CD133與VEGF蛋白在卵巢癌中的表達(dá)及意義

孫志強(qiáng) 任洪波 段愛紅 申自瑋 馬 英 郭 燕

目的運(yùn)用免疫組化法檢測CD133和VEGF蛋白在卵巢癌中的表達(dá)，并分析它們與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性及生物學(xué)意義。方法采用免疫組化法檢測60例上皮性卵巢癌組織中CDl33及VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果（1）隨卵巢癌分化程度降低，CD133及VEGF的陽性表達(dá)率增高，三組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。（2）Spearman相關(guān)性分析顯示CD133表達(dá)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0．663，P＜0．05）。結(jié)論CDl33及VEGF的表達(dá)與上皮性卵巢癌的惡性程度有相關(guān)性，且兩因子間呈正相關(guān)。

卵巢癌；VEGF；CDl33；免疫組織化學(xué)

卵巢癌是女性的常見惡性腫瘤之一，起病隱匿，多數(shù)患者至晚期確診，近年來隨著腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)滿意度不斷提高及術(shù)后輔助治療的不斷提高、完善，五年生存率有所提高，但仍徘徊在30%～50%。本課題通過免疫組織化學(xué)法檢測上皮性卵巢癌組織中CDl33與VEGF（vascular endothefial growth factor，血管內(nèi)皮生長因子）蛋白的表達(dá)，探討兩者在上皮性卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的生物作用及應(yīng)用價值，進(jìn)一步探索兩者與卵巢癌的關(guān)系，為卵巢癌的早期診斷、治療及預(yù)后提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2007年1月～2012年12月在河北省邯鄲市中心醫(yī)院婦科就診的上皮性卵巢癌患者共60例。60例患者行卵巢癌全面分期手術(shù)或腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，且患者術(shù)后均經(jīng)病理確診，其臨床病歷資料具有完整性?；颊吣挲g30～72歲，漿液性腺癌22例，黏液性腺癌21例，宮內(nèi)膜樣癌17例。按組織學(xué)分級G1、G2、G3分別為19例、21例、20例。本研究的60例患者在術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療及生物治療。

1.2 方法

標(biāo)本常規(guī)用10%福爾馬林液固定，石蠟法包埋，切片厚度4 μm，然后用免疫組化法染色?？谷薈Dl33多克隆抗體購自上?；蛴邢薰荆üぷ鳚舛?：350稀釋，濃縮型），抗人VEGF單克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司（工作濃度1：150稀釋，濃縮型）。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

胞膜和胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒為CDl33蛋白陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。于400×高倍鏡下每張切片隨機(jī)選取10個視野，每個視野中計數(shù)100個癌細(xì)胞中的陽性個數(shù)，并計算平均陽性細(xì)胞的百分比。陽性細(xì)胞＞10%定為陽性，陽性細(xì)胞＜10%或者癌細(xì)胞全不著色定為陰性。

VEGF染色后陽性表現(xiàn)為境界清晰的棕黃色或棕褐色顆粒，以細(xì)胞漿內(nèi)存在為主。以胞核、胞漿均無著色或單純核膜著色，無胞漿著色定為陰性；核膜、胞漿同時著色則定為陽性。計分標(biāo)準(zhǔn)：在400×光鏡下隨機(jī)選取10個高倍視野，計算平均陽性細(xì)胞百分率，結(jié)合染色強(qiáng)度來進(jìn)行評分。最終得分為兩者乘積：0分陰性“－”，1～6分為陽性“＋”。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，Spearman檢驗(yàn)用于相關(guān)性分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD133、VEGF在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

胞膜和胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒是CDl33蛋白染色陽性表現(xiàn)，CD133在上皮性卵巢癌的表達(dá)情況見圖1，在高分化（G1）、中分化（G2）、低分化（G3）組織中分別為31.6%，57.1%，85.0%，三者相比差異具有有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為VEGF染色陽性表現(xiàn)，VEGF在上皮性卵巢癌的表達(dá)情況見圖2，在高分化（G1）、中分化（G2）、低分化（G3）組織中分別為47.4%、66.7%、90.0%，三者相比差異具有有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 上皮性卵巢癌組織中CD133與VEGF表達(dá)的相關(guān)性

上皮性卵巢癌組織中CD133和VEGF共表達(dá)25例，VEGF表達(dá)陽性而CD133陰性表達(dá)者16例，CD133陽性表達(dá)而VEGF陰性表達(dá)者10例；計數(shù)資料的相關(guān)分析結(jié)果顯示，在卵巢上皮性癌中CD133與VEGF的表達(dá)具有相關(guān)性（r＝0.663， P＝0.04）。

圖1 CD133在卵巢癌中的表達(dá)（400×）；圖2 VEGF在卵巢癌中的表達(dá)（400×）

3 討論

CDl33是由865個氨基酸組成的分子量為120 kDa的跨膜糖蛋白，在內(nèi)皮祖細(xì)胞，間質(zhì)干細(xì)胞［1］等細(xì)胞中均有特異表達(dá)［2］。研究表明，CD133在細(xì)胞膜的形成及生理作用中發(fā)揮重要作用。后來的研究發(fā)現(xiàn)正常的非淋巴造血組織中也能檢測到CDl33蛋白的表達(dá)［3］。CDl33蛋白目前主要用于腫瘤干細(xì)胞的研究［4］。這類陽性細(xì)胞僅占腫瘤細(xì)胞的極少數(shù)，卻具有自我增殖、自我更新、自我分化的能力。CDl33陽性細(xì)胞在大量動物實(shí)驗(yàn)也被證實(shí)具有強(qiáng)烈的致瘤性，而CDl33陰性腫瘤細(xì)胞大多不具有致瘤性。CDl33陽性細(xì)胞表達(dá)與多種腫瘤干細(xì)胞（Cancer Stem Cells，CSC）具有相關(guān)性，因此我們認(rèn)為CDl33陽性細(xì)胞具有腫瘤的惡性表型和浸潤能力［5］，具有腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性。

眾所周知，任何腫瘤組織的生長、侵潤及轉(zhuǎn)移，均需要具備適合腫瘤干細(xì)胞生長的微環(huán)境，腫瘤微環(huán)境中最重要的因素之一是新生血管，缺乏新生血管甚至可直接抑制腫瘤干細(xì)胞更新。腫瘤的血管生成是極其復(fù)雜的過程，目前發(fā)現(xiàn)，VEGF是高度特異性促血管生長因子之一，通過影響腫瘤血管生成途徑促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展［6］。腫瘤血管目前被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生的重要表現(xiàn)并作為腫瘤生態(tài)系統(tǒng)中重要因素參與并影響腫瘤的生物學(xué)行為［7］。

研究認(rèn)為，腫瘤干細(xì)胞與腫瘤血管微環(huán)境之間作用是雙向的，它們之間的作用互相促進(jìn)，互為因果［8］。神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞生長的培養(yǎng)基中，CD133＋腫瘤干細(xì)胞的VEGF水平高于CD133－；同時CD133＋神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞移植到裸鼠后形成的腫瘤具有高表達(dá)VEGF的表現(xiàn)，而CD133－干細(xì)胞同樣移植到裸鼠后則幾乎不能形成腫瘤［9］。本研究結(jié)果顯示CD133蛋白表達(dá)與VEGF表達(dá)在上皮性卵巢癌組織中具有密切相關(guān)性，CD133陽性蛋白在上皮性卵巢癌細(xì)胞表達(dá)高于VEGF，這充分提示了CD133＋上皮性卵巢癌細(xì)胞可能通過高表達(dá)VEGF而刺激轉(zhuǎn)移病灶，促使新生血管形成，因此為適合繼發(fā)病灶生長創(chuàng)造了一個腫瘤微環(huán)境。隨著腫瘤組織惡性程度的增高，兩者水平也隨著升高，也說明該類患者進(jìn)展更加迅速，更易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

綜上，CD133與VEGF在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)具有相關(guān)性，通過高表達(dá)VEGF，CD133＋上皮性卵巢癌干細(xì)胞可能促進(jìn)上皮性卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移，從而使卵巢癌患者的術(shù)后生存受到影響。總之，聯(lián)合檢測CD133與VEGF可用于臨床預(yù)測上皮性卵巢癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移風(fēng)險，可作為判斷上皮性卵巢癌惡性程度、侵襲及預(yù)后的重要指標(biāo)，但仍需進(jìn)一步研究加以證實(shí)CD133與VEGF的相互作用及其機(jī)制。

表1 不同分化程度卵巢癌組織中CD133和VEGF表達(dá)情況

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Expression and Significance of CD133 and VEGF Protein in Ovarian Cancer

SUN Zhiqiang REN Hongbo DUAN Aihong SHEN Ziwei MA Ying GUO Yan Central Hospital of Handan City，Department of Neurosurgery，Handan 056001，China

ObjectiveUsing immunohistochemical methods to detect CD133 and VEGF protein expression in ovarian cancer，and analyzing their correlation with the clinical pathological parameters and biological significance．MethodsUsing immunohistochemical method to detect CDl33 in 60 cases of epithelial ovarian cancer tissue and the expression of VEGF．Results（1）With the decreasing of ovarian cancer differentiation degree， the positive expression rate of CD133 and VEGF was obviously increased， compared between the three groups，the difference was statistically significant（P＜0．05）． （2）The Spearman correlation analysis showed positive correlation between the expression of VEGF and expression of CD133（r＝0．663，P＜0．05）．ConclusionCDl33 and VEGF expression correlated with the malignant degree and epithelial ovarian cancer，and the two factors were positively correlated．

Ovarian cancer，VEGF，CDl33，Immunohistochemistry

R737．31

B

1674-9316（2015）27-0171-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2015．27．127

056001 河北省邯鄲市中心醫(yī)院神經(jīng)外三科