口腔鱗癌術(shù)后組織中細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白20、Furin和上皮型黏附素的表達(dá)及意義

陳亞瓊

(青海紅十字醫(yī)院口腔科，青海西寧810000)

摘要〔〕目的觀察口腔鱗癌術(shù)后組織中細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20、弗林蛋白酶(Furin)和上皮型黏附素(E-cadherin)的表達(dá)特征，分析其臨床意義。方法112例口腔鱗癌術(shù)后組織作為研究組，以60例距腫瘤邊緣>3 cm的正常牙齦黏膜組織作為對(duì)照組，采用免疫組化SP法檢測(cè)兩組中IFT20、Furin和E-cadherin的表達(dá)特征。結(jié)果兩組中IFT20、Furin和E-cadherin表達(dá)的陽性率差異均顯著。研究組中IFT20、Furin和E-cadherin表達(dá)的陽性率與腫瘤的最大徑、分化程度、脈管浸潤及是否累犯骨組織密切相關(guān)。相關(guān)性分析顯示研究組中IFT20和Furin均與E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。結(jié)論口腔鱗癌術(shù)后組織中IFT20、Furin和E-cadherin異常表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。IFT20和Furin在促進(jìn)腫瘤形成過程中可能與對(duì)E-cadherin的調(diào)節(jié)有關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕口腔鱗癌；細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20；Furin；上皮型黏附素(E-cadherin)

中圖分類號(hào)〔〕R739〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

第一作者：陳亞瓊(1982-)，女，主治醫(yī)師，主要從事口腔疾病研究。

口腔腫瘤中最常見的是鱗癌，在病變進(jìn)展過程中多種蛋白表達(dá)異常。細(xì)胞纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20在機(jī)體中少量存在，具有雙向功能，近來研究顯示IFT20高表達(dá)時(shí)可以將信息從高爾基細(xì)胞器傳送到細(xì)胞原纖毛的基底部，并與相關(guān)蛋白結(jié)合，使細(xì)胞原纖毛增長，細(xì)胞周期進(jìn)程加速，細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)〔1,2〕。弗林蛋白酶(Furin)是一種常見的前體蛋白加工酶，其底物種類較多，近來學(xué)者研究認(rèn)為Furin的異常表達(dá)可能對(duì)增殖和蛋白的黏附起一定作用〔3,4〕。上皮型黏附素(E-cadherin)是最常見的黏附蛋白，正常情況下在細(xì)胞中高表達(dá)，使細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞不易脫離原發(fā)灶，當(dāng)其表達(dá)下調(diào)或丟失時(shí)，認(rèn)為與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)〔5,6〕。本文關(guān)注口腔鱗癌術(shù)后組織中IFT20、Furin和E-cadherin的表達(dá)，分析其相關(guān)性及臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料2010年1月至2013年7月我院確診的口腔鱗癌術(shù)后組織112例作為研究組，均符合鱗狀細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)主治醫(yī)師確診。其中男60例，女52例；年齡54～87歲，平均64.8歲。高分化59例，中分化15例，低分化38例。收集上述患者中距腫瘤邊緣>3 cm的正常牙齦黏膜組織(鱗狀上皮)60例作為對(duì)照組，其中男30例，女30例；年齡55～86歲，平均63.4歲。兩組常規(guī)資料差異無顯著性。

1.2IFT20、Furin和E-cadherin蛋白表達(dá)的檢測(cè)IFT20、Furin和E-cadherin蛋白的檢測(cè)均應(yīng)用免疫組化SP法。IFT20、Furin和E-cadherin均為濃縮液，先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最理想的配比濃度。正式實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化SP法，均由主管技師完成，嚴(yán)格質(zhì)量控制，減少人為誤差。

1.3IFT20、Furin和E-cadherin蛋白檢測(cè)結(jié)果的判定方法IFT20和Furin的陽性表達(dá)部位均為細(xì)胞質(zhì)，E-cadherin的陽性表達(dá)部位是細(xì)胞膜，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。每張切片挑選上皮細(xì)胞密集的區(qū)域進(jìn)行計(jì)量，共選擇10個(gè)400倍視野，取其平均值作為最終的陽性率。以陽性細(xì)胞≥5%定為陽性，<5%定為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及線性相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1兩組中IFT20、Furin和E-cadherin蛋白表達(dá)陽性率的比較兩組中IFT20、Furin和E-cadherin表達(dá)的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.000 1)。見表1。

表1　兩組中IFT20、Furin和E-cadherin

2.2IFT20、Furin和E-cadherin在研究組不同臨床特征中表達(dá)的比較研究組中IFT20、Furin和E-cadherin表達(dá)的陽性率與腫瘤的最大徑、分化程度、脈管浸潤及是否累犯骨組織密切相關(guān)。見表2。

2.3研究組中IFT20、Furin和E-cadherin的相關(guān)性分析研究組中IFT20和E-cadherin的表達(dá)(r=-0.47,P=0.029 1)、Furin和E-cadherin的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.48,P=0.036 5)。

表2　IFT20、Furin和E-cadherin在研究組不同

3討論

口腔鱗癌臨床較為常見，其臨床診斷常較為明確，與其他部位相比，口腔檢查更容易且不需要特殊設(shè)備。口腔腫瘤早期即可以形成癥狀，病人能感覺到口腔內(nèi)較小的病變而就診，但是仍有27%～50%的患者就診時(shí)已到晚期〔7,8〕。這些病人多為老年人，且體質(zhì)較弱，部分患者戴有義齒，對(duì)不適感和潰瘍已習(xí)慣而延誤診治。病變進(jìn)展中常伴有基因和蛋白的表達(dá)異?！?〕。IFT是由分子馬達(dá)和微粒蛋白組成的，對(duì)纖毛和鞭毛的運(yùn)動(dòng)有重要促進(jìn)作用。IFT還可能具有感覺纖毛的功能。IFT20是家族中常見的一種基因，由1 060個(gè)堿基對(duì)組成，開放編碼區(qū)的范圍是261～734，編碼158個(gè)氨基酸。IFT20蛋白表達(dá)的部位是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)高爾基細(xì)胞器周圍，與分裂過程中的中心體形成相關(guān)，可以對(duì)信息傳遞起重要作用〔10〕。有研究認(rèn)為IFT20與卵巢癌的進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)〔11〕。Furin可以調(diào)節(jié)腫瘤的生物學(xué)功能，對(duì)多肽的合成和分泌、細(xì)胞膜相關(guān)受體的成熟過程、相關(guān)級(jí)聯(lián)蛋白的激活有重要作用〔12,13〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為Furin可以調(diào)節(jié)腫瘤進(jìn)展過程中的黏附作用，促進(jìn)腫瘤的遷移〔14,15〕。E-caderin的分子量為120 kD，由723～748個(gè)氨基酸組成，目前研究認(rèn)為其是維持正常上皮完整性和極性的跨膜糖蛋白〔16,17〕，當(dāng)E-caderin表達(dá)降低或其他因素?fù)p害E-cadherin的黏附功能時(shí)，腫瘤細(xì)胞就易于脫離并逃離原發(fā)灶發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移〔18〕。

本研究提示IFT20、Furin和E-cadherin三種蛋白異常表達(dá)是促進(jìn)鱗癌進(jìn)展的重要因素。此時(shí)IFT20、Furin和E-cadherin的異常表達(dá)可以引起腫瘤細(xì)胞的繁殖，使腫瘤細(xì)胞的生長旺盛，失控性增生明顯，腫瘤的體積增大〔19,20〕。三種蛋白異常表達(dá)是引起腫瘤進(jìn)展、分化障礙及脈管播散的重要的因素。IFT20、Furin對(duì)以E-cadherin為主的黏附蛋白的作用有重要調(diào)節(jié)功能。即當(dāng)IFT20、Furin表達(dá)升高時(shí)，引起E-cadherin的表達(dá)下降，使腫瘤細(xì)胞間的黏附作用減弱，細(xì)胞間較為松散，使其更易于離開鱗狀上皮的原發(fā)部位，形成浸潤性生長或脈管播散。當(dāng)E-cadherin表達(dá)下調(diào)后可以表現(xiàn)為雜和性丟失，符合傳統(tǒng)的腫瘤調(diào)節(jié)的標(biāo)準(zhǔn)，也可以啟動(dòng)相關(guān)的連環(huán)蛋白異常表達(dá)，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展〔21,22〕。也有學(xué)者認(rèn)為IFT20和Furin均具有促進(jìn)增殖的作用〔23,24〕，但是二者的具體調(diào)節(jié)機(jī)制可能是復(fù)雜的，有待更多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

4參考文獻(xiàn)

1Evans RJ,Schwarz N,Nagel-wolfrum K,etal.The retinitis pigmentosaproteinRP2 links pericentriolar vesicle transport between the Golgi and the primary cilium〔J〕.Hum Mol Genet,2010；19(7):1358-67.

2Clement CA,Kristensen SG,Mollgard K,etal.The primary cilium coordinates early cardiogenesis and hedgehog signaling in cardiomyocyte differentiation〔J〕.J Cell Sci,2009;122(17):3070-82.

3Levesque C,Fugere M,Kwiatkowska A,etal.The Multi-Leu peptide inhibitor discriminates between PACE4 and furin and exhibits antiproliferative effects on prostate cancer cells〔J〕.J Med Chem,2012;55(23):10501-11.

4Ma YC,Shi C,Zhang YN,etal.The tyrosine kinase c-Src directly mediates growth factor-induced Notch-1 and furin interaction and Notch-1 activation in pancreatic cancer cells〔J〕.PLoS One,2012;7(3):e33414.

5Xu HT,Li QC,Zhang YX,etal.Connexin 43 recruits E-cadherin expression and inhibits the malignant behaviour of lung cancer cells〔J〕.Folia Histochem Cytobiol,2008;46(3):315-21.

6趙洋,余光銀.E-鈣粘蛋白和層粘連蛋白受體表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2004;18(2):102-6.

7謝思明,沈麗佳,殷操,等.抑癌基因PTEN與PIP3、細(xì)胞周期蛋白D1在口腔鱗癌中的表達(dá)及其相關(guān)性分析〔J〕.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志,2006;41(7):407-9.

8 劉健,浦劍虹,葛自力,等.E-cad、CD44V6在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性研究〔J〕.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2005;21(1):67-9.

9魏秀峰,高文信,周傳香,等.PTEN對(duì)鱗癌細(xì)胞的抑制作用及其在口腔白斑和鱗癌中的表達(dá)〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2009;35(5):821-3.

10Grinchuk OV,Motakis E,Kuznetsov VA.Complex sense-antisense architecture of TNFAIP1/POLDIP2 on 17q11.2 represents a novel transcriptional structural-functional gene module involved in breast cancer progression〔J〕.BMC Genomics,2010;11(1):S1-9.

11牛娜,劉乾,程麗.157例卵巢腫瘤中IFT20的表達(dá)及意義〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2014;30(7):736-8.

12Senzer N,Barve M,Kuhn J,etal.Phase I trial of “bi-shRNAi(furin)/GMCSF DNA/autologous tumor cell” vaccine(FANG)in advanced cancer〔J〕.Mol Ther,2012;20(3):679-86.

13Arsenault D,Lucien F,Dubois CM.Hypoxia enhances cancer cell invasion through relocalization of the proprotein convertase furinfrom the trans-Golgi network to the cell surface〔J〕.J Cell Physiol,2012;227(2):789-800.

14Kumar V,Behera R,Lohite K,etal.p38 kinase is crucial for osteopontin-induced furin expression that supports cervical cancerprogression〔J〕.Cancer Res,2010;70(24):10381-91.

15Dragulescu-Andrasi A,Liang G,Rao J.In vivo bioluminescence imaging of furin activity in breast cancer cells using bioluminogenic substrates〔J〕.Bioconjug Chem,2009;20(8):1660-6.

16Wu J,Zhang JR,Qin J.Clinical significance of methylation of E-cadherin and p14ARF gene promoters in skin squamous cell carcinoma tissues〔J〕.Int J Clin Exp Med,2014;7(7):1808-12.

17Balasundaram P,Singh MK,Dinda AK,etal.Study of beta-catenin,E-cadherin and vimentin in oral squamous cell carcinoma with and without lymph node metastases〔J〕.Diagn Pathol,2014;9(1):145.

18Zhai J,Wang Y,Yang F,etal.DRP-1,ezrin and E-cadherin expression and the association with esophageal squamous cellcarcinoma〔J〕.Oncol Lett,2014;8(1):133-8.

19Lapierre M,Siegfried G,Scamuffa N,etal.Opposing function of the proprotein convertases furin and PACE4 on breast cancer cells' malignant phenotypes:role of tissue inhibitors of metalloproteinase-1〔J〕.Cancer Res,2007;67(19):9030-4.

20Vanjaka-Rogosic L,Puizina-Ivic N,Miric L,etal.Matrix metalloproteinases and E-cadherin immunoreactivity in different basal cell carcinomahistological types〔J〕.Acta Histochem,2014;116(5):688-93.

21Bhagat R,Premalata CS,Shilpa V,etal.Altered expression of β-catenin,E-cadherin and E-cadherin promoter methylation in epithelial ovarian carcinoma〔J〕.Tumour Biol,2013;34(4):2459-68.

22Zhai J,Yang X,Zhang Y,etal.Reduced expression levels of the death-associated protein kinase and E-cadherin are correlated with the development of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Exp Ther Med,2013;5(3):972-6.

23姜容,劉貴勇,陳鵬,等.IFT20蛋白在不同腫瘤組織表達(dá)的研究〔J〕.中國腫瘤臨床,2012;39(12):841-2.

24Coppola JM,Bhojani MS,Ross BD,etal.A small-molecule furin inhibitor inhibits cancer cell motility and invasiveness〔J〕.Neoplasia,2008;10(4):363-70.

〔2014-03-19修回〕

(編輯苑云杰)