孫亦群

（廣州中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，廣東 廣州 510405）

藥品檢驗中無菌觀念的培養(yǎng)及無菌操作規(guī)范

孫亦群

（廣州中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，廣東 廣州 510405）

介紹無菌概念、滅菌方法及無菌操作規(guī)范，強調培養(yǎng)無菌觀念的重要性及基本操作訓練、無菌室的制度管理。

藥品檢驗；無菌概念；操作規(guī)范

藥品是特殊商品，藥品質量關系到人的健康和生命。因此，生產藥品的車間需達到一定的凈化級別，生產中的每個步驟都應有操作規(guī)范，每一位操作者都應具備一定的藥學專業(yè)知識并經過崗位培訓。作為一位藥學工作者，樹立無菌觀念、掌握無菌技術是十分必要的。

1 無菌技術

無菌技術包括無菌環(huán)境及無菌操作。

1.1 無菌環(huán)境

用物理或化學方法，在某一可控的空間內，使微生物數量降到最低限度。

潔凈室是根據需要對空氣中塵粒、微生物、溫度、濕度、壓力和噪聲進行控制的密閉空間，并以其空氣潔凈度級別符合有關規(guī)定為主要特征。我國將空氣潔凈度劃分為4個級別，見表1。

表1 空氣潔凈度級別

對于制藥車間來說，一般要求達到300 000級到100 000級，而對于檢驗用的無菌操作室，要求達到10 000級，局部100級（操作臺）。為保持無菌環(huán)境，防止污染，人流通道應設2個緩沖間，需經過換鞋、換衣、洗手、消毒等步驟方能進入；物流設傳遞窗，物品經清潔、消毒后，經傳遞窗進入。

1.1.1 物理滅菌法（1）干熱滅菌：滅菌設備為電烤箱。適用于設備、器械、容器、耐熱干粉藥劑的滅菌。

（2）濕熱滅菌：以水或水蒸氣為媒介，通過加熱提高溫度，達到滅菌效果。適用于設備、器械、耐熱液體藥劑、生藥等的滅菌。常用的方法有煮沸滅菌法、流通蒸氣法、間歇滅菌法、高壓蒸氣滅菌法、巴氏消毒法。①間歇滅菌法：當溫度達到一定值，保溫一段時間后，降至室溫，再繼續(xù)加熱，溫度達到一定值，保溫一段時間后，降至室溫，這樣反復操作幾次，直至達到滅菌效果。如靈芝孢子粉的滅菌：加熱至70℃（或80℃），保溫1小時，降至室溫，反復操作3次。這個方法適用于不耐長時間高溫的物品滅菌[1]。②高壓蒸氣滅菌法：常用各類壓力滅菌器，在壓力作用下，可使蒸氣穿透力增強，溫度提高，極大提高滅菌效果。這個方法適用于耐高溫的物品滅菌。③巴氏消毒法：最早用于牛奶的消毒。有兩種方法：保持式巴氏消毒法和連續(xù)式巴氏消毒法。保持式巴氏消毒法即在62℃～65℃處理30分鐘，立即降溫，15分鐘內降至5℃以下，可殺滅致病微生物（如結核桿菌、布氏桿菌、沙門菌等）；連續(xù)式巴氏消毒法即在72℃～75℃保持15～16秒，立即降溫至10℃，再繼續(xù)加熱至80℃～85℃，保持10～15秒，立即降溫至10℃。而現在常用于血漿蛋白制品生產中的病毒滅活的巴氏消毒法是60℃保持10小時[2-3]。

（3）輻射滅菌：醫(yī)療器械、容器、生產輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。①紫外線滅菌：紫外線消毒滅菌（UVGⅠ）定義為：使用紫外線光輻射進行空氣和表面消毒殺菌的技術，即利用紫外線C波段254 nm波長產生的紫外線破壞微生物的DNA或RNA，達到消毒殺菌的效果。紫外線消毒滅菌是一種高效、廣譜、無污染、經濟簡單的實用技術，可廣泛應用于水、空氣的消毒殺菌，是一項被醫(yī)學界公認的最有效的廣譜殺菌技術。其可在短時間內殺滅分布于空氣及水中的微生物，還能產生活性氧清新空氣，對潔凈室來說能增加空氣新鮮度、潔凈度，真正達到潔凈衛(wèi)生的空氣品質，并適用于物品表面的消毒[4]。②微波滅菌：微波（Microwave）是頻率在300 MHz至300 GHz，波長在1 mm至1 000 mm范圍內的超高頻電磁波。在微波輻射下產生熱效應，并使分子的運動加劇，分子的平均能量增加，瞬間提高溫度，達到滅菌效果[5]。③鈷60射線滅菌：利用60Co-Y射線對細菌進行輻射，破壞細菌的DNA和RNA，使分子發(fā)生降解，失去合成蛋白質和遺傳的功能，使細胞死亡，達到滅菌效果。具有穿透力強、節(jié)能、安全、方便（不必除去包裝）、高效、滅菌徹底等優(yōu)點。一般選擇輻照劑量為10 kGy以下、輻照時間為5小時就能達到滅菌效果。對不能以常規(guī)方法滅菌的制劑，可以采用鈷60輻照滅菌[3]。

（4）濾過滅菌：利用微孔濾膜（0.22 μm）濾除細菌。常用于熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料、生化藥劑、水及空氣的滅菌。

1.1.2 化學滅菌法 化學滅菌法可分為氣體滅菌法和液體滅菌法。（1）氣體滅菌法是指采用氣態(tài)殺菌劑（如臭氧、環(huán)氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和過氧乙酸蒸氣等）進行滅菌的方法。該法特別適合環(huán)境消毒以及不耐加熱滅菌的醫(yī)用器具、設備和設施的消毒，亦可用于粉末注射劑。（2）液體滅菌法是指采用液態(tài)殺菌劑進行消毒的方法。該法常作為其他滅菌法的輔助措施，適合于皮膚、無菌器具和設備的消毒。常采用的消毒液有75%乙醇、1%聚維酮碘溶液、0.1%～0.2%苯扎溴銨（新潔爾滅）、2%左右的酚或煤酚皂溶液等。

1.2 無菌操作

無菌操作一般是指在無菌環(huán)境下，使用無菌器材進行操作，可保證操作中物品不被二次污染、實驗結果的真實性及檢驗人員的安全。無菌操作涉及的面很廣，現以藥品檢驗中的無菌操作為例，簡述如下[6]。

1.2.1 實驗前準備 消毒（對無菌操作室地面、墻面、工作臺面及燈具等進行消毒）→空間滅菌（開啟凈化系統(tǒng)和紫外線燈）→經滅菌處理的實驗器具與供試品進入無菌室（通過物流通道）→操作人員進入第一緩沖間（換鞋、洗手、用消毒液消毒手）→操作人員進入第二緩沖間（穿戴無菌工作服、鞋、帽、口罩，75%乙醇噴霧消毒手）→操作人員進入無菌室→點燃酒精燈，用有消毒液的棉球消毒手→進行實驗操作。

1.2.2 檢驗操作規(guī)程（1）實驗全過程應在近火焰處操作，動作要輕。（2）對供試品及實驗器皿做標記。（3）對接種環(huán)（針）進行灼燒滅菌。（4）用吸管吸取供試液或培養(yǎng)液等。（5）用過的玻璃器皿應立即放入消毒液缸（桶）內進行滅菌。（6）在開啟菌種管或其他供試品安瓿之前，應用碘伏溶液、碘酒棉球消毒容器及刻痕用的砂輪、鋸刀等，安瓿切口通過火焰滅菌。（7）在接種霉菌、放線菌時，應在鋪有浸過消毒液的濕紗布上操作，以防孢子散落傳播。（8）培養(yǎng)皿開蓋時開口朝向火焰，不得將蓋放在工作臺上，拔出玻璃容器塞子時應用小指夾住塞子拔出，不得將塞子放在工作臺上，以免造成污染。（9）觀察平板培養(yǎng)物時，一般不宜開蓋觀察。如取菌落或菌苔涂片、染色，或做玻片凝集試驗時，在近火焰處操作，平皿蓋可適當開啟（45°），開口朝向火焰，挑取菌落。（10）在涂片、染色時，應使用夾子夾持載玻片，切勿用手直接拿載玻片，用過的載玻片和蓋玻片應放入消毒液中消毒后洗刷清潔，再經消毒后再洗刷清潔，最后放在固定處。

2 無菌觀念的培養(yǎng)

臨床上常由于操作人員未嚴格遵守無菌操作原則，導致醫(yī)療、護理事故，而在制藥及藥品檢驗上，雖然不比醫(yī)療上會造成嚴重后果，但同樣也會造成很大的損失。如造成整批藥品微生物限度超標而報廢；又如因操作污染，檢驗結果無效，需要從頭來過等。無菌操作看似簡單，但無菌觀念的養(yǎng)成卻并不簡單。要應用好無菌技術，就要樹立牢固的無菌觀念。無菌觀念的形成不是一蹴而就的，強化無菌觀念是一個長期的、重要的任務，需要不斷學習、培訓，強化無菌意識，還要建立嚴格的制度，以制度管理員工，才能使員工逐漸樹立無菌觀念，做好每一步無菌操作，生產出合格的無菌產品。

2.1 無菌知識的學習

藥學人員應時刻牢記藥品是特殊商品，質量是企業(yè)的生命，藥品質量直接關系到人的健康甚至生命。只有了解無菌概念，才能知道其重要性，才能自覺樹立無菌意識。在無菌操作中，自覺做好每一步操作，最終完成無菌操作全過程，生產出合格的無菌產品，產品的質量就會有保證。

2.2 滅菌技術及無菌操作的培訓

無菌操作是培訓重點，僅學習幾個概念、定義及條文是遠遠不夠的。因此，要加強滅菌技術及無菌操作的培訓，通過培訓，使員工清楚地了解怎么做是正確的、怎么做是錯誤的，加深他們對無菌觀念的認識和理解，從而逐漸養(yǎng)成無菌操作的良好習慣。

以藥品檢驗為例，實習生及新入職的檢驗員都要經過培訓才能上崗。初上崗時，需要教師帶教，對以下問題進行實地講解：操作環(huán)境需要消毒，如何消毒？所有物品，包括檢驗器具、培養(yǎng)皿、吸管、稀釋液、培養(yǎng)基都要消毒，如何消毒？為什么消毒物品要裝入容器內，或用消毒巾包好？無菌物品在空氣中能否暴露較長時間？無菌物品取出后能否放回無菌容器內？為什么手經過消毒，還是不能接觸吸管吸樣品的一端？用吸管取樣時，能否用嘴吹？通過對這些問題的講解，以加深實習生及新入職檢驗員對無菌觀念的認識。

2.3 嚴格的制度管理

員工經過學習和培訓，了解了無菌概念，樹立了無菌意識，養(yǎng)成了無菌操作的良好習慣，還需要嚴格的制度管理才能使無菌觀念長久地樹立心中，順利地貫徹執(zhí)行下去[7]。其中，無菌操作室管理制度包括：（1）無菌操作室溫度應控制在18℃～26℃，相對濕度應控制在45%～65%，并做到每天記錄；（2）級別不同的相鄰房間的靜壓差應大于5 Pa，無菌操作室與室外大氣的靜壓差應大于10 Pa，以保證空氣新鮮，并做到每天記錄靜壓差；（3）無菌操作室內空氣的微生物數和塵粒數應符合規(guī)定并定期檢查和記錄。無菌操作室微生物數、塵粒數檢測每年一次，檢測報告應歸檔備查；（4）進入無菌操作室按規(guī)定穿潔凈工作服，工作人員應按個人衛(wèi)生制度進行檢查，合格后方可進入潔凈室。無菌操作室使用完畢，應嚴格按清潔規(guī)程進行各房間、器具等的清潔工作，實驗前后均應對無菌操作室進行消毒，并有清潔記錄及消毒記錄。另外，人員出入均需登記；（5）無菌操作室內嚴格控制人員數量，無關人員嚴禁入內。工作人員（包括維修輔助人員）應定期進行衛(wèi)生和微生物學基礎知識、潔凈作業(yè)等方面的培訓與考核，對進入無菌操作室的臨時外來人員應進行指導和監(jiān)督。

[1]蕭莉.靈芝孢子粉低溫間歇滅菌法除菌效果的考察[J].中國藥業(yè)，2003，12（1）：52.

[2]薛廣波.現代消毒學[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002.

[3]張文福.醫(yī)學消毒學[M].北京：軍事醫(yī)學科學出版社，2002.

[4]嚴浩.紫外線消毒滅菌（UVGI）與（過濾+UVGI）潔凈技術[J].機電信息，2009（29）：3-9.

[5]黃振洲.微波滅菌在醫(yī)藥工業(yè)的應用[J].醫(yī)藥工程設計，2003，24（1）：16-18.

[6]孫亦群.醫(yī)院制劑檢驗人員的崗位培訓[J].現代醫(yī)院，2011，11（2）：131-132.

[7]周曉英.手術室無菌管理概述[J].中國中醫(yī)藥現代遠程教育，2012（24）：94.

G420

B

1671-1246（2015）08-0158-02