謝俊華，聶少平，丁 翹，余 強(qiáng)，胡婕倫，熊 濤，謝明勇

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)免疫抑制小鼠腸道黏膜免疫的影響

謝俊華，聶少平*，丁 翹，余 強(qiáng)，胡婕倫，熊 濤，謝明勇

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

目的：探討植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)免疫抑制小鼠腸道黏膜免疫的影響。方法：利用環(huán)磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型，將小鼠隨機(jī)分為5 組，即正常對(duì)照組、模型組、胡蘿卜原漿組、發(fā)酵胡蘿卜漿組、滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組。小鼠以灌胃的方式給予胡蘿卜原漿、發(fā)酵胡蘿卜漿和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿后，分別測(cè)定各組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法測(cè)定小腸組織白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-10和分泌型免疫球蛋白A（secretory immunglobulin A，sIgA）含量，小腸組織病理學(xué)觀察及直接免疫熒光檢測(cè)IgA分泌B細(xì)胞數(shù)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組與模型組相比，植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿能顯著提高小鼠胸腺和脾臟指數(shù)，增加IgA分泌B細(xì)胞數(shù)量，提高細(xì)胞因子IL-2和sIgA的水平，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，但TNF-α和IL-10含量沒(méi)有顯著增加。結(jié)論：植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿能有效拮抗環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠免疫功能的抑制作用和腸道結(jié)構(gòu)損傷作用，提高免疫抑制小鼠的免疫功能和改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

植物乳桿菌NCU116；發(fā)酵胡蘿卜漿；腸道黏膜免疫

腸道不僅是消化吸收的重要場(chǎng)所，也是機(jī)體最大的免疫器官，腸道黏膜表面積龐大，它的結(jié)構(gòu)和功能構(gòu)成強(qiáng)大的黏膜免疫系統(tǒng)[1]。乳酸菌作為機(jī)體腸道中重要的生理菌群，在預(yù)防和治療急性胃腸炎、緩解過(guò)敏、抑制腸道炎癥反應(yīng)等免疫調(diào)節(jié)方面有重要作用[2]。但是由于不同乳酸菌細(xì)胞壁的蛋白表達(dá)譜和DNA未甲基化的胞嘧啶鳥(niǎo)嘌呤（cytidine-phosphatte-guanine，CpG）二核苷酸含量存在差異，因此不同益生菌對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用存在特異性[3]。乳酸菌可以通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)免疫細(xì)胞的增殖分化、表面分子的表達(dá)以及細(xì)胞因子的分泌等作用增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，如增強(qiáng)腸道巨噬細(xì)胞的吞噬能力[4]、增加腸道樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）及巨噬細(xì)胞表達(dá)CD80、CD86、MHCⅡ分子[5]、增加小腸固有層IgA分泌B細(xì)胞數(shù)量[6]、增加腸道中抗炎性因子白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）和干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）的分泌量[7]。

IL-2、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是主要由機(jī)體活化T細(xì)胞分泌的促炎細(xì)胞因子[8]；IL-10是重要的抗炎因子，能抑制輔助性T細(xì)胞、自然殺傷性細(xì)胞（natural killer cells，NKs）和巨噬細(xì)胞的活性[9]。分別調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫水平，兩者的平衡和適度的分泌水平在維持機(jī)體正常免疫功能方面有重要作用[10]。乳酸菌通過(guò)識(shí)別腸道上皮細(xì)胞及相關(guān)免疫細(xì)胞如DCs的模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRRs），由促分裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）、核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）等通路將信號(hào)級(jí)連放大并傳遞給下游相關(guān)免疫細(xì)胞如T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，介導(dǎo)免疫細(xì)胞增殖和分化并分泌相關(guān)細(xì)胞因子、趨化因子和其他效應(yīng)因子[11]，如促進(jìn)IgA分泌B細(xì)胞的增殖和分化，提高腸道黏膜分泌型免疫球蛋白A（secretory immunglobulin A，sIgA）分泌水平。

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）NCU116是由本課題組從泡菜老液中分離得到的一株益生菌[12]。研究表明，它具有較好的培養(yǎng)特性[13-16]，能有效改善機(jī)體的一些疾病，如非酒精性脂肪肝[17]、高血脂[18]、2型糖尿病[19]。胡蘿卜是常食用的蔬菜之一，富含功能性成分維生素和礦物質(zhì)，尤其含有大量類胡蘿卜素，研究表明攝入一定量的類胡蘿卜素能提高機(jī)體免疫功能和抑制腫瘤生長(zhǎng)[20-21]，并且經(jīng)益生菌發(fā)酵的果蔬產(chǎn)品能增加它的營(yíng)養(yǎng)和益生作用[19]。但目前還沒(méi)有研究報(bào)道植物乳桿菌NCU116發(fā)酵產(chǎn)品對(duì)腸道黏膜免疫的影響，為此本實(shí)驗(yàn)采用化療藥環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)建立小鼠免疫抑制模型，探討植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)小鼠腸道黏膜免疫的影響，以期為植物乳桿菌NCU116在果蔬發(fā)酵產(chǎn)品中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

植物乳桿菌NCU116菌粉發(fā)酵胡蘿卜漿產(chǎn)品由本課題組提供。

清潔級(jí)BALB/c小鼠40 只，雌性，6～8 周齡，體質(zhì)量（20±2） g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0004。

環(huán)磷酰胺（批號(hào)：07112221） 江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；小鼠TNF-α、IL-2、IL-10酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 武漢博士德生物工程有限公司；小鼠sIgA ELISA試劑盒 武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司；IgA-異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記抗體 英國(guó)Abcam公司；檸檬酸鈉修復(fù)液、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（4’,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）復(fù)染液、蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色液 上海碧云天生物技術(shù)有限公司；其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

3K15高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)Sigma公司；E-330酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo公司；生物顯微鏡、倒置顯微鏡 日本Olympus公司；SHP-150型生化培養(yǎng)箱 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；自動(dòng)組織脫水機(jī)、生物組織包埋機(jī)、電腦生物組織攤烤片機(jī)、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī) 浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

當(dāng)?shù)厥惺坌迈r胡蘿卜經(jīng)過(guò)如下加工流程[22]制得未發(fā)酵胡蘿卜原漿（A）、發(fā)酵胡蘿卜漿（B）和滅菌胡蘿卜漿（C）。

為保證發(fā)酵胡蘿卜漿中活菌含量，在實(shí)驗(yàn)之前，對(duì)其活菌數(shù)進(jìn)行測(cè)定。用MRS（Man-Rogosa-Sharpe）培養(yǎng)基梯度稀釋發(fā)酵胡蘿卜漿樣品至合適濃度，37 ℃培養(yǎng)48 h后對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示發(fā)酵胡蘿卜漿活菌含量為109CFU/g。

1.3.2 動(dòng)物分組與處理

將小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為5 組，每組8 只，分別為正常對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、胡蘿卜原漿組（C組）、發(fā)酵胡蘿卜漿組（D組）、滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組（E組）。除正常對(duì)照組外，各組小鼠連續(xù)3 d腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg/（kg·d）建立免疫抑制小鼠模型，造模結(jié)束后隨機(jī)選取正常對(duì)照組和模型組各2 只小鼠，測(cè)定免疫器官指數(shù)和血清中IL-2含量，結(jié)果顯示模型組小鼠器官指數(shù)和血清中IL-2含量明顯低于正常對(duì)照組，說(shuō)明免疫抑制小鼠模型建立成功。然后實(shí)驗(yàn)組分別灌胃10 mL/（kg·d）胡蘿卜原漿、發(fā)酵胡蘿卜漿和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿，正常對(duì)照組、模型組給予等體積的生理鹽水，每天上午9點(diǎn)灌胃一次，連續(xù)灌胃21 d。飼養(yǎng)環(huán)境溫度（22±1）℃，相對(duì)濕度（50±10）%，按照12 h光照/12 h黑暗，自由飲食、飲水。

1.3.3 計(jì)算小鼠胸腺和脾臟指數(shù)

末次給藥24 h后，稱體質(zhì)量，頸椎脫臼處死小鼠，立即分離出胸腺和脾臟。以胸腺或脾臟質(zhì)量和體質(zhì)量的比值表示胸腺和脾臟指數(shù)（mg/g）。

1.3.4 小腸組織細(xì)胞因子含量的檢測(cè)

取約100 mg空腸組織用冷生理鹽水制成10%組織勻漿，3 000 r/min離心15 min，收集上清液，分別按照IL-2、IL-10、TNF-α和sIgA ELISA試劑盒操作說(shuō)明，測(cè)定相應(yīng)細(xì)胞因子的含量。

1.3.5 小腸組織病理學(xué)觀察

取適量空腸組織，參照Chen Changying等[23]的方法進(jìn)行HE染色，100 倍光學(xué)顯微鏡下詳細(xì)觀察和比較空腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，并應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)（Image-Pro Plus 6.0），具體測(cè)量腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度。每段空腸取3 張切片進(jìn)行拍照，每張切片隨機(jī)選取2 個(gè)視野對(duì)5 根最長(zhǎng)腸絨毛的長(zhǎng)度（以腸腺絨毛連接處到絨毛頂端為準(zhǔn)）和最深隱窩深度（以腸腺絨毛連接處到腸腺基部為準(zhǔn)）進(jìn)行測(cè)量，并取平均值。

1.3.6 小腸組織直接免疫熒光法檢測(cè)IgA分泌B細(xì)胞

直接免疫熒光法檢測(cè)IgA分泌B細(xì)胞參照de Moreno等[24]的方法，每段空腸取1 張切片進(jìn)行200 倍熒光顯微鏡視野下觀察拍照，每張切片隨機(jī)選取2 個(gè)視野運(yùn)用Image-Pro Plus 6.0計(jì)數(shù)IgA分泌B細(xì)胞數(shù)，并取平均值。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)免疫抑制小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響

免疫系統(tǒng)是生物必備的防御機(jī)構(gòu)，由免疫器官、免疫細(xì)胞、免疫分子組成。胸腺、脾臟組織是機(jī)體的主要免疫器官，胸腺、脾臟指數(shù)的高低客觀地反映機(jī)體非特異性免疫能力強(qiáng)弱[25]。由表1可知，環(huán)磷酰胺造模后，模型組小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著低于正常對(duì)照組（P＜0.05），說(shuō)明小鼠免疫抑制模型造模成功。與模型組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較，胡蘿卜原漿組、發(fā)酵胡蘿卜漿組、滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)都顯著增加（P＜0.05）。與正常對(duì)照組相比，胡蘿卜原漿組胸腺指數(shù)顯著降低（P＜0.05），而脾臟指數(shù)沒(méi)有顯著性差異；發(fā)酵胡蘿卜漿組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組的脾臟指數(shù)都明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.05）。

表1 各組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)測(cè)定結(jié)果Table 1 Thymus and spleen indices in immunosuppressed mice

2.2 植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)免疫抑制小鼠細(xì)胞因子水平的影響

表2 各組小鼠小腸組織細(xì)胞因子含量Table 2 Contents of cytokines in the small intestine of immunosuppressed mice

取空腸組織勻漿上清，適當(dāng)梯度稀釋，采用ELISA法測(cè)定IL-2、IL-10、TNF-α和sIgA含量，結(jié)果如表2所示。IL-2、TNF-α和IL-10是3 個(gè)重要介導(dǎo)免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子，sIgA是介導(dǎo)體液免疫的一個(gè)重要抗體。由表2可知，模型組與正常對(duì)照組相比，小鼠空腸組織IL-2、TNF-α、IL-10和sIgA分泌水平都顯著降低（P＜0.05）。發(fā)酵胡蘿卜漿組sIgA含量較模型組顯著增加（P＜0.05），但是IL-2、TNF-α和IL-10含量與模型組相比并無(wú)顯著性差異。滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組IL-2含量與模型組相比顯著增加（P＜0.05），滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組sIgA含量與模型組相比顯著增加（P＜0.05），而TNF-α含量與模型組相比顯著降低（P＜0.05），IL-10含量與模型組相比無(wú)顯著性差異。胡蘿卜原漿組發(fā)酵IL-2和TNF-α含量與模型組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，sIgA含量顯著高于模型組（P＜0.05），而IL-10含量顯著低于模型組（P＜0.05），其分泌水平低于發(fā)酵胡蘿卜漿組和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組。

2.3 小腸組織病理學(xué)觀察

圖1 各組小鼠空腸組織病理學(xué)觀察（HE，×100）Fig.1 Histopathological observations of the jejunum from different groups (HE, × 100）

小腸組織病理學(xué)觀察如圖1所示，正常對(duì)照組（圖1A）小腸絨毛排列整齊、較深隱窩、腸壁厚實(shí)明確的刷狀緣，而模型組（圖1B）絨毛長(zhǎng)度明顯下降、隱窩變淺或無(wú)、腸壁變薄、輕微水腫并且部分細(xì)胞有炎性浸潤(rùn)。免疫抑制小鼠在給予植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿（圖1D）和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿（圖1E）后腸道相關(guān)結(jié)構(gòu)形態(tài)得到不同程度的改善。而胡蘿卜原漿組（圖1C）小鼠空腸組織結(jié)構(gòu)改善作用相比發(fā)酵胡蘿卜漿組和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組不明顯。

圖2 各組小鼠空腸組織絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度（HE，×100）Fig.2 Villus length and crypt depth in the jejunum from different groups (HE, × 100)

如圖2所示，模型組空腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度較正常對(duì)照組都顯著降低（P＜0.05）。免疫抑制小鼠在給予植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿后空腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度顯著增加（P＜0.05），部分已經(jīng)恢復(fù)到正常對(duì)照組小鼠的狀態(tài)。而胡蘿卜原漿組小鼠空腸組織結(jié)構(gòu)沒(méi)有得到顯著的改善，隱窩深度還有降低的趨勢(shì)。

2.4 植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)免疫抑制小鼠IgA分泌B細(xì)胞數(shù)量的影響

圖3 直接免疫熒光法檢測(cè)各組小鼠空腸IgA分泌B細(xì)胞（IF，×200）Fig.3 Immunofluorescence assay for IgA-secreting B cells in the jejunum of mice (IF, × 200)

每段空腸取3 張切片進(jìn)行直接免疫熒光法檢測(cè)IgA分泌B細(xì)胞，DAPI復(fù)染核和IgA-FITC標(biāo)記抗體如圖3所示，每張切片隨機(jī)選取2 個(gè)視野運(yùn)用Image-Pro Plus 6.0計(jì)數(shù)IgA分泌B細(xì)胞數(shù)，并取平均值如圖4所示。

圖4 實(shí)驗(yàn)各組小鼠空腸IgA分泌B細(xì)胞數(shù)量（IF，×200）Fig.4 IgA-secreting B cells in the jejunum of mice (IF, × 200)

IgA分泌B細(xì)胞是分泌sIgA抗體的重要免疫細(xì)胞。如圖4所示，模型組的IgA分泌B細(xì)胞數(shù)量顯著低于正常對(duì)照組（P＜0.05），在給予植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿后，發(fā)酵胡蘿卜漿組、滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組分別較模型組的IgA分泌B細(xì)胞數(shù)量顯著性增加（P＜0.05）。胡蘿卜原漿組IgA分泌B細(xì)胞數(shù)量與模型組無(wú)顯著差異，并且顯著低于正常對(duì)照組水平（P＜0.05）。

3 討 論

胸腺和脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，發(fā)育情況的好壞決定機(jī)體免疫力的強(qiáng)弱。石峰等[26]用添加0.3%乳酸菌微生態(tài)制劑飼喂AA肉雞，結(jié)果顯示，添加0.3%乳酸菌微生態(tài)制劑組與對(duì)照組比較，脾臟和胸腺指數(shù)分別提高了44.26%、13.51%?？赡苁怯捎谌樗峋谀c道內(nèi)大量繁殖并合成了許多有益物質(zhì)如維生素和氨基酸等，為免疫器官的發(fā)育提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外，也可能是乳酸菌作為抗原物質(zhì)刺激了免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵胡蘿卜漿組和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)都不同程度的高于模型組；并且顯著高于正常對(duì)照組，推斷可能由于給予小鼠發(fā)酵胡蘿卜漿劑量太大，超過(guò)小鼠的免疫耐受范圍，引起過(guò)度的免疫反應(yīng)。表明攝入適量的植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿可以促進(jìn)機(jī)體免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，從而可以增強(qiáng)動(dòng)物體的免疫機(jī)能。

腸道是機(jī)體最大的免疫器官，其中腸相關(guān)淋巴組織（gut associated lymphoid tissues，GALT）是發(fā)揮免疫功能的主要部分，主要作用是防止病原體通過(guò)黏膜免疫系統(tǒng)侵害機(jī)體[27]。GALT由派伊爾結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、固有層和腸上皮中的大量淋巴細(xì)胞組成。而固有層中的B細(xì)胞被激活后，可分化成IgA分泌B細(xì)胞。de Merono等[28]研究也表明，長(zhǎng)期攝入益生菌發(fā)酵乳能增加腸道相關(guān)免疫因子分泌細(xì)胞如IgA分泌B細(xì)胞的數(shù)量顯著增加。有研究表明乳酸菌可通過(guò)腸道黏膜DCs，刺激B細(xì)胞遷移，進(jìn)而促進(jìn)IgA分泌B細(xì)胞分化[29]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在給予植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿后能刺激腸道IgA分泌B細(xì)胞的增殖。

IL-2、TNF-α和IL-10是3 個(gè)重要的細(xì)胞因子，IL-2主要由活化的T淋巴細(xì)胞分泌并參與淋巴細(xì)胞的增殖、成熟和分化，在調(diào)節(jié)黏膜免疫中有重要作用[30]；TNF-α主要由單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，并且參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)包括吞噬作用[31]；IL-10是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)水平的重要細(xì)胞因子，能抑制輔助型T細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性，防止機(jī)體過(guò)度免疫反應(yīng)[9]。免疫球蛋白是機(jī)體分泌能與抗原發(fā)生反應(yīng)的一類蛋白質(zhì)，其含量的高低決定著機(jī)體免疫力的強(qiáng)弱[32]，sIgA是腸道黏膜免疫中重要的應(yīng)答抗體，分泌至腸腔可以通過(guò)免疫排斥作用防止病原菌在腸上皮細(xì)胞的黏附[33]。研究表明IL-5能刺激B細(xì)胞的增殖與分化，促進(jìn)活化的B細(xì)胞分化成IgA分泌B細(xì)胞，而IL-2能夠增強(qiáng)IL-5的作用，促進(jìn)sIgA的生成[34]。朱于敏等[35]給小鼠灌服酸奶，然后測(cè)定其血清中的IL-2的含量，發(fā)現(xiàn)IL-2含量顯著升高，表明乳酸菌對(duì)IL-2具有正調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵胡蘿卜漿組和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿組小鼠的IL-2、sIgA含量和IgA分泌B細(xì)胞數(shù)均顯著高于模型組，說(shuō)明植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)IL-2具有正調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而可能促進(jìn)sIgA的分泌。TNF-α和IL-10是兩種重要的細(xì)胞因子，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿對(duì)TNF-α和IL-10含量沒(méi)有顯著影響，這有可能跟植物乳桿菌NCU116本身的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制有關(guān)，有報(bào)道稱不同乳酸菌介導(dǎo)TNF-α和IL-10分泌的能力不同[2]，甚至有下調(diào)的作用[28]。

小腸的正常組織結(jié)構(gòu)是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被充分消化吸收的保障，小腸絨毛的長(zhǎng)度和數(shù)量與腸道生理功能密切相關(guān)[36]。小腸絨毛變長(zhǎng)、數(shù)量增加，進(jìn)而增加小腸黏膜面積，有利于微生物的定殖和對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用，從而促進(jìn)小腸消化和吸收。微生物及其代謝產(chǎn)物能夠引起腸壁的厚度增加，使更多的固有膜延伸到腸絨毛中央。Maldonado等[37]研究表明益生菌發(fā)酵乳能改善腸道組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)；易陽(yáng)等[38]研究報(bào)道肉鴨攝入合生素（益生菌與益生元結(jié)合使用的生物制劑）可顯著增加十二指腸絨毛長(zhǎng)度（P＜0.05）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，免疫抑制小鼠在給予植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿后小腸絨毛和隱窩深度顯著增加，腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)也得到明顯改善。

綜上所述，植物乳桿菌NCU116發(fā)酵胡蘿卜漿和滅活發(fā)酵胡蘿卜漿不僅能改善環(huán)磷酰胺對(duì)腸道結(jié)構(gòu)的損傷，還能通過(guò)增加免疫器官指數(shù)，增加免疫細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)細(xì)胞因子分泌，從而發(fā)揮對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。上述結(jié)果及分析推斷發(fā)酵胡蘿卜漿的免疫調(diào)節(jié)作用優(yōu)于滅活發(fā)酵胡蘿卜漿。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為更充分利用乳酸菌、開(kāi)發(fā)出更多功能的乳酸菌制品提供理論依據(jù)與實(shí)踐指導(dǎo)。

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Effect of Carrot Slurry Fermented with Lactobacillus plantarum NCU116 on Intestinal Mucosal Immunity in Immunosuppressed Mice

XIE Junhua, NIE Shaoping*, DING Qiao, YU Qiang, HU Jielun, XIONG Tao, XIE Mingyong
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

Objective: To study the effect of carrot slurry fermented with Lactobacillus plantarum NCU116 on intestinal mucosal immunity in immunosuppressed mice. Methods: Immunosuppressed mouse model was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamid. Forty mice were randomly divided into 5 groups: blank control group, model control group, carrot slurry group, fermented carrot slurry group and sterilized fermented carrot slurry group. The mice were administered with slurry fermented with Lactobacillus plantarum NCU116 and sterilized fermented carrot slurry at a dose of 10 mL/(kg·d) for 21 consecutive days. At 24 h after the last administration, the mice in each group were sacrificed. Thymus and spleen indices were determined, the contents of IL-2, TNF-α, IL-10 and sIgA in small intestine were determined by using quantitative sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits, small intestine morphology was observed by hematoxylin-eosin (HE) stained section and immunofluorescence was used to assay IgA-secreting B cells. Results: Compared to the model control, carrot slurry fermented with Lactobacillus plantarum NCU116 could significantly increase thymus and spleen indices and the number of IgA-secreting B cells, enhance IL-2 and sIgA levels and improve the intestinal morphological structure. But the concentrations of TNF-α and IL-10 were not significantly increased. Conclusion: Carrot slurry fermented with Lactobacillus plantarum NCU116 can effectively antagonize cyclophosphamide-induced immune suppression and ameliorate intestinal morphological damage in mice, enhance immune function and improve intestinal morphology in immunosuppressed mice.

Lactobacillus plantarum NCU116; fermented carrot slurry; intestinal mucosal immunity

TS201.3

A

1002-6630（2015）21-0201-06

10.7506/spkx1002-6630-201521038

2015-05-09

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（863計(jì)劃）項(xiàng)目（2011AA100904）

謝俊華（1991—），男，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称窢I(yíng)養(yǎng)與安全。E-mail：jhxie6@163.com

*通信作者：聶少平（1978—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称坊瘜W(xué)與分析、食品營(yíng)養(yǎng)與安全、食品復(fù)雜碳水化合物。

E-mail：spnie@ncu.edu.cn