湘西州生境對杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響*

羅會冠1，陳詠文1，熊利芝1,2

(1.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000；2.吉首大學(xué)植物資源保護(hù)與

利用湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 吉首 416000)

摘要：對湘西自治州7縣1市多個(gè)采集點(diǎn)的杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行檢測，考察不同生境對杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響.試驗(yàn)結(jié)果表明，湘西自治州不同地區(qū)杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)存在明顯差異，不同地區(qū)及同一地區(qū)不同采集點(diǎn)綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均存在差異.杜仲生長在海拔401～500 m范圍，坡向南坡，土壤種類為淺灰土壤，土壤母質(zhì)為石灰?guī)r或砂頁巖的條件下，杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高.

關(guān)鍵詞：湘西自治州；杜仲；綠原酸；生境

文章編號：1007-2985(2015)06-0069-03

中圖分類號：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

DOI:10.3969/j.cnki.jdxb.2015.06.016

收稿日期：*2015-05-26

基金項(xiàng)目：湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金資助項(xiàng)目(13K094)；吉首大學(xué)大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(JD-CX2013-17，JD-CX2013-11)

通信作者：熊利芝(1974—)，女，湖南益陽人，吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院副教授，博士，主要從事植物化學(xué)研究.

湘西自治州森林覆蓋率達(dá)66.9%.受海拔、地形、坡向等因素的影響，湘西地區(qū)獨(dú)特的自然生態(tài)系統(tǒng)已成為野生動植物資源天然寶庫和生物科研基因庫.杜仲(Eucommia UlmoidesOliver) 為杜仲科杜仲屬植物，是中國特有的傳統(tǒng)名貴中藥，具有增強(qiáng)機(jī)體特異性免疫功能、降血壓、降血脂、抗衰老、抗疲勞、抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理作用.[2-6]綠原酸為苯丙素類物質(zhì)，是杜仲的主要活性成分之一，對多種致病菌和病毒有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用，也是眾多藥材和中成藥抗菌解毒、鎮(zhèn)痛強(qiáng)志、消炎利膽、補(bǔ)中益氣的主要有效成份.杜仲葉綠原酸藥用有效成分與杜仲皮基本相同，藥用功能基本一致.為了更加充分地開發(fā)利用杜仲資源，為杜仲的馴化栽培提供科學(xué)依據(jù)，筆者采用HPLC法對不同生境下湘西地區(qū)的杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測定和比較.

1材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

根據(jù)杜仲在湘西自治州不同地區(qū)的分布，分別采集不同的樣品.樣品采自花垣縣(HY1-6)、龍山縣(LS1-6)、保靖縣(BJ1-6)、永順縣(YS1-6)、瀘溪縣(LX1-6)、鳳凰縣(FH1-4)、古丈縣(GZ1-4)和吉首市(JS1-4)等地，于2012年11—12月采集杜仲葉，并用GPS儀記錄有關(guān)數(shù)據(jù).樣品采集后，于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)60 ℃ 烘干保存，并選取有葉片的樣品進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn).

1.2 儀器與試劑

儀器：數(shù)控超聲波清洗器(KQ-250DE型，昆山市超聲儀器有限公司)；微型植物粉碎機(jī)(F2102型，天津市泰斯特儀器有限責(zé)任公司)；高效液相色譜儀(島津LC-20AT)，包括LC-20AT型高壓雙泵、SPD-M20A型紫外檢測器、CTO-20A柱溫箱、進(jìn)樣器、色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(LC-solution軟件).

試劑：綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不小于98%，成都康邦生物科技有限公司)，分析純(無水乙醇)，色譜純(冰醋酸、甲醇，均來自于成都金山化學(xué)試劑有限公司).

1.3 試驗(yàn)方法

(1)材料的預(yù)處理.對湘西自治州不同地區(qū)不同生境條件下的杜仲葉進(jìn)行編號、烘干、粉碎過40目篩備用.

(2)綠原酸的提取.將樣品按照料液比(g∶mL)為1∶30，提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)70%乙醇，提取溫度70 ℃，超聲輔助提取30 min，過濾，提取3次，合并濾液定容.

(3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.(ⅰ)色譜條件.色譜柱為Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：V(甲醇)∶V(水)∶V(冰乙酸)=150∶850∶5，流速1 mL/min，柱溫27 ℃，檢測波長232 nm.(ⅱ)綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制.精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品約2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)30%乙醇溶液，搖勻并定容，即得對照液.分別取對照液1，2，5，10，15，20 μL按上述色譜條件進(jìn)行高效液相分析得到峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為橫坐標(biāo)，得回歸方程y=1.5×106x+14 604，R2= 0.999 9.

(4)樣品分析.精密移取一定量的杜仲葉提取液，加水稀釋數(shù)倍，使杜仲葉提取液綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制在標(biāo)準(zhǔn)曲線制作的范圍內(nèi).按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定提取液稀釋液的峰面積，根據(jù)回歸方程計(jì)算杜仲葉提取液中綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并按照公式“綠原酸提取率(%)=提取液濃度×體積×稀釋倍數(shù)÷原料質(zhì)量×100%”計(jì)算杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù).

2結(jié)果與討論

2.1 地區(qū)對杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響

湘西自治州不同地區(qū)杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果見表1.從表1可知，湘西自治州不同地區(qū)采集的杜仲葉樣品中綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)有較大的差異，同一地區(qū)因采集地點(diǎn)的不同，差異也很大.在鳳凰縣(FH4)和古丈縣(GZ2)采集的杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，而保靖縣(BJ1)、龍山縣(LS1)和花垣縣(HY1)采集的杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低，花垣縣(HY1-6)和永順縣(YS1-6)采集的杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)差異較大.

表1　湘西自治州不同地區(qū)杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果　%

2.2 生境對杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響

根據(jù)采集信息及相同條件下杜仲葉綠原液質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值，得到坡向、海拔、土壤種類及土壤母質(zhì)等環(huán)境因素對杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響(表2).

由表2可知：在坡向因素中，南坡杜仲葉中綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于北坡的；海拔對杜仲葉綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)有一定的影響，海拔401～500 m的杜仲葉中綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高；從土壤種類來看，淺灰壤杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，約為1.34%，高于紫壤的1.22%、黑壤的1.14%、紅壤的1.09%和黃壤的0.96%.從土壤母質(zhì)因素來看，石灰?guī)r和紫砂巖等2種土壤母質(zhì)的綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)差別不大，但均高于砂頁巖的.

表2　不同生境對仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響

3結(jié)論

(1)湘西各地區(qū)及同一地區(qū)不同采集點(diǎn)采集的杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)均存在差異.

(2)杜仲生長在海拔401～500 m范圍、坡向南坡、土壤種類淺灰土壤、土壤母質(zhì)為石灰?guī)r或砂頁巖的條件下，杜仲葉綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高.

參考文獻(xiàn)：

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MassFractionofChlorogenicAcidintheLeavesofEucommia Ulmoides

OliverinDifferentHabitatsofXiangxi

LUOHuiguan1，CHENYongwen1，XIONGLizhi1,2

(1.CollegeofBiologyandEnvironmentalSciences,JishouUniversity，Jishou416000，HunanChina；

2.KeyLaboratoryofPlantResourcesConservationandUtilization(JishouUniversity)，

CollegeofHunanProvince，Jishou416000，HunanChina)

Abstract：The contents of chlorogenic acid in leaves of Eucommia ulmoides Oliver from seven counties and one city in different habitats of Western Hunan were determined.The result showed that the contents of chlorogenic acid were significantly different in different habibats.The contents of chlorogenic acid were higher in the leaves of Eucommia ulmoides Oliver in the adrets of elevation 401～500 m，in light-grey soil，and with the parent material of limestone or sand shale.

Keywords:XiangxiAutonomousPrefecture;Eucommia ulmoides Oliver；chlorogenicacid；habitat

(責(zé)任編輯陳炳權(quán))