，二甲苯脫蠟、水化、PBS沖洗、修復(fù)、PBS沖洗、過氧化氫溫孵育10 min，PBS沖洗，滴加血清工作液，甩干，滴加鼠抗p53單克隆或Ki-67單克隆工作液，4 ℃過夜，PBS沖洗，滴加二抗，37 ℃、15 min，PBS沖洗，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37 ℃、15 min，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。高倍鏡下觀察取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞100個(gè)。染色強(qiáng)度分為無染色計(jì)為0分，淡黃色計(jì)為1分，棕黃色計(jì)為2分，棕褐色計(jì)為3分。陽性細(xì)胞百分比≤10%計(jì)為0分，11%～25%計(jì)為1分，26%～50%計(jì)為2分，51%～75%計(jì)為3分，>75%計(jì)為4分。二者分?jǐn)?shù)相加，0～1分為陰性，>1分為陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson法分析胃癌組織中p53與Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1胃癌組織與正常胃黏膜組織中p53、Ki-67蛋白表達(dá)比較胃癌組織中p53、Ki-67的陽性細(xì)胞均定位于細(xì)胞核內(nèi)，呈棕黃色或棕褐色。159例胃腺癌患者癌組織中p53蛋白表達(dá)陽性78例，陽性表達(dá)率為49.06%；Ki-67蛋白表達(dá)陽性110例，陽性表達(dá)率為69.18%。而在正常胃黏膜組織中未見p53、Ki-67蛋白表達(dá)。胃癌組織中p53、Ki-67蛋白陽性表達(dá)率明顯高于正常胃黏膜組織(P均<0.05)。

2.2胃癌組織中p53、Ki-67蛋白陽性表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系腫瘤直徑≥5 cm、高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中p53蛋白陽性表達(dá)率顯著高于腫瘤直徑<5 cm、低中分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織(P均<0.05)。高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中Ki-67蛋白陽性表達(dá)率顯著高于低中分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織(P均<0.05)。見表1。

表1　 胃腺癌組織中p53、Ki-67蛋白陽性表達(dá)

2.3胃腺癌組織中p53與Ki-67蛋白陽性表達(dá)的關(guān)系胃腺癌組織中p53與Ki-67蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.724，P<0.05)。

3討論

胃癌的發(fā)病率一直居高不下，是臨床常見的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展是多基因、多階段的發(fā)展過程。癌基因和抑癌基因?qū)?xì)胞的生長發(fā)育和終末分化有正負(fù)調(diào)控作用。抑癌基因亦稱為抗癌基因，正常時(shí)起抑制細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生的作用[4]。早在1969年，哈里斯將癌細(xì)胞與同種正常成纖維細(xì)胞融合，所獲雜種細(xì)胞的后代只要保留某些正常親本染色體時(shí)就可表現(xiàn)為正常表型，但隨著染色體的丟失又可重新出現(xiàn)惡變細(xì)胞。

p53是一種抑癌基因，該基因編碼一種相對(duì)分子質(zhì)量為53 kD的蛋白質(zhì)，命名為p53[5]。正常情況下對(duì)細(xì)胞分裂起減慢或監(jiān)視的作用，50%以上惡性腫瘤中會(huì)出現(xiàn)該基因突變，因此檢測胃癌組織中p53的基因突變率對(duì)研究胃癌發(fā)生發(fā)展有重要意義。p53基因的失活對(duì)腫瘤形成起重要作用。p53基因突變后，由于其空間構(gòu)象發(fā)生改變，失去了對(duì)細(xì)胞生長、凋亡和DNA 修復(fù)的調(diào)控作用，p53基因由抑癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗騕6～8]。本研究采用免疫組化法對(duì)胃癌組織中的p53蛋白進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示胃癌組織中p53蛋白陽性表達(dá)率為49.06%，而在正常胃黏膜組織中未見p53蛋白表達(dá)。此與楊玲娣等[9]結(jié)果一致。本研究中腫瘤直徑≥5 cm、高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中p53蛋白陽性表達(dá)率升高。而呂旭等[10]研究認(rèn)為胃癌組織中p53、Ki-67表達(dá)與胃癌是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性，具體原因尚需進(jìn)一步探討。但劉偉等[11]研究結(jié)果顯示，高中分化胃癌p53和Ki-67蛋白表達(dá)顯著高于低分化胃癌，p53蛋白在胃食管連接部和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胃癌中表達(dá)顯著高于胃部和有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胃癌，Ki-67蛋白表達(dá)隨著浸潤深度的增加而增高,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，說明p53參與了胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過程。Ki-67是一種核蛋白，與核糖體RNA轉(zhuǎn)錄有關(guān)。胡海霞等[12]研究結(jié)果顯示,Ki-67參與胃癌的發(fā)生發(fā)展，并可作為判斷胃癌惡性程度及評(píng)估預(yù)后的指標(biāo)。本研究中Ki-67蛋白陽性表達(dá)率為69.18%，在正常胃黏膜組織中未見Ki-67蛋白表達(dá)，且高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中Ki-67蛋白陽性表達(dá)率顯著高于低中分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織?？梢奒i-67蛋白參與了胃癌的侵襲及轉(zhuǎn)移過程。經(jīng)Pearson相關(guān)系數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中p53與Ki-67蛋白表達(dá)呈正相關(guān)?？梢?，p53、Ki-67可能協(xié)同參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

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