胃腺癌中Kruppel樣因子4、5和增殖細胞核抗原表達

韓笑魏琳琳1

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腫瘤科，遼寧錦州121001)

摘要〔〕目的應(yīng)用免疫組化方法檢測胃腺癌術(shù)后組織中Kruppel樣因子(KLF)4、5和增殖細胞核抗原(PCNA)的表達特征。方法51例經(jīng)病理醫(yī)師確診的胃腺癌術(shù)后組織作為觀察組，40例距腫物邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織作為對照組。兩組KLF4、KLF5和PCNA蛋白表達應(yīng)用免疫組化檢測。結(jié)果兩組KLF4、KLF5和PCNA表達差別有顯著性。觀察組中KLF4、KLF5和PCNA的陽性率均與浸潤深度相關(guān)，KLF4的陽性率與脈管內(nèi)瘤栓相關(guān)，KLF5的陽性率與腫瘤的最大徑、脈管瘤栓相關(guān)，PCNA的陽性率與腫瘤的最大徑相關(guān)。線性相關(guān)分析顯示觀察組中KLF5和PCNA具有正相關(guān)性，其他指標(biāo)間未見明顯相關(guān)性。結(jié)論胃腺癌術(shù)后組織中KLF4、KLF5和PCNA異常表達，三者異常表達對腫瘤性的進展過程起一定的作用。KLF5可能對細胞增殖有影響。

關(guān)鍵詞〔〕胃腺癌；Kruppel樣因子4；Kruppel樣因子5；增殖細胞核抗原；免疫組化

中圖分類號〔〕R735〔文獻標(biāo)識碼〕A〔

1遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科

第一作者：韓笑(1982-)，女，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤學(xué)研究。

胃腺癌的發(fā)生因素較多，不僅與飲食、幽門螺桿菌相關(guān)，還與調(diào)節(jié)腫瘤分化和增殖的基因相關(guān)〔1〕。Kruppel樣因子(KLF)4、5是KLF家族中重要的蛋白，其不僅對調(diào)節(jié)細胞轉(zhuǎn)錄有重要作用，還對細胞增殖有重要影響〔2，3〕。增殖細胞核抗原(PCNA)是臨床和病理標(biāo)記增殖中應(yīng)用的重要蛋白，表達于細胞核，可以反映細胞增殖的活性〔4，5〕。本研究關(guān)注胃腺癌中KLF4和KLF5的表達特征及二者對PCNA增殖指數(shù)的作用。

1資料與方法

1.1一般資料胃腺癌手術(shù)后留取的臨床資料和蠟塊組織作為觀察組，共51例，均重新制備切片并由病理醫(yī)生復(fù)審，納入符合WHO腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男30例，女21例；年齡51～84歲，平均(66.5±6.5)歲。高分化10例，中分化19例，低分化22例。40例距腫物邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織作為對照組。男20例，女20例；年齡53～80歲，平均(67.6±5.8)歲，兩組一般資料無明顯差異。

1.2KLF4、KLF5和PCNA表達的檢測KLF4、KLF5和PCNA抗體均為濃縮液，由病理技師按不同比例稀釋后進行預(yù)實驗，選擇最理想的濃度用在正式實驗中。免疫組化方法應(yīng)用SP法，操作嚴(yán)格按說明書進行，做好質(zhì)量控制。

1.3KLF4、KLF5和PCNA結(jié)果的判讀標(biāo)準(zhǔn)KLF4、KLF5和PCNA均以細胞核中染色棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞。選擇腫瘤細胞或上皮細胞密集的區(qū)域10個(400倍)，計數(shù)陽性細胞的百分率，取平均值。按通用標(biāo)準(zhǔn)計算，即<10%為陰性，以≥10%為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗或線性相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1兩組中KLF4、KLF5和PCNA陽性率比較觀察組與對照組KLF4〔10例(19.61%) vs 34例(85.00%)〕、KLF5〔36例(70.59%)vs1例(2.50%)〕和PCNA〔40例(78.43%)vs1例(2.5%)〕陽性率差別有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.000 1)。

2.2KLF4、KLF5和PCNA在觀察組不同分組中的比較觀察組中KLF4、KLF5和PCNA陽性率均與浸潤深度相關(guān)，KLF4陽性率與脈管瘤栓相關(guān)，KLF5陽性率與腫瘤最大徑、脈管內(nèi)瘤栓相關(guān)，PCNA陽性率與腫瘤最大徑相關(guān)。見表1。

表1KLF4、KLF5和PCNA陽性表達在觀察組不同分組中的比較〔n(%)〕

臨床特征nKLF4KLF5PCNA最大徑<5cm227(31.82)11(50.00)14(63.64)≥5cm293(10.34)25(86.21)26(89.66)χ2值3.65947.89915.0063P值0.05580.00490.0253浸潤深度未及漿膜248(33.33)12(50.00)15(62.50)漿膜及以外272(7.41)24(88.89)25(92.59)χ2值5.41799.25566.8016P值0.01990.00230.0091脈管內(nèi)瘤栓無3810(26.32)24(63.16)28(73.68)有130(0)12(92.31)12(92.31)χ2值4.25553.96441.9859P值0.03910.04650.1588分化程度高+中298(27.59)21(72.41)22(75.86)低222(9.09)15(68.18)18(81.82)χ2值2.71470.10790.2623P值0.09940.74250.6085

2.3觀察組中KLF4、KLF5和PCNA的相關(guān)性顯示KLF5和PCNA具有正相關(guān)性(r=0.47，P=0.046 0)，其他指標(biāo)間未見明顯相關(guān)性(P>0.05)。

3討論

胃腺癌最多見的肉眼形態(tài)是潰瘍型，也可形成實性結(jié)節(jié)或隆起型，切面?；野咨２∽冞M展時浸潤性生長明顯，可以在漿膜面周圍形成結(jié)節(jié)。腫瘤細胞體積大，核染色深，呈明顯的浸潤性生長〔6〕。KLF家族是存在于真核生物中的基因，可以對腫瘤細胞增生和惡性轉(zhuǎn)化起一定作用〔7，8〕。KLF4和KLF5是家族中主要被學(xué)者關(guān)注的蛋白，尤其是腫瘤形成的研究中〔9，10〕。張志平等〔11〕認(rèn)為KLF4可以通過激活或抑制目的基因來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，KLF4在人結(jié)腸腺癌中表達下調(diào)，在癌變組織中的表達也下降，但是KLF4在口腔上皮腫瘤和乳腺腫瘤中常表達過度，且彌漫分布，因此KLF4可能具有較強的組織特異性〔12〕。KLF5的作用可能與KLF4的表達不完全一致〔13〕，KLF5被學(xué)者認(rèn)為是促進腫瘤進展的基因，其主要表現(xiàn)為對腫瘤細胞增殖調(diào)節(jié)的過程中〔14，15〕。王文韜等〔16〕通過對結(jié)腸癌中KLF5的表達進行免疫組化的檢測，認(rèn)為腫瘤中KLF5表達升高，其具有原癌基因的作用，KLF5高表達可以有效促進腫瘤進展。同時作者也發(fā)現(xiàn)KLF5與CyclinD1、P53存在正相關(guān)性，認(rèn)為KLF5在發(fā)揮作用過程中，可以通過上調(diào)CyclinD1、P53的表達而有效促進腫瘤細胞增殖。

本實驗結(jié)果顯示胃腺癌術(shù)后組織中KLF4低表達、KLF5和PCNA高表達，提示三者異常表達是腫瘤性改變中的重要因素。Yoon等〔17〕研究顯示KLF4可以通過與細胞周期蛋白B1啟動子中的相關(guān)元件結(jié)合發(fā)揮抑制腫瘤的轉(zhuǎn)錄功能，進而對維持細胞周期的檢查點有一定影響。本文結(jié)果顯示KLF4、KLF5和PCNA三種蛋白可以參與腫瘤性的侵襲過程，使腫瘤細胞向周圍組織生長的能力增強，對周圍組織的破壞能力增強。KLF4可能參與腫瘤的脈管形成及侵襲脈管的過程中。KLF5是促進腫瘤生長的重要蛋白，具有原癌基因的作用，即KLF5高表達時腫瘤生長速度增加，腫瘤細胞的增生活躍，腫瘤進展加速。PCNA是直接影響腫瘤生長的重要蛋白。PCNA是標(biāo)記增殖指數(shù)的特異性蛋白。腫瘤失控性增生和分化障礙是形成腫瘤異型增殖的基礎(chǔ)，而PCNA可能參與上述過程中。本實驗未發(fā)現(xiàn)KLF4、KLF5和PCNA蛋白與分化程度的關(guān)系，但是KLF4可能與胃腺癌的分化程度可能會有關(guān)聯(lián)，后續(xù)研究可以增大樣本來觀察KLF4與分化的關(guān)系。本文提示KLF5和PCNA具有明顯的協(xié)同作用，也提示KLF5高表達時對PCNA陽性的細胞具有明確的促進作用，共同促進腫瘤的形成和進展進程〔18，19〕。

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〔2015-10-10修回〕

(編輯苑云杰)