葡聚糖和腐植酸：對(duì)免疫系統(tǒng)的協(xié)同作用

Key words: glucan; humic acids; immunity; phagocytosis

有據(jù)可查，使用β-1，3-葡聚糖作為一種免疫調(diào)節(jié)劑已經(jīng)超過50年。實(shí)驗(yàn)表明粗制的酵母細(xì)胞制備物通過補(bǔ)體系統(tǒng)的激活來刺激巨噬細(xì)胞，使得對(duì)多糖免疫調(diào)節(jié)特性的研究興趣第一次被提起來。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究確定的免疫調(diào)節(jié)活性成分為β-1，3-葡聚糖。隨后大量研究表明β-1，3-葡聚糖，無論是顆?；蚴侨芤?，均表現(xiàn)出免疫刺激特性，包括抗細(xì)菌和抗癌活性。2500多種出版物報(bào)道，β-1，3-葡聚糖的溶液或顆粒，均表現(xiàn)出顯著的免疫調(diào)節(jié)性能。目前，葡聚糖被認(rèn)為是最有效的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑之一。

一些研究表明，與葡聚糖相結(jié)合的生物活性分子具有協(xié)同效應(yīng)。大量報(bào)告顯示，當(dāng)葡聚糖與維生素C結(jié)合會(huì)產(chǎn)生一些有益的影響。與維生素C表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)的主要原因是：該維生素顯示出與葡聚糖刺激完全相同的免疫反應(yīng)，即巨噬細(xì)胞活性，自然殺傷細(xì)胞的活性，以及特定抗體的形成。一項(xiàng)研究顯示，在小鼠被感染科氏中殖孔絳蟲的治療過程中，葡聚糖-維生素C的組合具有顯著的治愈能力；治療對(duì)肝纖維化和病理生理學(xué)變化產(chǎn)生積極的調(diào)制作用。同組研究人員還發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵衍生的葡聚糖對(duì)幾種寄生蟲是一種前景廣闊的藥劑。至于肝病，裂褶菌胞外多糖葡聚糖被證明有助于抵抗肝臟的缺血再灌注損傷，這些影響機(jī)制可能是由于葡聚糖引起早期基因的表達(dá)減少了對(duì)肝臟的損傷。

腐植酸物質(zhì)主要存于深度降解的泥炭中。腐植酸是一組由復(fù)雜的芳香族聚合物結(jié)構(gòu)組成的高分子量的大分子物質(zhì)，和黃腐酸代表了腐植酸物質(zhì)中特定的組分，一些人認(rèn)為是惰性的，而另一些人認(rèn)為它們是生物毒素。更詳細(xì)的研究顯示出不同的結(jié)果：高劑量的腐植酸在腸細(xì)胞中會(huì)誘導(dǎo)染色體異常，造成DNA氧化損傷，抑制核因子κB的活性，刺激胸腺和中性粒細(xì)胞。另一方面，最近一些令人關(guān)注的、潛在的、臨床重要的生物活性物質(zhì)與各種類型腐植酸有關(guān)，包括抗病毒的特性和淋巴細(xì)胞的增殖。也有研究將腐植酸添加到飼料中，促進(jìn)了養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康。

最近的研究表明，白藜蘆醇能夠顯著改善葡聚糖的生物活性，所以我們?cè)u(píng)估葡聚糖與腐植酸對(duì)免疫反應(yīng)可能有協(xié)同作用。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物

6～10周齡的BALB/c雌性小鼠，購(gòu)自杰克遜實(shí)驗(yàn)室（美國(guó)緬因州巴爾港）。

所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是根據(jù)美國(guó)肯塔基州路易斯維爾市路易斯維爾大學(xué)的動(dòng)物管理委員會(huì)的規(guī)范進(jìn)行。動(dòng)物用CO2窒息處死。

1.2 材料

RPMI 1640培養(yǎng)基，檸檬酸鈉，卵白蛋白，抗生素，瑞氏色素，鱟溶解物試驗(yàn)E-TOXATE，弗氏佐劑，伴刀豆球蛋白A（Con A）（從美國(guó)密蘇里州圣路易斯Sigma公司購(gòu)買），胎牛血清（從美國(guó)猶他州洛根Hyclone實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買）。

1.3β-1,3-葡聚糖

本研究使用的葡聚糖從以下公司購(gòu)得：酵母型不溶性葡聚糖No.300來自轉(zhuǎn)運(yùn)站（美國(guó)，南卡羅來納州，哥倫比亞），水溶性葡聚糖海帶多糖來自Sigma公司。

1.4 提取步驟

實(shí)驗(yàn)中使用的兩種腐植酸：一個(gè)提取自捷克共和國(guó)的風(fēng)化褐煤（HZ）；另一個(gè)提取自中國(guó)的褐煤（HC）。對(duì)不同的腐植酸進(jìn)行分離，依據(jù)國(guó)際腐殖質(zhì)學(xué)會(huì)的程序進(jìn)行純化，并冷凍干燥。

1.5 固態(tài)13C-核磁共振(NMR)光譜

固態(tài)13C-核磁共振光譜，用Bruker（美國(guó)馬薩諸塞州比爾里卡）的Avance AV-400WB（9.4-T）型光譜儀測(cè)定，共振頻率為100.47 MHz，采用交叉極化磁性旋轉(zhuǎn)技術(shù)，旋轉(zhuǎn)頻率為12 KHz，脈沖寬度為90°，采樣時(shí)間為30 ms，延遲時(shí)間為4.0 s。

1.6 元素分析

凍干樣品中的碳、氫、氮含量，一式2份，采用LECO?（美國(guó)密歇根州圣若瑟）CHN 900型分析儀器進(jìn)行元素分析。氧的含量通過差減法進(jìn)行確定（無灰基）。

1.7 體外吞噬作用

在腹腔注射葡聚糖和/或如前面所述腐植酸之后，使用合成的微球（2-甲基丙烯酸羥乙酯[HEMA]顆粒），供體外測(cè)定吞噬作用，即，采用0.05 mL的HEMA粒子（5×108/mL）培養(yǎng)血液或分離的腹膜細(xì)胞。試管于37 ℃培養(yǎng)60 min，并間歇振蕩。涂片標(biāo)本用瑞氏色素進(jìn)行染色。細(xì)胞有3個(gè)或更多的HEMA粒子則認(rèn)為呈陽性。同樣的涂片標(biāo)本再被用于評(píng)價(jià)細(xì)胞的類型。

1.8 白細(xì)胞介素(IL)-2的生產(chǎn)評(píng)價(jià)

純化的脾細(xì)胞（2×106/mL和5%的胎牛血清在RPMI 1640培養(yǎng)基中）加入到24孔培養(yǎng)板中。在陽性對(duì)照孔加入1 μg 伴刀豆球蛋白A，將細(xì)胞在恒濕培養(yǎng)箱中（37 ℃，5% CO2）培養(yǎng)72 h。在培養(yǎng)結(jié)束后，收集上清液，過濾（孔徑0.45 μm），并測(cè)試IL-2的存在。IL-2水平使用Quantikine小鼠IL-2試劑盒（美國(guó)明尼蘇達(dá)州明尼阿波利斯研發(fā)體系）測(cè)定。

1.9 細(xì)胞因子陣列

單個(gè)細(xì)胞因子通過聯(lián)合生物技術(shù)（美國(guó)馬里蘭州維爾）在小鼠血清中進(jìn)行測(cè)定。小鼠注射試驗(yàn)組合物24 h后，將小鼠處死，并收集血清，儲(chǔ)存在-80 ℃冰箱中。對(duì)于細(xì)胞因子的分析，我們采用聯(lián)合生物技術(shù)所提供的蛋白質(zhì)微陣列服務(wù)。簡(jiǎn)言之，該服務(wù)使用夾層的基于抗體的蛋白被用于多重測(cè)定。一個(gè)共軛鏈霉親和素-Cy5被用于分析檢測(cè)，該方法在每個(gè)芯片的陽性和陰性對(duì)照中進(jìn)行，一式4份測(cè)定。該測(cè)定法檢測(cè)下列細(xì)胞因子：IL-2，干擾素-γ，腫瘤壞死因子（TNF）-α，IL-8，IL-12 p70，IL-12 p40，IL-4，IL-6，IL-10，IL-5，干擾素誘導(dǎo)蛋白-10，巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β，IL-13，IL-1β和單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP）。

1.10 體內(nèi)腫瘤抑制

每只小鼠在皮下脂肪墊中注射磷酸緩沖鹽水（PBS）配置的1×106Ptas64細(xì)胞。在明顯發(fā)現(xiàn)腫瘤后（一般在細(xì)胞注射14天后），將小鼠分配給實(shí)驗(yàn)組。用PBS稀釋過測(cè)試樣品后，采用腹膜注射稀釋樣品，處理完成之后將小鼠處死，從其身上取出腫瘤并稱重。

1.11 抗體的形成

小鼠用100 μg卵清蛋白注射2次（間隔2周），在最后1次注射7天后收集血清。特異性抗體對(duì)抗卵清蛋白的水平通過酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)。采用弗氏佐劑作為陽性對(duì)照。

1.12 統(tǒng)計(jì)

采用學(xué)生t-檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

在元素分析，特別是在13C-核磁共振分析中能夠觀察到，在芳香族和脂肪族結(jié)構(gòu)部分，HZ呈現(xiàn)出比HC更多的功能性基團(tuán)，主要體現(xiàn)在酚基碳、羰基碳、O-烷基碳的含量較高。但是，HC呈現(xiàn)出顯著的芳香性，而HZ呈現(xiàn)出芳香性顯著的脂肪族排列。因此得到了2個(gè)結(jié)構(gòu)完全不同的腐植酸：HZ具有更多的含氧官能團(tuán)，并與芳香族和脂肪族基團(tuán)結(jié)合，HC具有較少功能性基團(tuán)，但具有高芳香性（表1和表2）。

表1 腐植酸樣品的元素分析Tab.1 Elementary analysis of HA samples %

表2 腐植酸樣品的13C-核磁共振光譜分析Tab.2 13C-NMR spectroscopy of HA samples

首先，測(cè)試腐植酸和腐植酸-葡聚糖對(duì)腹腔內(nèi)一些細(xì)胞的影響。在隨后的所有實(shí)驗(yàn)中，使用相同組合方式，觀察到無論是腹腔注射或口服（數(shù)據(jù)未顯示），細(xì)胞結(jié)構(gòu)（關(guān)于二者總數(shù)和分類計(jì)數(shù)）沒有變化。在所有情況下，葡聚糖、腐植酸、或葡聚糖-腐植酸能溶解在PBS中，被用作陰性對(duì)照。

各種葡聚糖對(duì)巨噬細(xì)胞的影響是公認(rèn)的。然而，為了證明免疫調(diào)節(jié)劑的新組合確實(shí)表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)特性，對(duì)吞噬作用進(jìn)行評(píng)價(jià)是必要的。首先，我們測(cè)量了葡聚糖和/或腐植酸對(duì)末梢血中合成的HEMA微球體外吞噬作用的影響（圖1）。葡聚糖和腐植酸均刺激合成顆粒的內(nèi)部轉(zhuǎn)化，但該組合制劑，特別是在比例為1∶1時(shí)，對(duì)血液中性粒細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的協(xié)同效應(yīng)。

圖1 腹腔內(nèi)注射葡聚糖和/或腐植酸合成微球(HEMA粒子)對(duì)體外吞噬作用增強(qiáng)效果Fig.1 Potentiation of in vitro phagocytosis of synthetic microspheres (HEMA particles) by intraperitoneally injected glucans and/or HAs

當(dāng)測(cè)試腹腔巨噬細(xì)胞的體外吞噬作用時(shí)，得到了相同的結(jié)果（圖2）。在這兩種情況下，將細(xì)胞與注射了葡聚糖和/或腐植酸的小鼠身體分離。

圖2 腹腔內(nèi)注射葡聚糖和/或腐植酸合成微球(HEMA粒子)對(duì)體外吞噬作用增強(qiáng)效果Fig.2 Potentiation of in vitro phagocytosis of synthetic microspheres (HEMA particles) by intraperitoneally injected glucans and/or HA

免疫調(diào)節(jié)活性也能通過對(duì)由脾細(xì)胞產(chǎn)生的IL-2的影響得到證明（圖3）。從對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠分離出來的的脾細(xì)胞在體外培養(yǎng)72 h后測(cè)定IL-2的產(chǎn)生。此外，葡聚糖和腐植酸結(jié)合的處理小鼠對(duì)IL-2的產(chǎn)生有顯著的刺激效果。在采用HZ的情況下，當(dāng)HZ與葡聚糖為9∶1時(shí)表現(xiàn)出最高的刺激效果；而在采用HC的情況下，HZ與葡聚糖為1∶9時(shí)IL-2獲得最高的產(chǎn)生量。與單獨(dú)使用葡聚糖或腐植酸相比，所有這些組合都表現(xiàn)出更高的刺激效果。由于無刺激的脾細(xì)胞（PBS組）IL-2的分泌量為零，所以即使是最低量的刺激在統(tǒng)計(jì)學(xué)上產(chǎn)生的影響也是顯著的。

圖3 葡聚糖-腐植酸結(jié)合物對(duì)伴刀豆球蛋白A刺激脾細(xì)胞分泌IL-2的影響Fig.3 Effects of glucan–HA combinations on Con A-stimulated secretion of IL-2 by spleen cells

初步實(shí)驗(yàn)之后，我們測(cè)量取自24 h前腹腔內(nèi)注射的小鼠的細(xì)胞因子分泌物。由表3所示的結(jié)果可清楚地觀察到幾個(gè)重要的結(jié)論：在測(cè)試的14種細(xì)胞因子中，腐植酸和葡聚糖只刺激其中6種細(xì)胞因子的分泌（IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，TNF-α和MPC-1）；在HC中有個(gè)例外，它不刺激MCP-1的產(chǎn)生。關(guān)于H Z，相對(duì)于單獨(dú)使用H Z或葡聚糖，HZ與葡聚糖結(jié)合對(duì)IL-5， IL-6和TNF-α具有更高的刺激。稍微有點(diǎn)不同的是，HC-葡聚糖結(jié)合物僅僅在1∶9時(shí)才能提高IL-5， IL-6和TNF-α的分泌。在這兩種情況下，對(duì)MCP-1分泌的刺激都是微小的。

然后，我們專注利用輔助的組合物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，采免疫卵清蛋白、葡聚糖、腐植酸、腐植酸和葡聚糖與兩種腹膜劑量的抗原一起使用；用弗氏佐劑作為一個(gè)額外的陽性對(duì)照。所得結(jié)果表明（圖4），組合物在所有情況下對(duì)抗原都表現(xiàn)出顯著的佐劑活性（光密度，0.311±0.026）。對(duì)于HZ，在9∶1時(shí)表現(xiàn)出最高的刺激性，而HC，在1∶1和1∶9時(shí)表現(xiàn)出最高的刺激性。然而必須指出，沒有一個(gè)葡聚糖增效的體液免疫值達(dá)到了弗氏佐劑的水平（光密度，1.67±0.22）。

最后，對(duì)接種了Ptas64乳腺腫瘤的小鼠，每日在腹膜內(nèi)注射待測(cè)試的物質(zhì)以測(cè)試其治療效果（圖5）。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次（每個(gè)實(shí)驗(yàn)組3只小鼠），獲得了相似的結(jié)果。對(duì)照組（僅PBS）腫瘤的平均重量為699.7±38.5 mg。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，對(duì)于HZ實(shí)驗(yàn)組，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)起強(qiáng)烈抑制作用的分子很明顯是葡聚糖，因?yàn)閱为?dú)用葡聚糖的抑制性與HZ-葡聚糖的抑制性是一樣的。而對(duì)HC實(shí)驗(yàn)組，測(cè)試樣品在1∶1的比例對(duì)腫瘤生長(zhǎng)表現(xiàn)出強(qiáng)烈抑制性。這兩種情況下，單獨(dú)使用腐植酸都沒表現(xiàn)出顯著的抑制活性。

表3 腐植酸樣品和葡聚糖對(duì)細(xì)胞因子分泌的影響Tab.3 Effect of HA samples and glucan on cytokine secretion

圖4 腹腔注射兩種腐植酸-葡聚糖組合對(duì)抗卵清蛋白抗體形成的影響Fig.4 Effects of two intraperitoneal injections of tested HA–glucan combinations on formation of antibodies against ovalbumin

圖5 腐植酸-葡聚糖對(duì)接種Ptas64乳腺腫瘤的BALB/c小鼠的治療效果Fig.5 HA-glucan therapy of BALB/c mice with Ptas64 mammary carcinoma

3 討論

腐植酸物質(zhì)是土壤中腐殖質(zhì)的主要成分。它們是動(dòng)植物遺骸中有機(jī)物經(jīng)化學(xué)和微生物降解的產(chǎn)物。它們的溶解度隨pH值而不同。這3個(gè)主要的有機(jī)腐植酸組分可以分為：腐植酸，在堿性pH下可溶，酸性pH下不可溶；黃腐酸，任何pH值下均可溶；棕腐酸在任何pH值下均不可溶。這些腐植酸物質(zhì)的結(jié)構(gòu)是不明確的。從定性的角度看，它們呈現(xiàn)相同類型的官能團(tuán)和結(jié)構(gòu)。然而，由于系統(tǒng)的多分散性，難于表明其確切的結(jié)構(gòu)。一般而言，它們是具有不同分子量和分子大小的酸聚合電解質(zhì)，并具有不同的芳香族特性。這些物質(zhì)的特點(diǎn)是它們能影響不同生物的代謝和發(fā)育。因此，腐植酸物質(zhì)能影響植物代謝，微生物活動(dòng)和動(dòng)物發(fā)育，這在許多其他的研究中已進(jìn)行過描述。然而，對(duì)結(jié)構(gòu)特征和生物活性的相關(guān)研究卻很少。

不同的研究表明，表征腐植酸物質(zhì)的實(shí)效方法是13C-核磁共振和元素分析法互補(bǔ)使用。我們將這些技術(shù)應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)使用的兩種腐植酸，在元素分析，特別是在13C-核磁共振（NMR）中能夠觀察到，在芳香族和脂肪族結(jié)構(gòu)部分，HZ呈現(xiàn)出比HC更多的功能性基團(tuán)。這種功能性基團(tuán)主要體現(xiàn)在酚、羰基碳、O-烷基碳的含量較高。但是，HC呈現(xiàn)出顯著的芳香性，而HZ呈現(xiàn)出芳香性（占主導(dǎo)）和顯著的脂肪族排列。因此我們使用了兩個(gè)結(jié)構(gòu)完全不同的腐植酸：HZ具有更多的和芳香族和脂肪族基團(tuán)結(jié)合的含氧官能團(tuán)，HC具有較少官能團(tuán)，但具有高芳香性（表1和表2）。

各種類型的免疫調(diào)節(jié)劑，尤其是葡聚糖，刺激吞噬作用是公知的。因此，通過評(píng)估這類免疫反應(yīng)，來判定有生物活性的免疫調(diào)節(jié)劑效果是重要的。我們測(cè)試了血液周邊白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在吞噬作用中使用HEMA合成微球后的變化。這些微粒具有輕微的負(fù)電荷，且也沒有特別的附著到細(xì)胞表面，這保證了只有活性吞噬細(xì)胞內(nèi)部轉(zhuǎn)化這些惰性粒子。該現(xiàn)象通過相差顯微鏡，電子顯微鏡，以及猝滅法已經(jīng)驗(yàn)證。我們發(fā)現(xiàn)，測(cè)試的這兩種物質(zhì)引起體外吞噬作用的顯著增加，且這兩種物質(zhì)的組合物顯示出對(duì)巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的協(xié)同效應(yīng)顯著。所示數(shù)據(jù)不但反映了單次注射試驗(yàn)物質(zhì)的效果，類似的效果在口服給藥后（數(shù)據(jù)未顯示出）也可以觀察到。觀察這些實(shí)驗(yàn)中由于直接的細(xì)胞活化，其血液或腹膜腔中各細(xì)胞總數(shù)和比例都沒有變化。

除了直接影響免疫系統(tǒng)中的各種細(xì)胞，β-葡聚糖的免疫刺激和其他的免疫導(dǎo)致一些細(xì)胞因子的釋放和合成作用增強(qiáng)。首先，我們注意到通過體外脾細(xì)胞的刺激產(chǎn)生了IL-2，發(fā)現(xiàn)β-葡聚糖對(duì)免疫系統(tǒng)中的各種細(xì)胞有直接作用，葡聚糖和其他免疫調(diào)節(jié)劑的免疫刺激作用是增強(qiáng)合成作用和釋放若干細(xì)胞因子來起作用的。并且發(fā)現(xiàn)，腐植酸-葡聚糖的組合物刺激比單獨(dú)測(cè)試時(shí)釋放更高的IL-2，而90%的HZ在與葡聚糖組合的情況下，釋放的IL-2比HZ與伴刀豆球蛋白A組合時(shí)更高。

我們?cè)u(píng)估了對(duì)血清中14種不同細(xì)胞因子的影響。HC-葡聚糖刺激效果依賴于其比例，所以HZ比HC的刺激效果更明顯，而且在所有情況下都比單獨(dú)使用腐植酸刺激所產(chǎn)生細(xì)胞因子的效果高。刺激效果最高的細(xì)胞因子是IL-5，IL-6和TNF-α，而14個(gè)細(xì)胞因子中的8個(gè)沒有檢測(cè)到刺激效果。

細(xì)胞因子是細(xì)胞間信息交流的重要載體，它們?cè)诓煌庖呦到y(tǒng)間的信息流動(dòng)中起著極其關(guān)鍵的作用。報(bào)告中顯示癌癥中的ILs可以表現(xiàn)出對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制功能及對(duì)癌癥生長(zhǎng)的促進(jìn)功能。腫瘤惡化過程的性質(zhì)是復(fù)雜的，由惡性細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子可作為自分泌生長(zhǎng)因子和免疫調(diào)節(jié)劑。

最近的一些研究證實(shí)，葡聚糖也可以作為一種佐劑輔助體液免疫反應(yīng)。我們通過比較測(cè)試葡聚糖-腐植酸組合物和弗氏佐劑的佐劑活性，試驗(yàn)結(jié)果表明，盡管活性總是低于弗氏佐劑，但還是很重要的，其中葡聚糖-HC二者組合的活性是最高的。

最后，我們決定測(cè)試腐植酸-葡聚糖的組合對(duì)小鼠體內(nèi)乳腺腫瘤細(xì)胞Ptas64生長(zhǎng)的影響。我們先前的研究工作表明，小鼠和人類CR3對(duì)葡聚糖響應(yīng)有極高的相似性，這使得小鼠腫瘤模型適合于葡聚糖的研究。我們采用了與之前發(fā)表的文章相同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，即采用發(fā)酵衍生的葡聚糖。類似于抗體應(yīng)答，發(fā)現(xiàn)1∶1的HC-葡聚糖具有最高的抑制效果，我們觀察到有92%以上的抑制率。該結(jié)果表明，腐植酸的芳香性在抗腫瘤作用中發(fā)揮重要作用，因?yàn)镠Z的芳香性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于HC，HZ沒有表現(xiàn)出高的抑制活性。

脂多糖污染可能掩蓋任一免疫調(diào)節(jié)劑的實(shí)際效果。因此，我們檢測(cè)了研究方案中的脂多糖污染，測(cè)定的結(jié)果都小于10 EU。另外，我們通過用10 μg/mL多粘菌素B處理葡聚糖和腐植酸，消除脂多糖的功能，兩種情況下得到了相同的結(jié)果。從常規(guī)的和無脂的多糖材料中取得的結(jié)果也相似，表明微量脂多糖的存在對(duì)提高免疫活性和抗腫瘤反應(yīng)無影響。

總結(jié)我們的數(shù)據(jù)，結(jié)果表明腐植酸具有生物免疫調(diào)節(jié)活性，影響體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。另外，H Z和H C在免疫反應(yīng)的刺激中起著協(xié)同作用，這一發(fā)現(xiàn)為這些天然免疫調(diào)節(jié)劑的進(jìn)一步研究提供了支持。

略)

譯自：Journal of Medicinal Food，2010，13（4）：863～869。

Vaclav Vetvicka1，Roberto Baigorri2，Angel M. Zamarre?o2，Jose M. Garcia-Mina2，3，Jean-Claude Yvin4著周霞萍5樊興明5譯

（1 美國(guó)路易斯維爾大學(xué)病理學(xué)系 肯塔基州 40292
2 鈦美農(nóng)業(yè)國(guó)際魯利耶集團(tuán)研發(fā)部 奧爾科延 999019
3 西班牙納瓦拉大學(xué)化學(xué)和土壤化學(xué)系 潘普洛納 999023
4 法國(guó)鈦美農(nóng)業(yè)國(guó)際研發(fā)部 迪納爾 999019
5 華東理工大學(xué)科學(xué)技術(shù)發(fā)展研究院 上海 200237）

腐植酸是由有機(jī)物質(zhì)分解產(chǎn)生的混合物。盡管它們普遍存在，但對(duì)它們的生物學(xué)效應(yīng)了解有限，且目前的研究結(jié)果存在爭(zhēng)議。因此對(duì)來源不同且具有不同的生化特性的兩種類型的腐植酸的免疫效果進(jìn)行評(píng)估。單獨(dú)使用這兩種腐植酸或與已知發(fā)酵衍生的免疫調(diào)節(jié)劑葡聚糖結(jié)合使用，并測(cè)其在細(xì)胞(吞噬作用和腫瘤抑制)和體液(抗體的產(chǎn)生和細(xì)胞因子的分泌)的免疫反應(yīng)。研究結(jié)果表明，腐植酸是具有生物活性的免疫調(diào)節(jié)劑，影響體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。此外，本文研究的兩種腐植酸在免疫反應(yīng)的刺激下具有協(xié)同效應(yīng)，為這些天然免疫調(diào)節(jié)劑的進(jìn)一步研究提供了支持。

葡聚糖 腐植酸 免疫力 吞噬作用

Glucan and Humic Acid: Synergistic Effects on the Immune System

Vaclav Vetvicka1, Roberto Baigorri2, Angel M. Zamarre?o2, Jose M. Garcia-Mina2,3, Jean-Claude Yvin4write Zhou Xiaping5, Fan Xingming5translate
(1 Department of Pathology, University of Louisville, Louisville, Kentucky, USA, 40292
2 R&D Department, Timac Agro International-Roullier Group, Orcoyen, 999019
3 Department of Chemistry and Soil Chemistry, University of Navarra, Pamplona, Spain, 999023
4 R&D Department, Timac Agro International, Dinard, France, 999019
5 Institute of Science and Technology Development, East China University of Science and Technology, Shanghai, 200237)

Humic acids are compounds resulting from decomposition of organic matter. Despite their common presence, our knowledge of their biological effects is limited, and current findings are controversial. We decided to evaluate the immunological effects of two different types of humic acids, differing in source and biochemical characteristics. Using both components either alone or in combination with the well-established yeast-derived immunomodulator glucan, we measured their effects on both the cellular (phagocytosis and tumor suppression) and humoral (antibody production and cytokine secretion) branches of immune reactions. In summary, our results suggest that humic acids are biologically active immunomodulators affecting both the humoral and cellular branches of immune reactions. In addition, the two humic acids studied here are working in synergy in stimulation of the immune reaction, supporting further studies of these natural immunomodulators.

TQ314.1，R979.5

A

1671-9212(2015)06-0034-07

2014-10-18

周霞萍，女，1953年生，教授，主要從事煤、生物質(zhì)(腐植酸)基礎(chǔ)及應(yīng)用化學(xué)研究，E-mail：zxp@ecust.edu.cn。