摘要：目的 探究阿司匹林聯(lián)合左旋多巴對帕金森小鼠的干預(yù)效果。方法 采用魚藤酮復(fù)制小鼠PD模型，實(shí)驗(yàn)分為四組，依次為A組（魚藤酮+左旋多巴），B組（魚藤酮+阿司匹林+左旋多巴），C組（魚藤酮+生理鹽水），D組（不干預(yù)組）。進(jìn)行行為學(xué)檢測，并統(tǒng)計(jì)TH免疫組化陽性神經(jīng)元數(shù)量，SOD、MDA及IL-6的測試觀察聯(lián)合用藥效果。結(jié)果 A、B、C三組神經(jīng)元明顯少于不干預(yù)組（P<0.05），但B組優(yōu)于其他兩組；SOD和MDA含量顯示氧化應(yīng)激水平升高（P<0.05）。結(jié)論 阿司匹林聯(lián)合左旋多巴對帕金森的干預(yù)有較好的效果，減少神經(jīng)元的損傷，增強(qiáng)了抗氧化應(yīng)激能力，對緩解疾病的進(jìn)程有一定的效果。

關(guān)鍵詞：阿司匹林；左旋多巴；魚藤酮；帕金森??；氧化應(yīng)激

帕金森病（Parkinson’s disease ，PD）最主要的病理改變是通過氧化應(yīng)激、免疫反應(yīng)和鈣超載等機(jī)制導(dǎo)致中腦黑質(zhì)多巴胺（dopamine， DA）能神經(jīng)元的變性死亡、紋狀體DA含量顯著性減少以及黑質(zhì)殘存神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性包涵體，即路易小體（Lewy body）[1～2]。此外，紋狀體中多巴胺和乙酰膽堿兩大系統(tǒng)的失調(diào)也參與PD的病理過程。因此臨床上帕金森病的藥物治療主要依賴多巴胺替代治療藥物和抗膽堿能藥物。左旋多巴在PD治療上應(yīng)用較多，左旋多巴為多巴胺的前體，它能通過血腦屏障，在腦內(nèi)經(jīng)多巴脫羧酶的作用轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟桶?，從而達(dá)到治療的目的。以單純左旋多巴治療，在治療過程中將不斷加大劑量，但無法控制病情進(jìn)展，并且毒副作用也越來越大[3～4]

阿司匹林主要應(yīng)用于心血管疾病，具有消炎、抗氧化作用，同時(shí)具有類向精神性作用和抗膽堿能的作用。研究表明， 在LPS誘導(dǎo)的原代中腦混合細(xì)胞炎癥模型中，阿司匹林對DA神經(jīng)元能細(xì)胞有顯著的保護(hù)作用[5]。

本實(shí)驗(yàn)主要通過研究阿司匹林聯(lián)合左旋多巴對帕金森病的干預(yù)治療。旨在提出新的藥物治療方法，以改善單純多巴胺替代藥物治療的不良反應(yīng)，加強(qiáng)藥物治療的療效，為帕金森病的臨床治療提供理論依據(jù)和參考。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物 健康普通級雄性ICR小鼠40只，體重30～35g，由常州卡文斯動物公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 魚藤酮（美國sigma公司），植物油（西王玉米胚芽油），拜阿司匹林腸溶片（拜耳），美多芭（上海羅氏制藥有限公司），超氧化物歧化酶和脂質(zhì)過氧化物丙二醇（南京建成生物工程研究所）

2 方法

2.1分組與模型制備 隨機(jī)將ICR小鼠分為三組，A組（魚藤酮+左旋多巴），B組（魚藤酮+阿司匹林+左旋多巴），C組（魚藤酮+生理鹽水），D（不干預(yù)組）共四組，每組10只，適應(yīng)性飼養(yǎng)7d。魚藤酮PD模型制備：魚藤酮1mg/kg，皮下注射40d。行為學(xué)觀察確立模型建立。

2.2 實(shí)驗(yàn)操作 A組灌胃左旋多巴15mg/kg，1d/次；B組灌胃左旋多巴15mg/kg，阿司匹林7.5mg/kg，1d/次；C組灌等量生理鹽水，D組為整體實(shí)驗(yàn)對照組。

2.3行為學(xué)檢測 WMT-200水迷宮實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)前先將小鼠放于站臺上20S，后從不同象限放入水迷宮中，小鼠登上站臺后終止記錄最后將小鼠擦干放入鼠籠。依同樣的方法分別測量四組小鼠，以此評價(jià)其空間學(xué)習(xí)能力[6]。

2.4 TH免疫組化 于末次灌胃后，于次日斷頸處死后立即斷頭取腦，取出中腦黑質(zhì)，將中腦黑質(zhì)置入4%多聚甲醛中固定過夜，后經(jīng)脫水、浸蠟、包埋、切片、烘片，然后經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水，按SP法進(jìn)行TH免疫組化染色，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。每個組織塊中選取中腦黑質(zhì)節(jié)段相應(yīng)部位的3張切片，顯微鏡鏡下觀察并計(jì)數(shù)每張切片上可見的TH免疫陽性細(xì)胞。

2.5 SOD、MDA檢測 于末次灌胃后，于次日斷頸處死后立即斷頭取腦，剝離黑質(zhì)區(qū)，用玻璃勻漿器制備勻漿，用生理鹽水制備10%的勻漿，5000r/min，離心5min，取上清液備測。

2.6統(tǒng)計(jì)方法 根據(jù)統(tǒng)計(jì)平均TH陽性神經(jīng)元數(shù)量，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[7]。

3結(jié)果

3.1 小鼠行為學(xué)觀察 空白對照組小鼠活動自如，毛色光滑，無異常表現(xiàn)。PD模型組皮下注射魚藤酮第17d出現(xiàn)運(yùn)動減少，行動遲緩癥狀，體重減輕，第24d后表現(xiàn)出震顫、探嗅、豎毛等癥狀。第40d后，對小鼠分組進(jìn)行7d干預(yù)治療，左旋多巴組和左旋多巴聯(lián)合阿司匹林組的小鼠行為出現(xiàn)改善。

3.2 行為學(xué)檢測

2.3 TH免疫組化

2.4 SOD、MDA含量的變化

4討論

本實(shí)驗(yàn)以魚藤酮制備帕金森小鼠模型，研究阿司匹林聯(lián)合左旋多巴對其干預(yù)治療的療效。研究發(fā)現(xiàn)，阿司匹林聯(lián)合左旋多巴對中腦黑質(zhì)神經(jīng)元有較好的保護(hù)作用，可降低SOD和提高M(jìn)DA含量與活性，具有抗氧化的作用，效果優(yōu)于單一用藥。

帕金森?。≒arkinson’s disease， PD）是繼阿茲海默癥（Alzheimer’s disease， AD）之后第二大神經(jīng)病變疾病。它具有患病率高，病程長，進(jìn)行性加重等特點(diǎn)，多見于老年人，65歲以上患病率高達(dá)1%～2%。有研究表明，我國65歲以上人群PD的患病率已高達(dá)1.7%，而且未來仍有持續(xù)增高的可能[8]。目前臨床上現(xiàn)多用左旋多巴單一治療，效果在早期較好，但隨著用藥時(shí)間的延長，其毒副作用也更加明顯，效果也隨著降低[9～10]。

本實(shí)驗(yàn)是從氧化應(yīng)激角度出發(fā)，利用阿司匹林抗氧化和抗膽堿能作用[11]，與左旋多巴聯(lián)合用于帕金森小鼠模型的治療。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿司匹林聯(lián)合左旋多巴對帕金森的治療效果較優(yōu)于單一用藥，在一定程度上起到保護(hù)神經(jīng)元的作用，可升高機(jī)體內(nèi)SOD水平，降低MDA水平，達(dá)到抗氧化的作用。

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編輯/馮焱