胃腺癌中細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白20、組織蛋白酶B和D的表達(dá)及意義

胡順成

(青海省仁濟(jì)醫(yī)院內(nèi)科，青海西寧810021)

摘要〔〕目的檢測(cè)胃腺癌中細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT20)、組織蛋白酶(Cath)-B和D的表達(dá)，分析三者在不同臨床特征中表達(dá)的差別。方法94例胃腺癌臨床資料及術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，82例距腫物邊緣>5 cm的正常胃黏膜組織作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)兩組中IFT20、Cath-B和D的表達(dá)。結(jié)果兩組中IFT20、Cath-B和D的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。觀察組中IFT20、Cath-B和D的表達(dá)與腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤(rùn)具有相關(guān)性。觀察組中IFT20的表達(dá)與腫瘤的分化程度和Ki67的表達(dá)具有相關(guān)性。相關(guān)性分析顯示觀察組中IFT20和Cath-B、IFT20和Cath-D的表達(dá)具有正相關(guān)性。結(jié)論胃腺癌中IFT20、Cath-B和D高表達(dá)對(duì)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有促進(jìn)作用，IFT20與Cath-B、D具有協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞〔〕胃腺癌；細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20；組織蛋白酶(Cath)-B；Cath-D；免疫組化

中圖分類號(hào)〔〕R735〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

第一作者：胡順成(1979-)，男，主治醫(yī)師，主要從事老年病研究。

胃腺癌是起源于上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，基因和蛋白表達(dá)失調(diào)是重要的促進(jìn)因素〔1〕。細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20在正常機(jī)體中存在微量表達(dá)，而在腫瘤中的表達(dá)常增高，且具有雙向功能〔2〕。IFT20高表達(dá)可以把細(xì)胞的相關(guān)信息從高爾基細(xì)胞器傳送到細(xì)胞表達(dá)，使細(xì)胞周期加速，增殖活性增強(qiáng)，轉(zhuǎn)移潛能提高〔3〕。組織蛋白酶(Cath)-B、D是細(xì)胞半胱氨酸溶解酶體蛋白酶，在正常組織中的表達(dá)較少，在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中常表達(dá)升高，可以降解層黏連蛋白、纖維連接蛋白、彈力蛋白、Ⅳ型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)成分，破壞組織屏障，促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移〔4,5〕。本文關(guān)注胃腺癌中IFT20、Cath-B和Cath-D的表達(dá)，探討其相關(guān)性及臨床意義。

1資料與方法

1.1臨床資料2012年1月至2013年6月經(jīng)病理證實(shí)為胃腺癌的手術(shù)根治標(biāo)本作為觀察組，共94例，均符合WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男53例，女41例；年齡54～83歲，平均(65.4±7.3)歲。高分化17例，中分化17例，低分化60例。術(shù)前均未行任何放、化療。同時(shí)選取距腫物邊緣>5 cm的正常胃黏膜組織82例作為對(duì)照組。其中男41例，女41例；年齡55～79歲，平均(64.5±6.5)歲。兩組一般資料無(wú)明顯差異。

1.2免疫組化檢測(cè)IFT20、Cath-B和D蛋白的表達(dá)IFT20、Cath-B和D蛋白均為濃縮液。抗體按不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最佳配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。采用免疫組化SP法檢測(cè)組織中IFT20、Cath-B和D蛋白的表達(dá)。操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)完成，做好質(zhì)控工作。

1.3IFT20、Cath-B和D的判定方法IFT20、Cath-B和D陽(yáng)性的部位均為細(xì)胞質(zhì)，出現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色定為陽(yáng)性細(xì)胞。選擇10個(gè)染色較為集中的、有代表性的高倍視野，計(jì)數(shù)總細(xì)胞數(shù)及總的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性率。以≥5%定為陽(yáng)性，<5%定為陰性。計(jì)算組間陽(yáng)性率的差別。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1兩組中IFT20、Cath-B和D表達(dá)陽(yáng)性率的比較IFT20、Cath-B和Cath-D在兩組中表達(dá)陽(yáng)性率差別顯著(P<0.001)。見(jiàn)表1。

2.2觀察組中不同臨床特征患者IFT20、Cath-B和D蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較觀察組中IFT20、Cath-B和D的表達(dá)與腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤(rùn)具有相關(guān)性。觀察組中IFT20的表達(dá)與腫瘤的分化程度和Ki67的表達(dá)具有相關(guān)性。見(jiàn)表2。

表1兩組中IFT20、Cath-B和D表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

組別nIFT20Cath-BCath-D觀察組9457(60.64)64(68.09)50(53.19)對(duì)照組8210(12.20)16(19.51)20(24.39)χ2/P值43.5932/<0.000141.6756/<0.000115.1661/<0.0001

表2觀察組中不同臨床特征患者IFT20、Cath-B和D蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

臨床特征nIFT20Cath-BCath-D腫瘤最大徑 ≤5cm4417(38.64)24(44.44)8(18.18) >5cm5040(80.00)40(80.00)42(84.00) χ2值 P值16.7769<0.000113.86670.000240.7211<0.0001淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú)4921(42.86)27(55.10)10(20.41) 有4536(80.00)37(82.22)40(88.89) χ2值 P值13.55850.00027.94000.004844.1825<0.0001脈管浸潤(rùn) 無(wú)7439(52.70)46(62.16)32(43.24) 有2018(90.00)18(90.00)18(90.00) χ2值 P值9.17630.00255.61510.017813.82470.0002分化程度 高+中347(20.59)24(70.59)14(41.18) 低6050(83.33)40(66.67)36(60.00) χ2值 P值35.7965<0.00010.15360.69513.08840.0789Ki67表達(dá) ≤25%3911(28.21)25(64.10)20(51.28) >25%5546(83.64)39(70.91)30(54.55) χ2值 P值29.3757<0.00010.48650.48550.09760.7547

2.3觀察組中IFT20、Cath-B和D表達(dá)的相關(guān)性IFT20和Cath-B的表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0.47，P=0.041 3)，IFT20和Cath-D的表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0.48，P=0.034 1)。

3討論

胃腺癌是發(fā)生于胃黏膜呈腺樣分化的惡性腫瘤，病因有多種因素，長(zhǎng)期萎縮性胃炎、上皮內(nèi)瘤變是重要的促進(jìn)因素，其病變的潛伏期可達(dá)數(shù)十年〔6〕。胃癌及萎縮可以改變胃酸分泌，升高胃內(nèi)pH值，改變菌株并允許厭氧菌移植到胃中生長(zhǎng)，這種細(xì)菌產(chǎn)生活性還原酶，可以將食物中的硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽，而亞硝酸鹽是一種活性分子，能同胺類反應(yīng)產(chǎn)生致癌性N-亞硝基復(fù)合物，可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。而在此過(guò)程中，常伴隨著多種癌基因和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因、蛋白的表達(dá)失調(diào)〔7〕。IFT微量存在于機(jī)體中，可以具有多種生物學(xué)功能。IFT20是家族的重要成員，可以促進(jìn)多囊腎形成、視神經(jīng)的功能異常等。IFT20蛋白定位在細(xì)胞質(zhì)中，主要表達(dá)在核旁高爾基器分布區(qū)域，其功能與信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)，使細(xì)胞信號(hào)從高爾基器傳送到細(xì)胞有活性功能的細(xì)胞表面，也可以傳到有纖毛細(xì)胞的基底部，增加細(xì)胞的遷移功能〔8,9〕。姜容等〔10〕通過(guò)對(duì)人體不同腫瘤中IFT20的表達(dá)進(jìn)行分析后，認(rèn)為IFT20在卵巢癌中大量表達(dá)，在小腸癌、胃癌、乳腺癌中呈中等量表達(dá)，在胰腺癌、肺癌中低表達(dá)，在前列腺癌中未見(jiàn)表達(dá)，因此IFT20在不同腫瘤中的表達(dá)不同，其不僅與腫瘤的特異性有關(guān)，還可能在不同腫瘤中對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移潛能的影響程度不同。Cath-B和D均屬于細(xì)胞半胱氨酸溶解酶體蛋白酶，Cath-B催化作用由半胱氨酸和組氨酸實(shí)現(xiàn)，其水解位點(diǎn)為精氨酸，也能在羧基端按順序水解二肽〔11,12〕。正常情況下，Cath-B限于核周的泡囊且表達(dá)較少，而在腫瘤病變中，尤其是腫瘤進(jìn)展過(guò)程中Cath-B表達(dá)明顯增高〔13,14〕。Cath-D作為蛋白水解酶，直接作用是引起基底膜的溶解，使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的通道打開(kāi)，轉(zhuǎn)移潛能升高〔15,16〕。Cath-B和D均能激活蛋白水解級(jí)聯(lián)反應(yīng)，生成能夠降解多種胞外基質(zhì)成分的物質(zhì)，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔17,18〕。其次，Cath-B和D在降解細(xì)胞外基質(zhì)成分時(shí)，可以誘導(dǎo)間質(zhì)血管生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤的增殖〔19,20〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示觀察組中IFT20、Cath-B和Cath-D的表達(dá)升高是腫瘤發(fā)生的重要因素。IFT20、Cath-B和D高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、淋巴道播散和脈管浸潤(rùn)，以上因素均提示腫瘤處于進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，因此IFT20、Cath-B和D表達(dá)升高是腫瘤進(jìn)展的客觀指標(biāo)。IFT20表達(dá)的升高可以使腫瘤處于更幼稚的分化階段，腫瘤的失控性增殖更活躍，異型性更大，惡性程度更高，腫瘤的生長(zhǎng)速度加快，腫瘤的異質(zhì)性更強(qiáng)。IFT20可以促進(jìn)Cath-B和D的表達(dá)，使細(xì)胞外基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)降解更明顯，細(xì)胞轉(zhuǎn)移和播散的通道打開(kāi)，出現(xiàn)遠(yuǎn)隔器官的轉(zhuǎn)移。但是IFT20與Cath-B和D的協(xié)同作用并不是蛋白的典型通路〔21〕，其具體調(diào)節(jié)作用可能有中間橋接蛋白的作用，還需要更多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

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〔2014-07-17修回〕

(編輯苑云杰)