摘要：目的 通過分析自然流產(chǎn)組和正常妊娠組孕婦人微小病毒B19（B19V）的感染狀況，探討B(tài)19V感染與人類自然流產(chǎn)之間的關(guān)系。方法 自然流產(chǎn)和正常妊娠的孕婦血清各50份，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法檢測B19V。結(jié)果 自然流產(chǎn)組和正常妊娠組的B19V檢出率分別為12%和2%，兩組PCR- B19V結(jié)果的差別具有極顯著性（χ2檢驗，P<0.01）。結(jié)論 自然流產(chǎn)孕婦血清B19V的檢出率顯著性高于正常妊娠組，提示B19V感染可能是導(dǎo)致人類自然流產(chǎn)的重要原因之一。

關(guān)鍵詞：自然流產(chǎn)；人類微小病毒B19

人微小病毒B19（human parvovirus B19，B19V）是微小病毒屬中目前已知的唯一致人類疾病的病毒，在世界范圍內(nèi)均有分布，具有極其廣泛的疾病譜，人類感染后多數(shù)呈亞臨床感染，這種感染具有自限性。研究發(fā)現(xiàn)，雖然孕婦感染該病毒癥狀通常不典型或無癥狀，但胎兒不成熟的免疫系統(tǒng)可導(dǎo)致其易感性。婦女在懷孕后一旦被B19V感染，能引起自然流產(chǎn)，多發(fā)生于妊娠初期；而在妊娠中期，會引發(fā)胎兒死亡或非免疫性胎兒水腫；在妊娠晚期，往往會發(fā)生早產(chǎn)或死產(chǎn)，出生后的新生兒預(yù)后也不樂觀[1，2]。本文中筆者對自然流產(chǎn)組和正常妊娠組孕婦人微小病毒B19（B19V）的感染狀況進行了對比分析，來探討B(tài)19V感染與人類自然流產(chǎn)之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集在湖北省婦幼保健院自然流產(chǎn)（含難免流產(chǎn)、不全流產(chǎn)、過期流產(chǎn)）孕婦50例，以EDTA抗凝管采血2ml，-20℃保存。以同期妊娠順利，無不良妊娠結(jié)局及妊娠合并癥、并發(fā)癥的孕婦50例作為對照。病例組與對照組在年齡構(gòu)成、身體條件及檢測時間分布上的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，兩組研究對象具有較好的可比性。

1.2標本處理 進行PCR擴增前，每份標本取200μl血清加入100μl含有蛋白酶K的裂解液（蛋白酶K終濃度為200μg/ml）中?；靹蚝笾?6℃消化3h，然后95℃10min滅活蛋白酶K，混合液經(jīng)14000r/min，離心15min，轉(zhuǎn)移上清液，取5μl上清液作為PCR反應(yīng)模板。

1.3 B19V檢測 PCR-B19V商品試劑盒購自奧特生物工程公司（武漢），反應(yīng)體系為30μl，PCR擴增程序為：預(yù)變性 94℃，45s，反應(yīng)條件94℃、45s-55℃、45s-72℃、60s，循環(huán)35次，72℃終延伸300s，擴增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳、溟化乙啶染色、紫外檢測等步驟，以出現(xiàn)與陽性對照齊同的電泳亮帶判為B19V陽性結(jié)果。各項PCR操作，詳按各試劑盒說明書進行。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 用四格表χ2檢驗。

2 結(jié)果

自然流產(chǎn)組孕婦血清中B19VDNA陽性6例，，檢出率為12%，對照組孕婦血清中B19VDNA陽性1例，檢出率為2%。經(jīng)χ2檢驗，二者有顯著性差異（P<0.01）。

3 討論

人類微小病毒B19（B19V）是迄今為止研究發(fā)現(xiàn)的最小的一種DNA病毒，B19V病毒在全球范圍內(nèi)均有可能發(fā)生感染，感染患者會出現(xiàn)斑疹、關(guān)節(jié)腫痛、肌肉酸痛、頭痛及發(fā)熱等輕微的癥狀，有的感染患者不表現(xiàn)出臨床癥狀?；颊吒腥綛19V后細胞核內(nèi)出現(xiàn)包涵體，同時出現(xiàn)特征性染色質(zhì)著邊，電子顯微鏡觀察還會發(fā)現(xiàn)細胞核及細胞質(zhì)顯著變性，病毒顆粒出現(xiàn)在包涵體中[3]。感染B19V能誘發(fā)多種病癥，孕婦一旦感染B19V，能誘發(fā)流產(chǎn)、早產(chǎn)，胎兒畸形、非免疫性胎兒水腫，甚者會發(fā)生死胎。被B19V感染的孕婦，約1/3都是通過母胎垂直感染而導(dǎo)致并發(fā)病癥，一般都會產(chǎn)生自然流產(chǎn)、非免疫性胎兒水腫或胎兒不發(fā)育等異常妊娠，小部分感染孕婦發(fā)生自限性感染或分娩后出現(xiàn)亞臨床型感染，大多數(shù)孕婦仍能夠娩出正常的嬰兒。

目前，診斷B19V感染一般是通過組織學(xué)檢測、血清學(xué)檢測及分子生物學(xué)檢測三種方法[4]，組織學(xué)檢測方法是觀測感染B19V后所造成組織細胞有何變化，多用于非特異性病毒感染診斷；血清學(xué)檢測是酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），該試驗被廣泛應(yīng)用，但B19V具有紅細胞嗜性，不能通過傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)增殖，診斷B19V感染的抗原血清主要從患者血清中分離獲得，因此抗體檢測試劑盒費用昂貴； 抗原DNA或mRNA的檢測成為診斷B19V感染的主要方法，其優(yōu)勢是靈敏、便捷、安全性高、特異性強。本文中筆者應(yīng)用PCR技術(shù)對血清標本進行了B19V的檢測，結(jié)果兩組標本中均不同程度地檢測出了B19V，這表明PCR技術(shù)用于B19V感染的病原學(xué)診斷具有特異性及臨床應(yīng)用價值。

感染B19V的孕婦中10%～15%的幾率會發(fā)生自然流產(chǎn)，且大部分患者為早期流產(chǎn)。引起流產(chǎn)的因素有多種，最常見的原因是遺傳基因缺陷，46%～54%的孕婦發(fā)生自然流產(chǎn)和胚胎異常的染色體有關(guān)[5-6]。還有內(nèi)分泌失調(diào)、生殖器官形態(tài)異常、感染及免疫力低下等因素也是引起流產(chǎn)的重要因素。其中，感染因素被多數(shù)學(xué)著所關(guān)注，他們并對此進行了廣泛深入的研究。相關(guān)文獻顯示，在發(fā)生不明原因自然流產(chǎn)的試驗組中，B19V 的檢測陽性率為23.4%[7-8]，結(jié)果與本文報道的24%的檢出率相似，提示B19V感染可能是導(dǎo)致自然流產(chǎn)的一個重要因素。

總之，妊娠期B19V感染是引起自然流產(chǎn)、非免疫性胎兒水腫、胎死宮內(nèi)、畸胎及新生兒預(yù)后不良的重要因素，有必要開展大樣本的流產(chǎn)病學(xué)調(diào)查來進一步研究B19V感染的自然疾病史及感染的影響因素，為臨床上預(yù)防、診斷及干預(yù)措施提供理論依據(jù)。

部分發(fā)達國家已將B19V列入了TORCH篩查的行列。我國對B19V系統(tǒng)的流行病學(xué)研究和臨床研究也已在部分地區(qū)開展。重視育齡婦女B19V的感染情況，對孕期、孕前B19V感染進行篩查，從而對B19V感染引起的不良妊娠結(jié)局進行預(yù)防、監(jiān)測和治療，降低不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育，提高出生人口質(zhì)量。

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編輯/哈濤