三七總皂苷注射液對腦出血模型大鼠抗氧化及白細(xì)胞介素-1、腫瘤細(xì)胞壞死因子-α的影響

閔靜陳軍芳敖明章1

(湖北職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北孝感432000)

摘要〔〕目的探討三七總皂苷(PNS)對腦出血(ICH)大鼠腦水腫、腦損傷的影響及機(jī)制。方法采用膠原酶法制備腦出血動物模型，將48只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、三七總皂苷低、高劑量組，每組12只；造模后 6 h腹腔注射藥物，每 12 h 1次，于造模后12、72 h測各組大鼠腦組織含水量，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量，腦組織白細(xì)胞介素(IL)-1；腫瘤壞死因子(TNF)-α水平。結(jié)果與模型組比較，72 h高劑量PNS組腦組織含水量減少，12 h時PNS兩組GSH-Px、SOD活性增高(P<0.05)，MDA含量變化不明顯，72 h時PNS組GSH-Px活性增高，與劑量變化呈線性關(guān)系，SOD活性增高，MDA含量下降，差異顯著(P<0.05)；12 h時PNS組TNF-α有下降(P<0.05)；72 h時高劑量組IL-1、TNF-α水平下降(P<0.05)。結(jié)論三七總皂苷明顯降低IL-1、TNF-α含量，增加腦組織抗氧化功能，從而減輕出血性腦損傷，對受損腦組織發(fā)揮保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞〔〕三七總皂苷；腦出血；抗氧化；白細(xì)胞介素(IL)-1；腫瘤壞死因子(TNF)-α

中圖分類號〔〕R285.5；R592〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

1華中科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院

第一作者：閔靜(1971-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事老年疾病研究。

研究表明腦出血(ICH)后血凝塊回縮，血腦脊液屏障的破壞，血腫周圍缺血，組織炎癥反應(yīng)等因素都可造成腦組織的水腫，從而引起功能障礙〔1〕。三七的主要成分三七總皂苷(PNS)具有活血化淤作用，本實(shí)驗(yàn)觀察PNS對ICH大鼠腦組織抗氧化及對白細(xì)胞介素(IL)-1、腫瘤壞死因子(TNF)-α的影響。

1材料與方法

1.1動物分組健康雄性 SD 大鼠，體量為230～280 g，清潔級，由湖北省動物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號：SCXK(鄂)2011～012；分組：大鼠隨機(jī)分為四組，假手術(shù)組、模型組、 PNS低劑量組(100 mg/kg)、PNS高劑量組(200 mg/kg)，每組12只，每組再分別觀察術(shù)后12、72 h 兩個時間點(diǎn)。PNS組術(shù)后 6 h腹腔注射藥物，假手術(shù)組及模型組灌胃等量生理鹽水，以后每隔 12 h 1次；各組飼養(yǎng)條件相同。

1.2藥品PNS粉針劑，每支含PNS 200 mg，批號0665，昆明制藥集團(tuán)股份有限公司；Ⅶ型膠原酶，美國Sigma公司產(chǎn)品；注射用尿激酶(批號03290，南京南大藥業(yè)有限責(zé)任公司)，配制成200 IU/L的溶液；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司)；白細(xì)胞介素(IL)-1、腫瘤細(xì)胞壞死因子(TNF)-α試劑盒，北京福瑞生物工程有限公司。

1.3儀器大鼠腦立體定位儀，微量注射儀購于北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司；電子天平(SARTOR2US，BP211D)，德國生產(chǎn)；GF-D200半自動生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司)，8021離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠)；723分光光度儀(上海精密儀器儀表有限公司)。

1.4腦出血模型參照 Rosenberg等〔2〕的方法，根據(jù)包新民大鼠腦立體定位圖譜〔3〕確定尾狀核的位置：術(shù)前禁食，自由飲水，大鼠經(jīng)戊巴比妥(0.1 ml/100 g)腹腔麻醉俯臥位固定于立體定位儀上，據(jù)圖譜調(diào)整立體定位儀于注射點(diǎn)，頭皮正中常規(guī)消毒后矢狀位切開約1.5 cm，暴露前囟點(diǎn)，用骨鉆鉆顱打孔(直徑約1 mm)，用微量進(jìn)樣器吸取膠原酶2 μl，迅速插入已鉆好孔內(nèi)，進(jìn)針5 mm，注射時間不少于15 min，留針10 min 后緩慢退針，鉆孔用骨蠟封閉，局部消毒后，縫合皮膚，假手術(shù)組注射2 μl的生理鹽水，手術(shù)過程同出血組。

1.5腦組織含水量測定分別于術(shù)后第12小時及第72小時，過量麻醉大鼠，快速斷頭取腦組織，用濾紙吸干腦表面液體和血跡，小塑料封口袋密閉全腦，電子天平稱濕重，然后放入 80 ℃烤箱中，72 h 后稱干重，計(jì)算腦含水量。

1.6GSH-Px活性、 SOD活性、MDA含量測定微凍硬后取出，置薄膜隔開的干冰上，分離出血側(cè)皮質(zhì)及基底節(jié)，4℃下用預(yù)冷的勻漿介質(zhì)制備成10 % 的腦勻漿置3 000 r/min離心15 min后，取上清液按試劑盒方法操作。

1.7IL-1、TNF-α測定取腦勻漿上清液，按放免試劑盒說明書，加入分離劑后充分混勻，放室溫20 min，離心，吸上清，生化分析儀上測放射性，以B/T計(jì)算NSB、S0結(jié)合百分率，以B/B0計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)及待測樣品結(jié)合百分率，并查出樣品值。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1PNS對腦水腫的影響12 h時PNS組腦出血后的腦組織含水量無明顯影響，72 h時PNS高劑量組腦出血后的腦組織含水量減少，與模型組比較有顯著差異(P<0.05)。見表1。

組別12h72h假手術(shù)組0.711±0.0230.702±0.009模型組0.772±0.0421)0.750±0.0051)低劑量PNS組0.766±0.0720.748±0.012高劑量PNS組0.756±0.0600.738±0.0222)

與假手術(shù)組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，下表同

2.2PNS對大鼠腦組織GSH-Px、SOD活性、MDA含量測定結(jié)果模型組與假手術(shù)組之間差異顯著(P<0.05)；與模型組比較，PNS組12 h時GSH-Px、SOD活性有明顯差異(P<0.05)，MDA含量無明顯差異；72 h時PNS組GSH-Px活性增高，尤其高劑量PNS組差異顯著(P<0.05)，與劑量變化呈線性關(guān)系，高劑量PNS組SOD活性增高(P<0.05)，低、高劑量PNS組MDA含量下降(P<0.05)。見表2。

組別GSH-Px(U/ml)12h72hSOD(U/ml)12h72hMDA(nmol/ml)12h72h假手術(shù)組59.49±5.9158.96±5.6444.12±3.4444.33±3.484.08±1.14.06±0.12模型組41.12±3.441)42.33±3.411)31.71±3.631)31.42±3.471)5.55±0.461)5.49±0.401)低劑量PNS組46.71±3.6347.71±3.632)34.97±5.1033.54±5.115.52±1.224.98±1.202)高劑量PNS組49.92±5.462)55.92±5.462)38.92±5.462)41.92±5.382)5.51±0.644.96±0.892)

2.3PNS對大鼠腦組織中IL-1，TNF-α含量的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠IL-1、TNF-α水平明顯增高(P<0.05)；與模型組比較12 h時PNS組IL-1無明顯差異，TNF-α有差異(P<0.05)；72 h時高劑量PNS組大鼠IL-1、TNF-α水平下降(P<0.05)，見表3。

組別IL-112h72hTNF-α12h72h假手術(shù)組2.54±0.232.43±0.091.74±0.091.65±0.08模型組3.28±0.421)3.50±0.051)2.50±0.051)2.44±0.061)低劑量PNS組3.16±0.723.22±0.122.42±0.232.41±0.12高劑量PNS組3.09±0.553.04±0.042)2.04±0.042)2.03±0.052)

3討論

目前研究證實(shí)，ICH繼發(fā)性神經(jīng)損傷對其發(fā)展起著非常重要作用，包括腦水腫、血-腦屏障破壞、血腫周圍甚至遠(yuǎn)隔區(qū)域缺血，自由基、炎性反應(yīng)參與腦出血的繼發(fā)性損傷〔4，5〕。PNS可能通過降低 NR1在病灶周圍、 皮層海馬神經(jīng)元的陽性表達(dá)，阻止Ca2+內(nèi)流，從而發(fā)揮對受損神經(jīng)元的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)提示PNS具有減少損傷時自由基生成，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，增加體內(nèi)自由基清除劑如GSH-Px、SOD，對顱腦損傷有一定保護(hù)作用。出血性腦損傷的炎性反應(yīng)，由白細(xì)胞黏附血管壁，血-腦屏障遭破壞，炎性細(xì)胞侵入腦實(shí)質(zhì)等組成。ICH時炎性因子表達(dá)增加，能增加腦水腫、血管壁通透性、炎細(xì)胞浸潤。IL-1介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，TNF-α能促進(jìn)中性粒細(xì)胞浸潤并釋放蛋白水解酶，與神經(jīng)元損害密切相關(guān)〔6〕。本實(shí)驗(yàn)72 h時高劑量PNS組IL-1、TNF-α水平明顯下降，與模型組有顯著差異，說明其對腦組織發(fā)揮保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)說明PNS具有減輕出血性腦損傷作用，其中抑制IL-1、TNF-α的生成，減少自由基生成，可能是其發(fā)揮效果的重要機(jī)制。

4參考文獻(xiàn)

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6李銀，李新軍.高血壓腦出血患者血腫沖洗液IL-1、IL-6及TNF-α含量的動態(tài)變化及意義〔J〕.中國急救醫(yī)學(xué)，2008；28(2)：35-8.

〔2014-05-17修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

《中國免疫學(xué)雜志》征稿、征訂啟事

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