摘要：目的 通過研究結(jié)直腸癌中的原癌基因ret、ras以及抑癌基因p53，揭示其在結(jié)直腸癌中的意義。方法 采用免疫組織化學(xué)Envision法來對(duì)60例結(jié)直腸癌、20例結(jié)直腸腺瘤和20例正常結(jié)直腸黏膜患者中ret、ras、p53基因蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 ①ret在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率為30%，高于直腸腺瘤中0%及直腸正常組織中的5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；原癌基因k-ras在腫瘤患者、腺瘤患者以及正常人中均表達(dá)，陽性率分別為70%、45%和5%，在腫瘤患者中的陽性率明顯高于腺瘤患者和正常人，在正常人中的陽性率很低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；p53在腫瘤患者、腺瘤患者以及正常人均有表達(dá)，陽性率分別為90%、30%、10%，在腫瘤患者中的陽性率明顯高于腺瘤患者和正常人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②RET在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和患者的性別、年齡、浸潤深度、生存期無關(guān)，與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)；k-ras在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和患者的性別、年齡、生存期無關(guān)，與浸潤深度和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)；P53在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和患者的性別、年齡、浸潤深度和生存期無關(guān)，和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。結(jié)論 ①ret原癌基因可能是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的一個(gè)因素，在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定作用；②K-ras及p53蛋白在結(jié)直腸癌的陽性表達(dá)率均高于結(jié)直腸腺瘤和正常組織中，與淋巴轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān)，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子靶標(biāo)。

關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌；ret；ras；K-ras；p53；表達(dá)；意義

結(jié)直腸癌（colorectal cancer）是比較常見的消化道惡性腫瘤，隨著老齡化的增加[1]，結(jié)直腸癌的發(fā)病率也在不斷的上升。其中早期診斷為提高結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)鍵。我們對(duì)結(jié)直腸癌中的原癌基因ret、ras以及抑癌基因p53進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選取貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2003年1月～2004年12月手術(shù)切除的60例結(jié)直腸癌和同期活檢的20例腺瘤、20例結(jié)直腸正常粘膜存檔蠟塊進(jìn)行研究，其中男性43例，女性57例，年齡從29～88歲，平均年齡為（57.3±6.2）歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本處理 用10%的中性福爾馬林將標(biāo)本進(jìn)行固定并用石蠟進(jìn)行包埋。切片厚3～4 μm，按照Envision說明書進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。

1.2.2 結(jié)果判斷 Ras和ret蛋白免疫組織化學(xué)染色陽性部位為胞漿；p53的陽性部位是細(xì)胞核。細(xì)胞核或細(xì)胞漿呈棕黃色則是陽性細(xì)胞。根據(jù)Friedrich免疫反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，染色強(qiáng)度的計(jì)分與陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)計(jì)分相乘。陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)計(jì)分為：0分：陽性細(xì)胞率<1%；1分：陽性細(xì)胞率為1%～25%；2分：陽性細(xì)胞率為26%～50%；3分：陽性細(xì)胞率為51%～75%；4分：陽性細(xì)胞率>75%。染色強(qiáng)度計(jì)分為：0分：不著色；1分：淺棕黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。IRS：陰性（-）：0～2分；弱陽性（+）：3～4分；中陽性（++）：5～7分；強(qiáng)陽性（+++）：>8分。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 17.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Ret、ras、P53在結(jié)直腸癌、結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸黏膜中的表達(dá)，見表1。

由表1可得ret、ras和P53在結(jié)直腸癌、結(jié)直腸腺癌和結(jié)直腸黏膜三者中差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖1～5。

2.2結(jié)直腸癌、結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸黏膜中Ret、ras、P53表達(dá)的兩兩比較，見表2。

綜合表1、2可得：ret、ras和P53在結(jié)直腸癌與結(jié)直腸腺瘤中的陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），ret、ras和P53在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)比結(jié)直腸腺瘤高。

ret、ras和P53在結(jié)直腸癌與結(jié)直腸黏膜中的陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），ret、ras和P53在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)比結(jié)直腸黏膜高。ret、ras和P53在結(jié)直腸癌與結(jié)直腸腺瘤中的陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 ret、ras、p53及相關(guān)基因蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者生物學(xué)行為的關(guān)系，見表3。

由表3可見RET在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和患者的性別、年齡、浸潤深度、生存期無關(guān)，與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)；Ras在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和患者的性別、年齡、生存期無關(guān)，與浸潤深度和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)；P53在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和患者的性別、年齡、浸潤深度和生存期無關(guān)和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

3討論

結(jié)直腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，對(duì)人類危害嚴(yán)重。眾多研究者普遍認(rèn)為，結(jié)直腸癌的發(fā)生是一個(gè)涉及多基因、涉及多個(gè)原癌基因的激活與抑癌基因的失活。

Ret原癌基因編碼一組屬于酪氨酸激酶受體超家族的跨膜蛋白，即Ret蛋白，該蛋白對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、腎臟發(fā)育、神經(jīng)嵴細(xì)胞增殖及腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育具有重要作用，故其突變與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)[2-3]。Ret基因突變可增強(qiáng)Ret酪氨酸激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能，促使激酶的活化和原癌基因的轉(zhuǎn)化，其主要機(jī)制是[4]由于氨基酸位點(diǎn)發(fā)生突變。①Ret細(xì)胞外半胱氨酸區(qū)域外顯子10和11的突變阻止了分子間二硫鍵的形成，使游離的半胱氨酸殘基磷酸化，激活下游信號(hào)途徑；②細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸激酶區(qū)域外顯子13-16的突變，使Ret激酶催化及底物磷酸化發(fā)生改變而異常激活，而不適當(dāng)?shù)牡孜锪姿峄筊et不能正常參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而引發(fā)疾病的發(fā)生。RET原癌基因是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的原癌基因，它可能介導(dǎo)了一種嶄新的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，拓展了我們對(duì)細(xì)胞RTK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖分化及死亡規(guī)律，以及細(xì)胞生理活性調(diào)節(jié)的認(rèn)識(shí)，而且RET原癌基因是研究受體酪氨酸激酶變異導(dǎo)致人類疾病的極好模型。

原癌基因K-ras它的編碼蛋白質(zhì)是由188～189個(gè)氨基酸所組成。Ras蛋白在合成后需經(jīng)過兩種方式翻譯后修飾才可定位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)[5]，其通過催化其效應(yīng)底物進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來調(diào)節(jié)一系列與細(xì)胞生長、分化、凋亡有關(guān)的重要功能。人類腫瘤的發(fā)生至少有30%是因?yàn)閞as基因的激活而引起[6]。K-ras的激活可有許多種形式，可是基因突變，或表達(dá)增加，或可能是內(nèi)在GTP酶活性的下降，也可能是和GDP及GTP結(jié)合的親和力有所下降。有約44%的結(jié)直腸腺瘤患者中出現(xiàn)了K-ras基因的過表達(dá)[7-9]。

本研究表明K-ras基因在結(jié)直腸癌中的突變率非常高，且突變一般都發(fā)生在結(jié)直腸癌早期，ras基因在腺瘤患者里的陽性率（45%）大于P53基因在腺瘤患者里的陽性率（30%），因此ras可當(dāng)做結(jié)直腸癌早期檢測(cè)的重要標(biāo)志。

抑癌基因p53具有維持基因組的穩(wěn)定以及調(diào)控細(xì)胞生長的作用。突變了的p53抑癌基因失去了調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用，因此致使細(xì)胞的惡性增生及癌變，并且其在細(xì)胞內(nèi)的含量高，半衰期長，用免疫組化可檢測(cè)到[10]。經(jīng)研究，約50%腫瘤中可檢測(cè)出P53基因的突變，是最常見的基因改變，其與多種基因之間存在相互調(diào)節(jié)的作用[11]。在3/4的結(jié)直腸癌患者、9/20有浸潤現(xiàn)象發(fā)生的腺瘤患者以及早期的腺瘤患者中均發(fā)現(xiàn)l7號(hào)染色體的短臂位缺失。通過對(duì)對(duì)結(jié)直腸癌患者的研究發(fā)現(xiàn)，17號(hào)染色體短臂的斷裂點(diǎn)恰在p53基因位點(diǎn)上，同時(shí)又對(duì)另一等位基因上的p53基因編碼區(qū)進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其存在突變。結(jié)直腸癌同p53基因有非常大的相關(guān)性。

綜上所述，結(jié)直腸癌的發(fā)病與原癌基因ret、ras和抑癌基因P53的突變有非常密切的關(guān)系，K-ras在結(jié)直腸癌中的表達(dá)明顯高于結(jié)直腸癌良性病變，P53在結(jié)直腸癌惡性病變中表達(dá)較高，因此K-ras基因可以作為結(jié)直腸癌早期檢測(cè)的標(biāo)志而P53被認(rèn)為是腺瘤發(fā)展成為癌瘤的重要標(biāo)志。

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編輯/張燕