宮頸癌中KAI1/CD82、ILK表達(dá)變化及與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移關(guān)系研究

鄭雪琴，張鐵清

目的 研究KAI1/CD82和ILK蛋白在宮頸鱗癌(SCC)組中的表達(dá)變化情況，探討兩者與SCC發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。方法 收集20例正常宮頸組織、40例CIN組織及40例SCC組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)KAI1/CD82 和ILK蛋白的表達(dá)，結(jié)合臨床病理參數(shù)及2年的隨訪資料，分析兩者與SCC的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果 KAI1/CD82在正常宮頸組、CIN組和SCC組的表達(dá)水平均顯著降低(P＜0．05)，KAI1/CD82蛋白表達(dá)與宮頸癌的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)差異密切相關(guān)(P＜0．05); ILK在正常宮頸組、CIN組和SCC組的表達(dá)水平均顯著升高(P＜0．05)，ILK蛋白表達(dá)與宮頸癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)差異密切相關(guān)(P＜0．05);相關(guān)性分析表明，兩者表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(r =－0．4164，P＜0．05);經(jīng)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型，行單因素及多因素分析發(fā)現(xiàn)，KAI1/CD82和脈管瘤栓是宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)因素。結(jié)論 (1)KAI1/CD82表達(dá)下調(diào)和ILK表達(dá)上調(diào)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中可能起到一定作用。(2)KAI1/CD82和ILK在宮頸癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，他們共同參與了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。(3)KAI1/CD82可以作為預(yù)測(cè)宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移潛能的參考指標(biāo)。(4)KAI1/CD82和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立因素。

宮頸腫瘤; KAI1/CD82; ILK;復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，不但發(fā)病率高，而且近年來有年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重危害婦女的身心健trial[J]．Annals of Internal Medicine，1997，127(4):267-274．

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1 資料與方法

1．1資料 收集我院2008年1月－2009年12月存檔的石蠟包埋的宮頸組織標(biāo)本共100例，其中正常對(duì)照組20例，均為子宮良性病變而行的全子宮切除術(shù)或?qū)m頸錐形切除術(shù)的宮頸組織，宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)組40例，其中CINⅠ組14例，CINⅡ－Ⅲ組26例;宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌(squamous cell careinoma，SCC)組40例，其中宮頸癌組均為宮頸癌根治術(shù)術(shù)后的宮頸組織。宮頸癌患者年齡32～63歲，中位年齡45．5歲，SCC按照FIGO(1995)臨床分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰa期15例，Ⅰb－Ⅱa期20例，Ⅱb－Ⅲ期5例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例。按照WHO細(xì)胞分化標(biāo)準(zhǔn):高分化15例，中分化11例，低分化14例。

1. 2 方法 采用免疫組化(Envision法)，按鼠疫組織化學(xué)SABC試劑盒說明書進(jìn)行，并略加修飾。濃縮型KAI1鼠單克隆抗體和濃縮型ILK鼠單克隆抗體，購自武漢博士德生物工程有限公司。對(duì)照染色:以試劑盒提供的正常宮頸陽性切片為陽性對(duì)照。陰性對(duì)照:以TBS液代替一抗孵育已知陽性組織切片，染色結(jié)果陰性。

1. 3染色結(jié)果判定 采用半定量評(píng)分法，以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒，按染色陽性細(xì)胞所占的百分比評(píng)分:陽性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。根色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:無顯色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。取兩指標(biāo)項(xiàng)評(píng)分的乘積作為染色結(jié)果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn): 0分為陰性(－)，1 －3分為弱陽性(+ )，4－6分為陽性(+ + )，大于6分為強(qiáng)陽性(+ + + )。

1. 4術(shù)后隨訪 自手術(shù)之日起為隨訪開始時(shí)間，至復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移或患者死亡，未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者統(tǒng)一隨訪2年，統(tǒng)計(jì)復(fù)發(fā)及生存期情況。

1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)，應(yīng)用SPSS17．0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)，兩者的相關(guān)性用Spearman等級(jí)相關(guān)法進(jìn)行分析，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)采用單因素及多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)以P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2. 1 KAI1/CD82和ILK在3組中的表達(dá) KAI1/CD82在正常宮頸組、CIN組和SCC組中的陽性表達(dá)率分別為100% (20/20)、65% (26/40)、30% (12/40)呈遞減趨勢(shì)，染色強(qiáng)度逐漸變淺，3組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 35．394，P＜0．01)。ILK在正常宮頸組、CIN組和SCC組中的陽性表達(dá)率分別為10% (2/20)、67．5% (27/40)、82．5% (33/40)呈遞增趨勢(shì)，3組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 30．603，P＜0. 01)。見表1。

表1 KAI1/CD82和ILK在正常宮頸組、CIN組、SCC組中的表達(dá)

2. 2 KAI1/CD82和ILK與宮頸癌的臨床病理參數(shù)的關(guān)系

KAI1/CD82蛋白在宮頸癌組織中，隨著患者的組織分化惡性程度的增加、腫瘤浸潤(rùn)深度的增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的增加以及脈管浸潤(rùn)的增加，該蛋白表達(dá)逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);特別在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤(rùn)組中的表達(dá)差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)，ILK蛋白在宮頸癌組織中，隨著患者腫瘤浸潤(rùn)深度增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的增加及脈管浸潤(rùn)的增加，該蛋白表達(dá)明顯增高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0．01)。見表2。

表2 KAI1/CD82和ILK與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2. 3預(yù)后因素分析 經(jīng)過2年隨訪，共計(jì)9例(22. 5%)復(fù)發(fā)，死亡4例(10%)。對(duì)各因素進(jìn)行Cox單因素和多因素模型分析，結(jié)果顯示，KAI1/CD82和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的獨(dú)立因素。見表3～表4。

表3 宮頸癌復(fù)發(fā)的單因素分析

表4 宮頸癌復(fù)發(fā)的多因素素分析

3 討論

KAI1/CD82基因是跨膜4超家族(TM4SF)成員之一，主要通過抑制癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲力，從而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。KAI1/CD82蛋白具有4個(gè)高度保守的疏水跨膜功能區(qū)和一個(gè)大的細(xì)胞外N－糖基化功能區(qū)[6]，在細(xì)胞外有3個(gè)潛在的糖基化結(jié)合位點(diǎn)，在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)有4個(gè)氨基酸內(nèi)環(huán)和1個(gè)羧基尾巴，與本家族的其他成員如ME491/CD63，MRP/CD，CD37之間相互交聯(lián)，還可以和HLA．DR或VLA．1形成復(fù)合體或四分子交聯(lián)體，它可以和整合素家族的α3β1，α4β1，α5β1，α6β1，αLβ2等多種分子結(jié)合，或EGFR，ErbB2，Erb3等多種表皮生長(zhǎng)因子受體結(jié)合，在細(xì)胞表面形成大的復(fù)合體[7]，參與細(xì)胞的增殖。KAI1/CD82蛋白還可以和LFA－1(一種黏附素)結(jié)合[8]，使由LFA－1/ICAM－1介導(dǎo)的信號(hào)通路發(fā)生改變，降低Jurkat細(xì)胞系之間的粘附聚集作用。KAI1/CD82還可以直接調(diào)節(jié)整合素介導(dǎo)的細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的粘附作用，而使細(xì)胞間質(zhì)粘附能力發(fā)生變化，因而有降低腫瘤轉(zhuǎn)移的可能。

本資料結(jié)果示，KAI1/CD82表達(dá)降低與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)一定關(guān)系，KAI1/CD82蛋白在宮頸癌的前期病變中已經(jīng)下調(diào)，在宮頸病變的一開始就已經(jīng)下調(diào)，并在宮頸病變的整個(gè)過程中起作用。KAI1/CD82隨著患者的組織分化程度的增加，腫瘤浸潤(rùn)深度增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的增加以及脈管瘤栓的增加，該蛋白表達(dá)逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);提示KAI1/CD82在宮頸癌的病變進(jìn)展中具有抑制作用，是宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立因素。

ILK基因是定位于人類的11P15．5－P15．4上，它含有三個(gè)結(jié)構(gòu)域: C端(186－451位氨基酸)C端整合素結(jié)合位點(diǎn)，能夠磷酸化β1的胞漿結(jié)構(gòu)域[9]，而錨定于整合素，從而介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的連接，還能磷酸化蛋白激酶B(PKB)和糖原合成酶激酶－3(GSK－3)[10]，也能夠自我磷酸化。達(dá)到影響細(xì)胞的多種生命活動(dòng)。中間的(180－212位氨基酸)為磷酸肌醇結(jié)構(gòu)域，為血小板－白細(xì)胞C激酶底物同源域，能夠結(jié)合蛋白激酶PI3K，使得ILK充分激活，參與調(diào)節(jié)激酶自身的活性。N端(33－164位氨基酸)為4個(gè)錨蛋白重復(fù)序列，介導(dǎo)其與其他信號(hào)分子、細(xì)胞骨架蛋白間相互作用或與粘著斑蛋白(PIHCH)的LIM結(jié)構(gòu)域結(jié)合[11]，對(duì)ILK定位到粘著斑有調(diào)控作用。ILK通過抑制蛋白激酶B的活性，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。

本資料結(jié)果顯示，ILK在宮頸癌的早期病變中就開始其作用，且細(xì)胞的異行性越大，ILK表達(dá)越強(qiáng)，提示ILK蛋白在宮頸癌的整個(gè)發(fā)生發(fā)展過程中均起作用，表達(dá)越高，癌變機(jī)會(huì)越大。ILK蛋白在宮頸癌組織中，隨著患者腫瘤浸潤(rùn)深度增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的增加以及脈管浸潤(rùn)的增多，該蛋白表達(dá)明顯增高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)，提示ILK在宮頸癌的病變進(jìn)展中起促進(jìn)作用，與宮頸癌的預(yù)后也可能存在一定關(guān)系，但I(xiàn)LK不是宮頸癌復(fù)發(fā)的高危因素。

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Expression of KAI1/CD82 and ILK in cervical carcinoma and its association with postoperative recurrence and me-

tastasis

Objective To study the expression of KAI1/CD82 and ILK in cervical squamous cell carcinoma (SCC)，and to explore the relationship between the two indicators and the development of SCC．Methods Retrospective analysis was conducted in terms of the clinical and pathological data and two years＇follow-up data of 20 cases of normal cervical tissues，40 cases of cervical intraepithelial neoplasia(CIN)and 40 cases of SCC．Expressions of KAI1/CD82 and ILK in those samples were measured with immunohistochemical method and the relationship between the two indicators and the recurrence and metastasis of SCC were analyzed．Results The protein expression levels of KAI1/CD82 in the normal cervical tissues，CIN and SCC were significantly reduced(P＜0．05)．KAI1/CD82 expression was closely related to the differentiation，depth of invasion，lymph node metastasis and vascular invasion of SCC(P＜0．05)，while the protein expression levels of ILK in the three groups were significantly increased(P＜0．05)．The protein expression levels of ILK were related to the depth of invasion，lymph node metastasis and vascular invasion of SCC(P＜0．05)．The protein expression levels of KAI1/CD82 were negatively correlated to ILK(r =－0．4164，P＜0．05); Cox proportional hazards univariate and multivariate analysis showed the protein expression levels of KAI1/CD82 and vascular tumor thrombus were closely related to the recurrence of cervical cancer．Conclusion Downregulating of the expression of KAI1/CD82 and upregulating of ILK have an effect on the development of cervical carcinoma．The protein expression levels of KAI1/CD82 are negatively correlated to ILK，and they are related to the development and metastasis of cervical carcinoma．KAI1/CD82 and ILK can become the postoperative indicators of recurrence and metastasis of cervical carcinoma．Analysis shows that KAI1/CD82 and lymph node metastasis accelerates the recurrence of cervical cancer．

Uterine cervical neoplasm; KAI1/CD82; ILK;Recurrence and metastasis

R737. 33

A

1008-7044(2015)04-0340-03

10．14126/j．cnki．1008－7044．2015．04．013

安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院婦產(chǎn)科，238001

鄭雪琴(1978－)，女，安徽巢湖市人，主治醫(yī)師，研究生。

2015-02-12)

ZHENG Xue-qin，ZHANG Yi-qin．(Affiliated Chaohu Hospital of Anhui Medical University，Chaohu，Anhui 238001，China)

2015-03-02)