補(bǔ)體因子HY402H基因多態(tài)性與老年動脈粥樣硬化性腦梗死患者發(fā)病的關(guān)系及其意義

俞敏覃鵬飛黃奕平李明

(深圳市龍崗中心醫(yī)院，廣東深圳518116)

摘要〔〕目的探討補(bǔ)體因子HY402H基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化腦梗死患者的發(fā)病關(guān)系及其臨床意義。方法選擇臨床確診的100例60歲以上的老年動脈粥樣硬化性腦梗死患者作為病例組、同年齡段健康人群100例作為健康組，測定兩組補(bǔ)體因子HY402H的多態(tài)性差異，并分析病例組不同基因型與頸動脈內(nèi)膜-中膜厚度(IMT)變化的關(guān)系。結(jié)果病例組谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)與健康組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病例組TC〔(4.84±1.06)mmol/L〕、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)〔(2.95±0.75)mmol/L〕顯著高于健康組〔(4.13±0.93)mmol/L、(2.64±0.82)mmol/L〕(P<0.05)。HY402H基因型為CC、TC的左側(cè)IMT分別為(1.10±0.42)mm、(1.08±0.37)mm、右側(cè)IMT分別為(1.11±0.35)mm、(1.08±0.40)mm均顯著高于基因型為TT的患者(P<0.05)。結(jié)論補(bǔ)體因子HY402H基因多態(tài)性表達(dá)與動脈粥樣硬化腦梗死患者的發(fā)病關(guān)系尚不明確，但是可能與患者的動脈粥樣硬化有一定的關(guān)系。

關(guān)鍵詞〔〕補(bǔ)體因子；HY402H基因多態(tài)性；動脈粥樣硬化腦梗死

中圖分類號〔〕R743〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

通訊作者：李明(1958-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事腦血管病研究。

第一作者：俞敏(1984-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腦血管病研究。

腦血管疾病的病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不十分清楚，但公認(rèn)為血脂代謝異常是該病的重要危險(xiǎn)因素，動脈粥樣硬化(AS)在該疾病的發(fā)病中起到重要作用。研究已證實(shí)〔1，2〕，血管內(nèi)發(fā)生AS的過程中補(bǔ)體系統(tǒng)起到關(guān)鍵性作用。一些補(bǔ)體成分，比如C3，C5a等，可作為AS發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，直接影響患者發(fā)生AS、冠心病及腦血管病的潛在概率。補(bǔ)體因子H(CFH)是人體內(nèi)十分重要的補(bǔ)體之一，是一種可溶性單鏈血清蛋白，它在人體內(nèi)的作用是與B因子或Bb競爭性結(jié)合C3b，阻礙C3轉(zhuǎn)換酶的生成。本研究探討補(bǔ)體因子HY420H基因多態(tài)性與AS性腦梗死的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料臨床確診的100例60歲以上的老年AS性腦梗死患者作為病例組、同年齡段健康人群100例作為健康組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①腦梗死的診斷參考1995年第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議制定的腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)；②經(jīng)過頭顱CT、MRI檢查確診；③接收了本研究的各項(xiàng)檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：心源性栓塞、腦出血、腦血管腫瘤、甲狀腺功能障礙、梗死后出血的患者。病例組男58例,女42例；年齡60～87歲，平均(73.2±7.8)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(23.5±3.1)kg/m2；收縮壓(114.6±8.2)mmHg，舒張壓(76.3±9.4)mmHg；冠心病史8例，高血壓史14例；糖尿病史5例，吸煙史(>5支/d)31例。健康組男62例，女38例；年齡60～85歲，平均(71.6±7.2)歲；BMI(22.8±3.0)kg/m2；收縮壓(118.3±9.5)mmHg，舒張壓(73.7±7.7)mmHg；吸煙史(>5支/d)28例。兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2生化指標(biāo)檢測方法抽取患者清晨空腹肘靜脈血8 ml，采用美國貝克曼庫爾特AU5800系列全自動生化分析儀檢測患者血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。

1.3頸動脈彩色多普勒檢測彩色多普勒超聲診斷儀型號為HPSONOS 5500，探頭頻率為10 MHz?；颊咂脚P于檢查床上，在涂抹耦合劑后采用超聲探頭分別檢測兩側(cè)頸總動脈(CCA)、頸總動脈分叉處(BIF)及頸內(nèi)動脈(ICA)顱外段。測量血管內(nèi)膜-中膜厚度(IMT)、管壁內(nèi)徑和粥樣硬化斑塊回聲強(qiáng)度。

1.4HY402H基因多態(tài)性抽取患者空腹肘靜脈血4 ml，3 000 r，離心10 min，棄去上清，收集沉淀細(xì)胞。采用福州邁新生物技術(shù)公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒，提取白細(xì)胞中的DNA，采用核酸分析儀檢測所得DNA濃度，貯存在-80℃冰箱中。由上海生物工程服務(wù)有限公司設(shè)計(jì)PCR序列，上游引物：5'-AGGACTACAGGTGACT-3'，下游引物：5'-CACAGGTCAAAGAGTACTCC-3'。各取1 μl的上下游引物，2 μl dNTP混合物，1 μl模版DNA。先采用95℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，循環(huán)30次，最后一次循環(huán)后，72℃延伸5 min〔3〕。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS9.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、單因素方差分析、SNK-q檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1兩組生化指標(biāo)比較病例組ALT、TG、BUN、Cr、HDL-C與健康組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病例組TC、LDL-C顯著高于健康組(P<0.05)。見表1。

2.2兩組HY402H基因多態(tài)性分布兩組TT、TC、CC基因型、等位基因分布頻率差異均不顯著(P>0.05)。見表2。

2.3病例組不同HY402H基因左右兩側(cè)的IMT檢測值比較HY402H基因型為CC、TC的左〔(1.10±0.42)mm、(1.08±0.37)mm〕、右側(cè)IMT〔(1.11±0.35)mm、(1.08±0.40)mm〕均顯著高于基因型為TT〔0.83±0.26)mm，(0.84±0.26)mm〕的患者(P<0.05)。

組別ALT(U/L)TG(mmol/L)TC(mmol/L)BUN(mmol/L)Cr(μmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)病例組28.6±17.31.62±0.804.84±1.064.85±2.1487.5±9.41.18±0.272.95±0.75健康組24.9±16.21.60±0.794.13±0.934.67±1.9585.3±8.91.21±0.322.64±0.82t/P值1.561/>0.050.178/>0.052.252/<0.050.622/>0.051.67/>0.050.717/>0.052.79/<0.05

表2兩組的HY402H基因多態(tài)性分布(n=100)

組別基因型〔n(%)〕TTTCCC等位基因頻率TC病例組47(47)43(43)10(10)0.5520.448健康組54(54)38(38)8(8)0.6040.396χ2值0.980.5190.244 0.512P值0.3220.4710.621 0.474

3討論

腦梗死的發(fā)病因素種類繁多，具體的致病機(jī)制至今仍不清楚，但AS既是腦梗死發(fā)病的重要病因，也在該疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用〔4，5〕，現(xiàn)在，越來越多的學(xué)者主張“慢性炎癥”學(xué)說及“自身免疫”學(xué)說是該疾病發(fā)病的可能機(jī)制，認(rèn)為炎癥和免疫機(jī)制發(fā)生異常引起該疾病的發(fā)生。補(bǔ)體系統(tǒng)參與了機(jī)體免疫系統(tǒng)的構(gòu)成，該系統(tǒng)活化后分泌的物質(zhì)共同參與機(jī)體特異性和非特異性免疫應(yīng)答過程，在機(jī)體發(fā)生感染、免疫功能異常時發(fā)揮治療性作用，它還具有監(jiān)督體內(nèi)免疫功能是否異常的作用，但是在某些特殊情況下，補(bǔ)體系統(tǒng)產(chǎn)生的物質(zhì)可對人體的正常組織造成損傷。CFH Y402H基因多態(tài)性是CFH常見多態(tài)性之一，位于第9外顯子。CFH Y402H基因突變多是1 277位置上的堿基發(fā)生C→T的改變，造成其轉(zhuǎn)錄的mRNA編碼的氨基酸序列發(fā)生明顯改變，發(fā)生正電荷的組氨酸代替了具有疏水性的酪氨酸，該變異存在于CFH發(fā)病過程中，其主要的突變位點(diǎn)在于肝素、C反應(yīng)蛋白(CRP)結(jié)合位點(diǎn)區(qū)域S-位點(diǎn)半胱氨酸富集蛋白(SCR7)〔6〕，減少患者體內(nèi)CFH與肝素或CRP的結(jié)合數(shù)量，明顯降低CFH對C3b的親和力〔7〕，從而發(fā)揮抑制補(bǔ)體系統(tǒng)活化的作用。所以，CFH Y402H基因多態(tài)性對CFH的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生很大的影響，CFH基因很可能是CI基因的一個重要候選基因。血漿LDL-C水平升高是AS的重要危險(xiǎn)因素，與相關(guān)研究結(jié)果一致〔8〕。CFH Y402H多態(tài)性是該基因序列的1 277位置發(fā)生基因突變，發(fā)生T→C突變，產(chǎn)生Tasl限制性酶切位點(diǎn)〔9〕。本文檢測病例組和健康組患者的TT、TC、CC基因型、等位基因的分布頻率，兩組間無明顯差異，可能因?yàn)楸狙芯繕颖玖啃。{入標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)。本文可見CFH基因Y402H變異的發(fā)生與IMT增厚有關(guān)，其可能機(jī)制為CFH氨基酸序列的改變造成CHF蛋白的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯的改變，使其無法有效與CRP、肝素等結(jié)合。CFH基因Y402H變異降低了它對局部組織的保護(hù)能力，一些因素可造成血管內(nèi)皮的損傷加重，最終導(dǎo)致AS發(fā)生〔10〕。但CFH Y402H基因多態(tài)性與AS和AS性疾病的關(guān)系還不確定。

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〔2014-07-19修回〕

(編輯苑云杰)