CIK細(xì)胞結(jié)合復(fù)方苦參注射液治療中晚期腎臟腫瘤

趙俊峰李保東1張林超2陳瑞庭崔洪泉羅宏偉3

(河南省中醫(yī)院河南中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院泌尿外科，河南鄭州450002)

摘要〔〕目的探討殺傷細(xì)胞(CIK)細(xì)胞結(jié)合復(fù)方苦參注射液對中晚期腎臟腫瘤患者的治療效果。方法隨機(jī)將98例中晚期腎臟腫瘤患者分成對照組(CIK治療組35例、復(fù)方苦參注射液治療組33例)和實(shí)驗(yàn)組(CIK+復(fù)方苦參注射液治療組30例)，分別觀察不同分組患者治療前后生存質(zhì)量及瘤體變化并計算有效率。結(jié)果治療前后各組生存質(zhì)量及瘤體變化均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組生存質(zhì)量及瘤體變化與兩個對照組均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組的有效率明顯高于其他兩組，在改善生存質(zhì)量及縮小瘤體方面CIK組、復(fù)方苦參注射液組都有一定效果，但實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于復(fù)方苦參注射液組和CIK組。結(jié)論CIK細(xì)胞結(jié)合復(fù)方苦參注射液治療中晚期腎臟腫瘤效果較好。

關(guān)鍵詞〔〕CIK細(xì)胞；腫瘤；腎臟；復(fù)方苦參注射液

中圖分類號〔〕R737.11〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

基金項(xiàng)目：鄭州市科技攻關(guān)項(xiàng)目 (No.10PTGS486-9)

通訊作者：羅宏偉(1966-),男,主任醫(yī)師,主要從事腫瘤的基礎(chǔ)及臨床研究。

1河南省腫瘤醫(yī)院2鄭州市中心醫(yī)院3鄭州市中醫(yī)院

第一作者：趙俊峰(1966-)，男，主任醫(yī)師，主要從事腎臟腫瘤的RNA干擾以及臨床方面的研究。

手術(shù)是腎癌唯一具有肯定療效的手段，中晚期腎癌因此喪失手術(shù)機(jī)會，造成中晚期腎臟腫瘤的治療效果較差，生存期短。目前主要通過增強(qiáng)機(jī)體免疫提高患者生存率，但是總體有效率不盡人意，其中細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)過繼治療可能成為目前此類腎臟腫瘤免疫治療中最有效的方法之一，而中藥復(fù)方苦參注射液療法可能通過改善造血功能、增加機(jī)體免疫力抑制腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散，有效地抑制腫瘤進(jìn)展。本文采用CIK細(xì)胞過繼治療以及復(fù)方苦參注射液治療中、晚期腎臟腫瘤患者，觀察臨床療效。

1對象與方法

1.1研究對象中、晚期腎臟腫瘤患者98例，男65例，女33例，年齡30～75〔平均(54±13.4)〕歲，隨機(jī)分為CIK治療組、復(fù)方苦參注射液治療組、CIK+復(fù)方苦參注射液治療組(聯(lián)合組)。腎透明細(xì)胞癌64例，乳頭狀腎細(xì)胞癌21例，嫌色細(xì)胞癌11例，集合管癌2例，均為中、晚期患者(TNM分期法)：Ⅲ期61 例，Ⅳ期37 例。預(yù)計生存期>3個月，治療前行心電圖、彩超、CT、磁共振成像(MRI)及生化、腫瘤標(biāo)志物等檢查，重要臟器(心、肝、肺、腎)功能正常，采血前2 w及治療期間未同時行放化療并常規(guī)化驗(yàn)血常規(guī)、免疫球蛋白以及外周血淋巴細(xì)胞等，所有自愿接受該治療者，同時簽署《患者知情同意書》。禁忌用于對生物制品敏感者。

1.2方法

1.2.1外周血細(xì)胞分離及CIK細(xì)胞的制備治療當(dāng)日晨在患者空腹?fàn)顟B(tài)下抽取自體外周血50 ml，采用1∶1或1∶2淋巴細(xì)胞分離將人外周抗凝血的淋巴細(xì)胞分離，吸取單個核細(xì)胞層，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3遍，用含10%人AB血清的RPMI1640培養(yǎng)液，調(diào)細(xì)胞濃度為1.0×106/ml∶第1天加入干擾素(IFN)-γ 1 000 U/ml，24 h后加入白細(xì)胞介素(IL)-1α 100 U/ml、IL-2 500 U/ml、CD3單抗50 ng/ml，此后每隔3 d換液1次，并補(bǔ)加IL-2及CD3單抗。第7天取樣顯微鏡下計數(shù)，測定增殖速率。第10～13天細(xì)菌、霉菌培養(yǎng)陰性收獲細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次后混懸于250 ml生理鹽水中制成CIK混懸液備用。

1.2.2CIK細(xì)胞輸注依照衛(wèi)生部“人體細(xì)胞治療臨床研究質(zhì)控要點(diǎn)”和中國免疫學(xué)會制定的“過繼性免疫治療癌癥規(guī)范”，CIK細(xì)胞混懸液均為新鮮配制，每位患者治療4個療程，每個療程需要輸注新鮮配制的CIK細(xì)胞4次(1～2次/w)，輸注新鮮配制的CIK細(xì)胞數(shù)不低于(1.6～6.5)×109次，間隔28 d。

1.3評定指標(biāo)治療結(jié)束1個月后按照國際抗癌聯(lián)盟(UICC)和世界衛(wèi)生組織制定的實(shí)體瘤客觀療效評定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價：完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、輕度緩解(MR)、穩(wěn)定(SD)和進(jìn)展(PD)，CR+PR+MR為有效，而且評價的臨床療效各項(xiàng)指標(biāo)持續(xù)4 w以上。不良反應(yīng)評價：按世界衛(wèi)生組織(2005年)抗癌藥物毒性分類標(biāo)準(zhǔn)：0-N度進(jìn)行評估。疾病控制率(有效率)=〔(CR+PR+ MR)/治療總?cè)藬?shù)〕×100%。所有患者均通過CT測量腫瘤大小的變化。生活質(zhì)量采取Karnofsky百分法，包括患者的一般情況和不良反應(yīng)，一般情況觀察患者食欲、體力、睡眠、疼痛、體重的變化；不良反應(yīng)觀察患者治療過程中畏寒、發(fā)熱、皮疹、脈搏、呼吸困難等的發(fā)生情況。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS18.0軟件行和χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1治療效果聯(lián)合組、CIK組、復(fù)方苦參注射液組的治療有效率分別是63.33%、51.43%、48.48%，聯(lián)合組顯著高于其他兩組(均P<0.05)，其中CR 2 vs 1 vs 1例，PR 8 vs 7 vs 6例，MR 9 vs 10 vs 9例，SD 8 vs 12 vs 11例，PD 3 vs 5 vs 6例。三組治療效果及治療前后生存質(zhì)量、瘤體變化見表1。

組別n生存質(zhì)量治療前治療后瘤體長(cm)治療前治療后瘤體寬(cm)治療前治療后聯(lián)合組3070.80±3.7791.58±4.466.51±3.254.42±1.824.97±1.853.09±1.44CIK組3569.98±3.4582.82±5.911)6.86±1.584.56±2.031)4.56±1.763.72±1.261)復(fù)方苦參注射液組3370.96±3.1481.93±6.011)2)6.44±3.044.70±1.991)2)4.35±0.993.40±1.211)2)

與聯(lián)合組比較：1)P<0.05；與CIK組比較：2)P<0.05

2.2不良反應(yīng)聯(lián)合組與CIK組中8例(12.31%)出現(xiàn)畏寒、發(fā)熱，經(jīng)簡單處理后均在1 d內(nèi)自行緩解，其中6例發(fā)生在輸注的6 h以內(nèi)，2例為輸注當(dāng)天但是超過6 h；出現(xiàn)皮疹2例，未予特殊處理，其余均無明顯不良反應(yīng)。

3討論

腎腫瘤是泌尿系最常見的惡性腫瘤，2013年美國統(tǒng)計新發(fā)腎腫瘤占所有新發(fā)實(shí)體腫瘤的3%〔1〕。由于起病隱襲，死亡率高〔2〕，所以有大約20%的患者在初次就診時有轉(zhuǎn)移，而腎癌根治術(shù)的患者將有50%出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移〔3〕。因此腎癌患者中有30%～50%最終將發(fā)展成為轉(zhuǎn)移性腎癌〔4〕，腎癌一旦出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，5年生存率不到10%，平均存活時間<2年。由于腎癌對放化療均不敏感，手術(shù)后需要進(jìn)一步治療或者出現(xiàn)進(jìn)展的患者往往需要繼續(xù)進(jìn)行其他治療(免疫治療)，可是免疫治療腎癌總的有效率不超過25%〔5〕。因此近年很多學(xué)者開始關(guān)注中藥治療腫瘤的可行性，其中復(fù)方苦參注射液已經(jīng)應(yīng)用于臨床，但關(guān)于腎癌的報道還很少〔6〕，而實(shí)驗(yàn)研究也不多〔7〕。目前研究顯示它能抑制腫瘤細(xì)胞生長或誘導(dǎo)其凋亡，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，防止轉(zhuǎn)移，達(dá)到控制或治愈腫瘤的目的。另外在此之前有學(xué)者利用自體CIK細(xì)胞過繼性免疫治療腫瘤取得一定效果〔8〕，它通過體外擴(kuò)增激活自體免疫效應(yīng)細(xì)胞，然后再輸注給患者，以殺傷患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞，由于CIK細(xì)胞具有增殖能力強(qiáng)、殺瘤活性高、殺瘤譜廣等特點(diǎn)，尤其對細(xì)胞免疫功能低下的患者效果更好。

本研究提示細(xì)胞治療將是中晚期腎臟腫瘤患者的一種重要輔助治療手段，它通過幫助促進(jìn)患者免疫系統(tǒng)的修復(fù)、微小病灶的清除從而改善患者的生活質(zhì)量。由于CIK細(xì)胞其具有較強(qiáng)的增殖能力和細(xì)胞毒性且殺瘤譜廣已在臨床上顯示出良好的應(yīng)用效果〔8〕，而且CIK細(xì)胞抗腫瘤作用主要是CD3+CD56+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞的直接殺傷作用，這種殺傷作用不受組織相容性復(fù)合體(MHC)限制，因此它可以用來治療眾多的腫瘤患者，同時CIK細(xì)胞自身還能分泌IL-2、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)等細(xì)胞因子〔9〕，提高細(xì)胞毒性，這就大大增加了其抗腫瘤活性。

復(fù)方苦參注射液是一種純中藥復(fù)方抗腫瘤制劑，由苦參和土茯苓兩味中藥經(jīng)現(xiàn)代工藝提取而成，具有止血、止痛、抑制腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散，同時還可改善造血功能、增加機(jī)體免疫力、保護(hù)肝功能等作用，對正常細(xì)胞無抑制作用?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明，苦參中含有的苦參堿可抑制端粒酶活性，阻止腫瘤細(xì)胞進(jìn)入S期，抑制DNA復(fù)制，抑制腫瘤細(xì)胞增殖能力，抑制腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，阻止腫瘤的轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤新生血管生成，對腫瘤細(xì)胞有直接殺傷作用，能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，苦參堿也是一種免疫調(diào)節(jié)劑，能提高肝微粒體細(xì)胞色素P450含量，增加乙基嗎啡N-脫甲基酶，為細(xì)胞色素P450的誘導(dǎo)劑，減少腫瘤患者在化療中所引起的白細(xì)胞減少〔10〕。

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〔2013-12-06修回〕

(編輯袁左鳴)