王 斌 張騰霄 李新晶 任清云 宋相周 唐志國（.綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院；.綏化市食品藥品檢驗(yàn)檢測所 黑龍江綏化 506）

不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類物質(zhì)比較分析

王 斌1張騰霄1李新晶1任清云1宋相周2唐志國2
（1.綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院；2.綏化市食品藥品檢驗(yàn)檢測所 黑龍江綏化 152061）

為建立柴胡多指標(biāo)的質(zhì)量評價(jià)體系，比較分析了不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類成分含量。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用亞硝酸鈉－硝酸鋁比色法，在520nm處測定吸光度。結(jié)果顯示：不同產(chǎn)地野生與栽培柴胡中，含量最高的是黑龍江栽培，依次是山西野生、吉林野生、河北栽培。不同部位野生與栽培柴胡中黃酮含量最高的是柴胡花，依次是柴胡葉、柴胡莖、柴胡根。得出結(jié)論：不同產(chǎn)地的野生與栽培柴胡中黃酮類物質(zhì)含量差別不是很大。不同部位柴胡中黃酮類物質(zhì)含量差別很大，柴胡花中黃酮含量最高，為柴胡的擴(kuò)大藥源提供了理論依據(jù)。柴胡的質(zhì)量評價(jià)還應(yīng)結(jié)合其他主要有效成分進(jìn)行綜合評價(jià)。

柴胡；黃酮；不同產(chǎn)地；不同部位

柴胡是我國常用中藥，2010版《藥典》收錄的柴胡正品為柴胡（Bupleurum chinenseDC）和狹葉柴胡（B.scorzonerifolium Willd）的干燥根，前者習(xí)稱為北柴胡，后者稱為南柴胡。柴胡性味苦甘，入肝膽經(jīng)，具有和解退熱、疏肝解郁、升舉陽氣的功能?，F(xiàn)代藥理表明柴胡具有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳、抗菌、保肝利膽、抗炎、抗病毒、降血脂及抗消化道潰瘍等藥理活性[1]。隨著中藥現(xiàn)代化的發(fā)展，柴胡需求量不斷增加，野生資源的數(shù)量已不能滿足需求，人工栽培品種已成為商品柴胡的主要來源[2]。近年來發(fā)現(xiàn)，黃酮類成分也是柴胡中的重要活性成分，具有利膽、抑菌、殺菌等作用。但有關(guān)柴胡中黃酮類化合物的研究報(bào)道相對較少。本文通過研究不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類成分含量，為建立柴胡多指標(biāo)的質(zhì)量評價(jià)體系提供理論依據(jù)。

一、材料與方法

（一）材料。

1.柴胡樣品：所有樣品經(jīng)綏化學(xué)院制藥工程教研室鑒定為狹葉柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd）的根，樣品均采于2013年，樣品編號及相應(yīng)產(chǎn)地見表1、表2：

表1 樣品編號及產(chǎn)地

2.儀器：FW100高速萬能粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；分析天平FA2014，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；101-2A型數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海錦屏儀器儀表有限公司；DK-98-IIA電熱恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；KQ-50B型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；752紫外可見分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司。

表2 樣品編號及不同部位

3.試劑。蘆丁對照品（購于中國食品藥品鑒定研究院）、乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、蒸餾水，以上試劑均為分析純。

（二）實(shí)驗(yàn)方法。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

（1）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，加60％乙醇20mL于水浴60℃溶解，配制成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）線性關(guān)系考察。精密吸取0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、1.8mL、2.0mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液至25mL容量瓶中，加入0.7mL5％NaNO2，5分鐘后再加入0.7mL10％Al（NO3）3，放置10分鐘，加入5.0mL 4％的NaOH，混勻后用30％乙醇定容置刻度，于38℃水浴中顯色15分鐘，以試劑空白對照，在510nm處測定吸光度。以蘆丁質(zhì)量（mg）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.樣品的測定。

（1）樣品溶液的制備。樣品于55℃干燥5h，于粉碎機(jī)中粉碎，過40目篩，置干燥器中備用。稱取樣品粉末2.0g，置于100mL錐形瓶中，加入65％乙醇30mL，用封口膜密封，浸泡24h，超聲提取，提取溫度50℃，提取時(shí)間10分鐘，超聲功率60％，提取完畢，過濾，取上清液。第二次提取加入65％乙醇15mL，提取條件不變，合并兩次上清液，65％乙醇定容至35mL，備用。

（2）樣品的測定與結(jié)果。精密吸取1-4號樣品溶液5mL，按（二）中1項(xiàng)條件下測定，平行3次，取平均值代入公式計(jì)算總黃酮的含量。計(jì)算公式如公式一：百分含量/％＝｛[（X× 7）÷1000]÷M｝×100％，精密吸取5-8號樣品溶液2.5mL，按（二）中1項(xiàng)條件下測定，平行3次測定，取平均值代入公式計(jì)算總黃酮的含量。計(jì)算公式如公式二：百分含量/％＝｛[ （X×14）÷1000]÷M｝×100％，公式中，X為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算換算為蘆丁的mg數(shù)；M為制備樣品測定液時(shí)稱取的柴胡干燥粉末的重量，單位為g。

（三）方法學(xué)實(shí)驗(yàn)。

1.精密度實(shí)驗(yàn)。精密稱取1號樣品，分別按（二）中1和2項(xiàng)制備供試品溶液，按樣品測定項(xiàng)操作連續(xù)測吸光度各5次，計(jì)算黃酮含量。

2.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。精密稱取樣品分別按（二）中1和2項(xiàng)制備供試品溶液，60min內(nèi)每隔10min測1次吸光度。

3.重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。精密稱取樣品，分別按（二）中1和2項(xiàng)制備供試品溶液各5份，并計(jì)算含量。

4.加樣回收率實(shí)驗(yàn)。以重復(fù)實(shí)驗(yàn)所得的總黃酮平均含量為樣品含量，精密稱取4號樣品5份，加入等量對照品溶液，按樣品測定項(xiàng)操作并計(jì)算含量。

二、結(jié)果與討論

（一）精密度及加樣回收率。精密度結(jié)果表明，精密度良好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分為2.43％。加樣回收率為99.99％，RSD為1.17％。

表3 黃酮含量的精密度實(shí)驗(yàn)

表4 黃酮含量的回收率實(shí)驗(yàn)

（二）穩(wěn)定性及重復(fù)性。穩(wěn)定性結(jié)果表明在60min內(nèi)，吸光度均基本穩(wěn)定。重復(fù)性良好，RSD為1.13％。重復(fù)性及穩(wěn)定性結(jié)果說明，該方法重復(fù)性好且測定的數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

（三）不同產(chǎn)地及不同部位柴胡根中黃酮的含量。經(jīng)回歸分析，柴胡黃酮類物質(zhì)含量的回歸方程：y=0.3798x+0.0415，R2=0.9948，表明蘆丁在0.8～2.0mg呈良好的線性關(guān)系。從圖1中可以看出：不同產(chǎn)地野生與栽培柴胡中黃酮類物質(zhì)含量差別不是很大，其中，黃酮含量最高的是4號樣品（黑龍江栽培）含量為0.333％，依次是1號樣品（山西野生）含量為0.276％，2號樣品（吉林野生）含量為0.248％，3號樣品（河北栽培）含量為0.181％。不同部位柴胡中黃酮類物質(zhì)含量差別很大，含量最高的是8號樣品（柴胡花中）含量為1.745％，依次是7號樣品（柴胡葉中）含量為1.170％，6號樣品（柴胡莖中）含量為0.763％，5號樣品（柴胡根中）含量為0.253％。

（四）討論。野生的柴胡中黃酮含量并不一定比栽培柴胡中黃酮含量高，本研究中黃酮含量最高的是栽培品種，黃酮含量最低的也是栽培品種，因此中藥常常強(qiáng)調(diào)其道地性。不同部位柴胡中黃酮類物質(zhì)含量差別很大，黃酮含量最高的是柴胡花，依次是柴胡葉、柴胡莖、柴胡根中。2010版藥典中收錄柴胡的入藥部位是根，實(shí)驗(yàn)表明柴胡莖中及花中黃酮含量豐富，為柴胡的臨床應(yīng)用擴(kuò)大藥源提供了理論依據(jù)。

圖1 不同產(chǎn)地及不同部位柴胡根中黃酮的含量

本研究的不足之處是沒有建立同時(shí)以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、黃酮、糖類物質(zhì)及其他有效成分含量的多指標(biāo)體系來評價(jià)柴胡的質(zhì)量。王斌等[3]對7個(gè)不同產(chǎn)地來源的柴胡中糖類物質(zhì)含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，同種柴胡不同產(chǎn)地或不同的生長環(huán)境，其糖類物質(zhì)含量差別較大；同種產(chǎn)地野生品種和栽培品種總糖和多糖均存在一定的差異。曹海祿等[4]采用ICP-AES/ICP-MS技術(shù)分析測定了四種柴胡種質(zhì)藥材中21種常量及微量元素的含量，這些研究為柴胡的質(zhì)量評價(jià)提供了重要依據(jù)。

三、結(jié)論

本文應(yīng)用亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法，測定不同產(chǎn)地及不同部位野生與栽培柴胡中黃酮類成分含量，結(jié)果不同產(chǎn)地的野生與栽培柴胡中黃酮類物質(zhì)含量差別不是很大。不同部位柴胡中黃酮類物質(zhì)含量差別很大，柴胡花中黃酮含量最高，為柴胡擴(kuò)大藥源提供了理論依據(jù)。柴胡的質(zhì)量評價(jià)還應(yīng)結(jié)合其他主要有效成分進(jìn)行綜合評價(jià)。同時(shí)，對該測定方法進(jìn)行了全面的方法學(xué)考察，加樣回收率實(shí)驗(yàn)和精密度實(shí)驗(yàn)表明，該方法排除了干擾因素，精密度良好；重復(fù)性及穩(wěn)定性結(jié)果說明，該方法重復(fù)性好且測定的數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

[1]王斌,張騰霄,馬松艷,等.柴胡的臨床應(yīng)用及配伍規(guī)律研[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2012（1）.

[2]賀獻(xiàn)林,王旗,賀振寧,等.野生柴胡生育特性及其對馴化栽培的啟示[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（3）.

[3]王斌,張騰霄,劉利軍，等.不同產(chǎn)地狹葉柴胡糖類物質(zhì)含量的比較分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（22）.

[4]曹海祿,魏建和,何春娥,等.不同土壤種植下四種柴胡種質(zhì)藥材中常量及微量元素含量的比較研究[J].光譜學(xué)與光譜分析,2010（4）.

[責(zé)任編輯 鄭麗娟]

R284

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2095-0438（2015）11-0147-03

2015-06-22

王斌（1980－），女，吉林敦化人，綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院講師，碩士，研究方向：天然藥物質(zhì)量評價(jià)、藥用蕈菌活性成分及藥學(xué)。

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（12543082）；綏化市科技計(jì)劃項(xiàng)目（KJZD20120081）；綏化學(xué)院“天然藥物與食藥用菌質(zhì)量評價(jià)及功能保健品開發(fā)研究團(tuán)隊(duì)”階段性研究成果。