■李 高 張永根 丁 雪 王曉帆 張立陽(yáng) 薛世崇

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150030）

近年來(lái)，隨著飼料工業(yè)和乳業(yè)生產(chǎn)水平的不斷發(fā)展，集約化養(yǎng)殖條件下的奶牛生產(chǎn)性能得到極大的改善[1]。但隨著奶牛產(chǎn)奶潛力的開(kāi)發(fā)，也出現(xiàn)了一些問(wèn)題。就目前最常見(jiàn)的脂肪肝疾病而言，調(diào)查發(fā)現(xiàn)有高達(dá)50%的高產(chǎn)奶牛在圍產(chǎn)期間都會(huì)受此病影響，導(dǎo)致健康、生產(chǎn)和繁殖能力下降，其對(duì)奶牛養(yǎng)殖帶來(lái)了極大的損失[2]。研究發(fā)現(xiàn)，膽堿能夠有效的減少脂肪在肝臟的沉積，然而因?yàn)榉雌c動(dòng)物自身的特點(diǎn)，添加在日糧中的膽堿幾乎都被瘤胃微生物所降解[3]，而且膽堿的堿性以及帶有魚(yú)腥異味限制了其大量添加。研究者通過(guò)試驗(yàn)選取18只泌乳中期奶牛，當(dāng)膽堿飼喂量由18 g/d增加至282 g/d時(shí)，飼料采食量由18.4 kg/d減少至16.7 kg/d，表明高水平膽堿可降低飼料采食量[4]。為了不影響奶牛的采食量以及預(yù)防膽堿在瘤胃中的降解以及改善異味，需要對(duì)膽堿進(jìn)行過(guò)瘤胃保護(hù)研究，以期達(dá)到過(guò)瘤胃的目的。

研究證實(shí)，肝臟甘油三酯（TAG）沉積會(huì)降低肝臟尿素生成速率，影響糖異生、激素清除和響應(yīng)能力。而研究發(fā)現(xiàn)膽堿是形成極低密度脂蛋白（VLDL）的重要物質(zhì)，在飼料中添加膽堿能夠增加體內(nèi)VLDL的數(shù)量，提高對(duì)甘油三酯的轉(zhuǎn)運(yùn)能力，減少非酯化脂肪酸（NEFA）在肝臟的沉積，達(dá)到預(yù)防脂肪肝的目的[5]。通過(guò)飼料與奶牛自身合成的膽堿已經(jīng)不能滿(mǎn)足高產(chǎn)奶牛的營(yíng)養(yǎng)需要，因此有必要額外的添加膽堿，補(bǔ)充膽堿在奶牛體內(nèi)的缺乏[6]。目前市面上有很多過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品，但其質(zhì)量良莠不齊，而且價(jià)格昂貴，鑒于這種情況，在國(guó)內(nèi)有必要開(kāi)展過(guò)瘤胃技術(shù)研究，形成擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的，質(zhì)量?jī)?yōu)良，價(jià)格相對(duì)較低的過(guò)瘤胃保護(hù)膽堿產(chǎn)品,應(yīng)用于國(guó)內(nèi)牛場(chǎng)，促進(jìn)奶業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。在過(guò)瘤胃膽堿的質(zhì)量評(píng)定方面還沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)市面上不同的過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品沒(méi)有權(quán)威的評(píng)估，導(dǎo)致養(yǎng)殖戶(hù)的選擇困難。本研究旨在對(duì)新研發(fā)過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)定，且評(píng)價(jià)日糧添加瘤胃保護(hù)膽堿（RPC）預(yù)防或減輕奶牛脂肪肝的作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)基地提供的安裝有瘤胃瘺管的奶牛。按奶牛營(yíng)養(yǎng)需要配制飼糧。試驗(yàn)?zāi)膛Ｃ咳辗謩e于07：00和17：00等量飼喂，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2 試驗(yàn)材料

C1：威爾潞威公司新研發(fā)膽堿產(chǎn)品。

1.3 過(guò)瘤胃膽堿在瘤胃內(nèi)保護(hù)率測(cè)定

1.3.1 半體內(nèi)法測(cè)定過(guò)瘤胃膽堿在瘤胃保護(hù)率

本試驗(yàn)采用尼龍袋法，尼龍袋采用8 cm×12 cm規(guī)格，試驗(yàn)按照降解時(shí)間分為9個(gè)處理，分別為0、2、4、8、12、16、24、36、48 h，以未經(jīng)瘤胃處理的為對(duì)照組0 h，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3個(gè)平行樣品袋，每袋樣品為5 g。裝好樣品后的尼龍袋在40℃烘箱中烘干48 h至恒重，稱(chēng)重備用。試驗(yàn)時(shí)將尼龍袋同時(shí)放入牛瘤胃腹囊部，分別在瘤胃中消化2、4、8、12、16、24、36、48 h后分別取出相應(yīng)的尼龍袋，在清水中緩緩沖洗5～10 min，直到水流清凈為止，然后在40℃烘箱中烘干48 h至恒重，稱(chēng)重，計(jì)算過(guò)瘤胃膽堿樣品在瘤胃中的保護(hù)率。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3.2 體外法測(cè)定過(guò)瘤胃膽堿在瘤胃保護(hù)率

基礎(chǔ)緩沖溶液，A液：CaCl2·2H2O 16.12 g，MnCl2·4H2O 10.0 g，CoCl2·6H2O 1.0 g，F(xiàn)eCl3·6H2O 0.8 g溶解，并定容至1 000 ml。B液：Na2HPO4（無(wú)水）5.7 g，KH3PO4（無(wú)水）6.2 g，MgSO4·7H2O 0.6 g溶解，并定容至1 000 ml。C液：NH4HCO34.0 g，NaHCO335.0 g溶解，并定容至1 000 ml。D液：100 mg刃天青加入100 ml蒸餾水充分溶解。E液：1 mol/l NaOH 4.0 ml，Na2S·9H2O 672 mg，蒸餾水95 ml，充分溶解。

2 L緩沖液的配制方法：800 ml蒸餾水+0.2 ml A液+480 ml B液+480 ml C液+2 ml D液，此時(shí)混合液為紅色，通入CO2并預(yù)熱到39℃，混合液變成無(wú)色，再加入80 ml還原液，繼續(xù)通入CO2至無(wú)色。

瘤胃液：早晨飼喂前通過(guò)瘤胃瘺管取瘤胃液，經(jīng)四層紗布過(guò)濾。

試驗(yàn)按照降解時(shí)間分為9個(gè)處理，分別為0、2、4、8、12、16、24、36、48 h，以未經(jīng)瘤胃處理的為對(duì)照組0 h，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3個(gè)平行樣品袋，稱(chēng)取膽堿樣品2 g左右，分別放入24個(gè)生理鹽水瓶（250 ml），向每個(gè)瓶子分裝60 ml緩沖液和30 ml瘤胃液，搖動(dòng)混合，向溶液充CO2，使溶液和試管內(nèi)空間全部充滿(mǎn)CO2，然后蓋上帶有放氣閥門(mén)的橡皮塞，將其置于水浴搖床培養(yǎng)（39℃），設(shè)置好搖床頻率，分別于各個(gè)時(shí)間點(diǎn)各取出3個(gè)瓶子，去上清液，剩余物在清水中緩緩沖洗5～10 min，至水澄清，測(cè)剩余物中膽堿含量，從而測(cè)定過(guò)瘤胃膽堿樣品在瘤胃中的保護(hù)率。

1.4 過(guò)瘤胃膽堿在小腸中的降解率測(cè)定

1.4.1 體外法測(cè)定過(guò)瘤胃膽堿在小腸中的降解率

緩沖液：NaH2PO49.30 g、NaHCO39.80 g、NaCl 0.47 g、KCl 0.57 g、CaCl2·H2O 0.08 g、MgSO4·7H2O 0.12 g，將以上成分加入1 000 ml蒸餾水充分溶解即成。

酸性胃蛋白酶：準(zhǔn)確稱(chēng)取胃蛋白酶（1∶10 000）1.0 g，溶解于1 000 ml的0.1 mol/l鹽酸中。

胰酶液：稱(chēng)取6.8 g KH2PO4，溶解于750 ml蒸餾水中，用NaOH溶液調(diào)pH值至7～8，用蒸餾水定容于1 L容量瓶中得0.5 mol/l KH2PO4，取3 g胰蛋白酶與50 mg百里香酚溶解于1 L以上溶液，充分溶解1 h。

1.0 mol/l NaOH溶液。

飼料殘?jiān)苽洌喝∵m量飼料原樣大約10 g于瘤胃尼龍袋內(nèi)，每4個(gè)袋子固定于一根繩上，在早晨投入奶牛瘤胃中，16 h后取出，沖洗至清澈后，于40℃烘48 h至恒重。

測(cè)定方法為體外離體酶法（兩步法）：①加入60 ml酸性胃蛋白酶溶液到24個(gè)裝有2 g過(guò)瘤胃膽堿樣品的培養(yǎng)瓶中，將其置于水浴搖床培養(yǎng)（39℃），培養(yǎng)1 h；②每個(gè)瓶子加入1.5 ml 1mol/l氫氧化鈉，并加入80 ml胰酶液培養(yǎng)，分別在2、4、8、12、16、24、36、48 h取出三個(gè)瓶子，在清水中緩緩沖洗5～10 min，直到水流清凈為止，然后在40℃烘箱中烘干48 h至恒重，稱(chēng)重，測(cè)定過(guò)瘤胃膽堿樣品在小腸中的降解率。

1.4.2 移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定過(guò)瘤胃膽堿在小腸中的降解率

選擇孔徑10～40μm的尼龍布，制成3 cm×6 cm的移動(dòng)尼龍袋。稱(chēng)取1.4.1中制備的飼料殘?jiān)?～3 g，裝入做好的尼龍袋中，熱封儀封口。每頭牛準(zhǔn)備6個(gè)尼龍袋。將移動(dòng)尼龍袋浸泡于含0.004 mol/l的HCl溶液中，25℃培養(yǎng)1 h，然后在0.01%胃蛋白酶的鹽酸溶液中40℃振蕩培養(yǎng)2 h。處理后的移動(dòng)尼龍袋經(jīng)十二指腸瘺管每30 min投放1次，每次投袋2個(gè)。自投袋后12 h開(kāi)始，每隔2 h定時(shí)檢查一次，及時(shí)從糞便中回收移動(dòng)尼龍袋。清理尼龍袋上的糞便，細(xì)流沖洗，直至尼龍袋中流出的水清澈無(wú)味為止，然后在40℃烘箱中烘干48 h至恒重，稱(chēng)重，計(jì)算過(guò)瘤胃膽堿樣品在小腸中的降解率。

1.5 血液生化指標(biāo)測(cè)定

選取6頭干奶期奶牛，按體重（BW）、體況評(píng)分（BCS）配對(duì)，并隨機(jī)分成對(duì)照組和試驗(yàn)組每組各3頭。試驗(yàn)分預(yù)飼期和試驗(yàn)期兩個(gè)階段，預(yù)飼期為6 d，試驗(yàn)期為14 d。試驗(yàn)預(yù)飼期間，所有奶牛飼喂1.4 kg/d精料并自由采食飼草，在預(yù)飼第6 d采食后4～5 h，進(jìn)行尾部靜脈采血10 ml，加入抗凝劑，冷藏保存，進(jìn)行血液指標(biāo)分析。從第7 d開(kāi)始進(jìn)行誘導(dǎo)脂肪肝期，奶牛飼喂1.4 kg/d精料，限制飼草采食量，同時(shí)試驗(yàn)組添加20 g/（d·頭）過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品C1，對(duì)照組不添加，此時(shí)奶牛采食的能量大約為維持所需總能量的30%。從試驗(yàn)期第11 d開(kāi)始每天在奶牛采食后4～5 h進(jìn)行尾靜脈采血[7]，每次采血10 ml，進(jìn)行血液指標(biāo)分析。預(yù)飼期第6 d結(jié)果作為校正處理。采集血液的管中加入肝素鈉抗凝。采樣后立即離心15 min，離心速度3 500 r/min，取全部上清液分成2份，收集血漿，-20 ℃保存[8]。

①血漿葡萄糖濃度的測(cè)定：用葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化酶法，通過(guò)葡萄糖氧化酶（GOD）氧化，產(chǎn)生葡萄糖酸和過(guò)氧化氫。過(guò)氧化氫又通過(guò)氧化物酶（POD）作用，分解出氧，能夠與無(wú)色的4-氨基安替比林和酚偶聯(lián)氧化，合成紅色的醌亞胺[9]。醌亞胺在500 nm處有最大吸收峰，其吸光度與濃度成正比，可以通過(guò)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度計(jì)算樣品中葡萄糖的濃度[10]。

②非酯化脂肪酸（NEFA）含量測(cè)定：用試劑盒比色法，非酯化脂肪酸（NEFA）能與銅離子結(jié)合形成能溶于氯仿的脂肪酸銅鹽中，其量與非酯化脂肪酸含量成正比。通過(guò)測(cè)定銅離子的量來(lái)計(jì)算非酯化脂肪酸的含量[11]。

③ β-羥基丁酸（β-HBA）含量測(cè)定：β-羥基丁酸的濃度與pH值8.5時(shí)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）在340 nm波長(zhǎng)下的吸光度上升速率成正比，因此可以通過(guò)測(cè)定NADH在340 nm波長(zhǎng)下的吸光度上升速率來(lái)計(jì)算β-羥基丁酸的含量[12]。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用Excel2010進(jìn)行初步整理，然后采用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析過(guò)程（ANOVA）進(jìn)行分析，均值的多重比較采用Duncan's法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

1.7 結(jié)果計(jì)算

裝袋樣品逃逸率（%）=降解重（g）/料重（g）×100；

降解重（g）=袋重（g）+料重（g）-降解后重（g）；

干重?fù)p失（%）=[樣品校正處理前重量（g）-樣品處理后重量（g）]/樣品校正處理前重量（g）×100；

瘤胃保護(hù)率（%）=樣品過(guò)瘤胃后重量（g）/樣品校正過(guò)瘤胃前重量（g）×100；

小腸降解率（%）=[1-樣品小腸降解后重量（g）/樣品校正小腸降解前重量（g）]×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 過(guò)瘤胃膽堿（C1）的性能評(píng)定

2.1.1 過(guò)瘤胃膽堿在瘤胃中的保護(hù)率測(cè)定（見(jiàn)表2）

表2 體外法與半體內(nèi)法測(cè)過(guò)瘤胃膽堿瘤胃保護(hù)率（%）

由表2可以看出，用體外法與半體內(nèi)法所測(cè)結(jié)果雖然在數(shù)值上有較大差異但是在趨勢(shì)上一致，都是隨著培養(yǎng)時(shí)間的增大，在瘤胃的保護(hù)率有逐漸減小的趨勢(shì)。通過(guò)多重比較發(fā)現(xiàn)在2、8、24、36、48 h時(shí)間點(diǎn)兩種方法所測(cè)結(jié)果差異顯著（P＜0.05），而在4、12、16 h時(shí)候所測(cè)結(jié)果表現(xiàn)差異不顯著（P＞0.05）。在培養(yǎng)48 h時(shí)候體外法測(cè)得保護(hù)率在80%以上，用半體內(nèi)（尼龍袋）法測(cè)得結(jié)果在70%以上，雖然結(jié)果有差異但能夠說(shuō)明新研發(fā)的C1產(chǎn)品在瘤胃內(nèi)基本能夠得到有效的保護(hù)。

2.1.2 過(guò)瘤胃膽堿在小腸中的降解率測(cè)定（見(jiàn)表3、表4）

表3 體外法測(cè)過(guò)瘤胃膽堿小腸降解率（%）

表4 半體內(nèi)移動(dòng)尼龍袋法測(cè)過(guò)瘤胃膽堿小腸降解率（%）

半體內(nèi)移動(dòng)尼龍袋法以3頭奶牛分為A、B、C3組做為平行組，每個(gè)平行6個(gè)重復(fù)，所得A、B、C3組值分別為各組6個(gè)重復(fù)的平均值。從表3和表4可以看出，用移動(dòng)尼龍袋法得出的3組結(jié)果與體外小腸法測(cè)得的4 h時(shí)候降解率相似，在4 h時(shí)候體外法測(cè)定小腸降解率為87.22%，移動(dòng)尼龍袋測(cè)得各組降解率平均值為88.04%，兩種方法測(cè)得結(jié)果看出在4 h時(shí)候產(chǎn)品C1的小腸釋放率在85%以上，通過(guò)上面兩種方法所測(cè)的結(jié)果可以看出，此過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品在小腸環(huán)境中能夠迅速的釋放。由此可以說(shuō)明C1產(chǎn)品在小腸內(nèi)沒(méi)有發(fā)生過(guò)保護(hù)現(xiàn)象。

表5 試驗(yàn)第11～14 d血液中三種指標(biāo)測(cè)定

2.2 過(guò)瘤胃膽堿對(duì)奶牛血液指標(biāo)的影響

試驗(yàn)中當(dāng)P≤0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P≤0.15時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)趨勢(shì)。從表5可以看出，奶牛采食過(guò)瘤胃膽堿（RPC）后血液NEFA濃度顯著下降（P＜0.05），RPC對(duì)血漿β-HBA濃度沒(méi)有影響（P＞0.05），飼喂RPC對(duì)血糖濃度有增加的趨勢(shì)（P＜0.15）。

3 討論

3.1 新研發(fā)C1產(chǎn)品性能評(píng)定

試驗(yàn)采用體外法與半體內(nèi)法相結(jié)合檢測(cè)新研發(fā)膽堿是否能夠滿(mǎn)足對(duì)過(guò)瘤胃產(chǎn)品基本性能的要求，試驗(yàn)測(cè)定了新研發(fā)C1產(chǎn)品在瘤胃內(nèi)的保護(hù)率及小腸的降解率，這兩個(gè)指標(biāo)也是最便捷的反映過(guò)瘤胃產(chǎn)品性能的指標(biāo)。據(jù)報(bào)道，通過(guò)這兩個(gè)指標(biāo)測(cè)定了某過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品的瘤胃保護(hù)率以及小腸降解率，試驗(yàn)結(jié)果表明這種過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品的瘤胃保護(hù)率達(dá)到85%以上，小腸降解率達(dá)到95%以上。此研發(fā)的過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品的瘤胃保護(hù)率與小腸降解率較以上產(chǎn)品還有差距，有待進(jìn)一步改進(jìn)，但通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)此研發(fā)的過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品的瘤胃保護(hù)率能夠達(dá)到70%以上，小腸降解率在85%以上，也能夠達(dá)到過(guò)瘤胃產(chǎn)品的基本要求，即在奶牛生理消化期間產(chǎn)品在瘤胃內(nèi)基本穩(wěn)定不被降解，大部分能夠通過(guò)瘤胃。在小腸內(nèi)也能夠在短時(shí)間迅速釋放。

有研究表明[13]，采用移動(dòng)尼龍袋法測(cè)定飼料在小腸的降解情況，首先需要將飼料樣品在瘤胃內(nèi)預(yù)培養(yǎng)16 h，因?yàn)槠毡檎J(rèn)為16 h這個(gè)時(shí)間能反映到達(dá)小腸前瘤胃代謝的狀況。因此本試驗(yàn)也采用16 h的瘤胃非降解飼料殘?jiān)鳛樾∧c消化率的測(cè)定。試驗(yàn)采用體外法與移動(dòng)尼龍袋法兩種方法測(cè)定小腸降解率，從測(cè)得結(jié)果來(lái)看，這兩種方法都能夠較準(zhǔn)確的測(cè)定膽堿的小腸降解率，但移動(dòng)尼龍袋法不能顯示出各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的降解率。有研究指出[14]，用三步法與體內(nèi)法測(cè)定蛋白質(zhì)的小腸消化率，兩種方法數(shù)值間的相關(guān)性是很高的（R2=0.91）。所以，在測(cè)定過(guò)瘤胃膽堿的小腸消化率時(shí)使用三步法是可行的，而其所測(cè)得的結(jié)果也是可靠的。

3.2 過(guò)瘤胃膽堿對(duì)血糖含量的影響

王俊峰等（2004）[15]研究發(fā)現(xiàn)，血液中葡萄糖含量反映了機(jī)體對(duì)糖的消化、吸收、代謝的過(guò)程，它能夠體現(xiàn)機(jī)體的能量代謝水平，反芻動(dòng)物90%的血糖來(lái)自于肝糖異生。奶牛體內(nèi)葡萄糖主要用于維持組織器官的需要以及泌乳需要，奶牛產(chǎn)后產(chǎn)奶量上升很快，因此對(duì)葡萄糖的需要量逐漸增多，奶牛在這個(gè)階段很容易發(fā)生能量負(fù)平衡。Goselink等（2012）[16]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加經(jīng)過(guò)過(guò)瘤胃保護(hù)的氯化膽堿可以提高奶牛的血糖含量，能夠維持高產(chǎn)期血糖平衡。Hartwell等（2001）[17]報(bào)道飼喂過(guò)瘤胃保護(hù)氯化膽堿對(duì)血糖含量無(wú)顯著影響。徐國(guó)忠等（2005）[18]通過(guò)對(duì)圍產(chǎn)期奶牛添加RPC后發(fā)現(xiàn)，RPC有增加血糖和降低非酯化脂肪酸的趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05），這些試驗(yàn)結(jié)果顯示了過(guò)瘤胃膽堿能夠穩(wěn)定奶牛血糖水平，提高抵抗能量負(fù)平衡的能力。本次試驗(yàn)表明飼喂RPC有增加血糖濃度的趨勢(shì)，由于采樣期間限飼兩組采食量相近，血糖濃度的改變與能量攝入無(wú)關(guān)。由此可以看出血糖濃度的改變與攝入的RPC有關(guān)。

3.3 過(guò)瘤胃膽堿對(duì)β-羥基丁酸含量的影響

過(guò)瘤膽堿對(duì)奶牛血漿β-羥基丁酸的影響，β-羥基丁酸是酮體中含量最多的成分，是判斷奶牛酮病的一個(gè)重要指標(biāo)。Pinotti等（2001）[14]發(fā)現(xiàn)，日糧中添加膽堿具有降低奶牛血漿β-羥基丁酸水平的趨勢(shì)。有研究結(jié)果顯示，在產(chǎn)后的35 d內(nèi)，奶牛飼喂10 g/d的過(guò)瘤胃膽堿，血漿內(nèi)β-羥基丁酸含量低于未添加過(guò)瘤胃膽堿的對(duì)照組。Hartwell等（2001）[17]研究也指出 RPC對(duì)產(chǎn)犢時(shí)血漿β-羥基丁酸無(wú)影響。本次試驗(yàn)測(cè)得RPC對(duì)血漿β-羥基丁酸濃度沒(méi)有影響，表明過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品對(duì)肝臟生酮作用沒(méi)有影響。

3.4 過(guò)瘤胃膽堿對(duì)非酯化脂肪酸（NEFA）含量的影響

圍產(chǎn)期的高產(chǎn)奶牛機(jī)體通常處于能量負(fù)平衡狀態(tài)，脂肪動(dòng)員是圍產(chǎn)期奶牛能量負(fù)平衡的必然結(jié)果。脂肪的分解一方面能夠降低糖異生所引起的能量欠缺，另一方面由于脂肪分解產(chǎn)生的大量非酯化脂肪酸（NEFA）進(jìn)入血液及肝臟，使得血液中的NEFA濃度升高，由此可引發(fā)脂肪肝和酮病。NEFA與奶牛體內(nèi)能量代謝相關(guān)，是脂肪分解的產(chǎn)物，所以是反映體內(nèi)脂肪代謝程度的可靠指標(biāo)。研究表明，過(guò)瘤胃膽堿能降低奶牛圍產(chǎn)期能量負(fù)平衡時(shí)期的血液中NEFA含量。Hartwell等（2001）[17]報(bào)道，奶牛飼喂 6 g/d 過(guò)瘤胃膽堿可降低血清內(nèi)的非酯化脂肪酸含量，每頭飼喂12 g/d的過(guò)瘤胃膽堿的奶牛在分娩時(shí)能保持較低的非酯化脂肪酸濃度。有前人在圍產(chǎn)期奶牛添加過(guò)瘤胃膽堿結(jié)果顯示，奶牛肝臟內(nèi)糖原比對(duì)照組增加，而非酯化脂肪酸、β-羥基丁酸無(wú)顯著差異。有一些研究發(fā)現(xiàn)，在奶牛飼料中添加過(guò)瘤胃膽堿，奶牛血清中NEFA濃度與對(duì)照組無(wú)顯著差異[19]。研究采用RPC產(chǎn)品代替皺胃灌注方式，結(jié)果表明RPC產(chǎn)品的添加對(duì)血清中NEFA濃度無(wú)影響，還有研究表明，添加RPC28 d后肥育薩福羊血液中NEFA濃度顯著升高（P＜0.05）。前人研究結(jié)果大多表明，產(chǎn)前28 d或21 d補(bǔ)充RPC可降低圍產(chǎn)期奶牛血漿NEFA濃度[20]。但這些研究同時(shí)也發(fā)現(xiàn)飼喂RPC的奶牛干物質(zhì)采食量和能量攝入量提高，這可能是NEFA下降的原因[21]。本試驗(yàn)限飼階段，奶牛攝入的能量?jī)H為妊娠和維持所需總能的30%，奶牛采食RPC后血漿NEFA濃度下降（P＜0.05）。添加RPC后血漿NEFA濃度下降，表明膽堿對(duì)脂肪組織動(dòng)員或血液NEFA清除具有一定作用，改善了奶牛的能量負(fù)平衡。

4 結(jié)論

①新研發(fā)過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品C1能夠達(dá)到在過(guò)瘤胃產(chǎn)品的基本要求。

②對(duì)能量負(fù)平衡時(shí)期奶牛補(bǔ)充過(guò)瘤胃膽堿產(chǎn)品C1可以降低能夠引起脂肪肝的非酯化脂肪酸含量，但對(duì)能夠引起酮病的β-羥基丁酸含量沒(méi)有顯著影響。對(duì)奶牛能量代謝有改善的趨勢(shì)。