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(1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科)

·技術(shù)與方法·

HPLC聯(lián)合UV法測定煙酸片中煙酸的含量

吳廣1，曾賽麗2*

(1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科)

目的建立一種精確可靠的HPLC/UV法用于測定煙酸片中煙酸的含量。方法：HPLC法采用Aglient C18色譜柱，以0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)為流動相等度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長263 nm；UV法以磷酸二氫鉀-乙腈作為溶劑，在 263 nm 波長處測定吸光度；并通過檢測其線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度和加樣回收率對該方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果： 煙酸檢測質(zhì)量濃度在5.0～100.0μg/mL 范圍內(nèi)，與吸光度和峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，UV法檢測r=0.9959，平均加樣回收率為99.57%，RSD=1.08%(n=6)；HPLC法檢測r=0.999 8，平均加樣回收率為99.62%，RSD=0.74%(n=6)。結(jié)論：HPLC法和UV法聯(lián)用操作簡捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，并且具有更好的專屬性，可用于煙酸片煙酸的含量測定和質(zhì)量控制。

HPLC； UV； 含量測定； 質(zhì)量控制； 煙酸

煙酸(nicotinic acid)也稱作維生素B3，是一種水溶性維生素。煙酸可以擴(kuò)張周圍血管，臨床用于治療頭痛、偏頭痛、內(nèi)耳眩暈癥等。此外，煙酸還可以促進(jìn)消化系統(tǒng)的健康，減輕胃腸障礙；使皮膚更健康；降低血壓；減輕腹瀉等[1-2]。煙酸片作為化學(xué)藥品，在中國藥典中已經(jīng)收錄[3]，中國藥典中測定煙酸含量的方法為酸堿滴定法。本文首次采用HPLC聯(lián)合UV法對煙酸片進(jìn)行了含量測定，并證明本法結(jié)果方法可靠、重現(xiàn)性好、簡單易行、靈敏快速。

1 材料與方法

1.1儀器Agilent1100型高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、DVW紫外檢測器、ChemStation工作站、手動進(jìn)樣閥(美國安捷倫公司)；UV-2100型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)；電子分析天平(日本Shimadzu公司)；KQ-5200E型超聲波機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2藥品與試劑煙酸對照品購自上海晶純生化科技股份有限公司(HPLC，批號：N103654)；樣品煙酸片為上海信宜九福藥業(yè)有限公司(批號：140501、140502、140503，規(guī)格均為50 mg)。磷酸二氫鉀、乙腈等流動相所用試劑均為色譜純，其他試劑為分析純，水為注射用水。

1.3色譜光譜條件參照《中國藥典》2010版一部以及相關(guān)文獻(xiàn)確定檢測波長，使用紫外分光光度計(jì)和高效液相色譜儀通過煙酸對照品得到煙酸峰的光譜圖。對于流動相的選擇，本研究參考相應(yīng)文獻(xiàn)[4-6]，最終采用0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)為流動相，該流動相條件下出峰時(shí)間合適且可以得到很好的峰型。

HPLC法：Aglient C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)；檢測波長:263 nm；流速1.0 mL/min；柱溫28 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

UV法：溶劑：0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)；檢測波長:263 nm。

1.4溶液的制備精密稱取適量經(jīng)105 ℃干燥的煙酸對照品，置于棕色量瓶中，加入計(jì)算量的流動相制成每1 mL含50 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液；取樣品煙酸片10片，精密稱定，研細(xì)，取約0.10 g，精密稱定，至50 mL量瓶中，加相應(yīng)量的流動相，如樣品不溶可采用超聲處理，取出，靜置，加流動相稀釋至刻度，將所配溶液過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。本實(shí)驗(yàn)以0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)溶液作為陰性對照溶液。

1.5線性關(guān)系考察精密稱取煙酸對照品適量

加流動相制成每1 mL含250 μg的溶液。分別精密吸取0.5,1.0,2.0,5.0,10.0 mL測定，以對照品含量為橫坐標(biāo)，以吸光度或峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果煙酸在5.0～100.0 μg/mL范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系，UV法測得回歸方程：y=0.293 7x+0.052 7,r=0.995 9(n=5)。HPLC法測得回歸方程：y=575.47x-10.265,r=0.999 8(n=5)。

1.6方法的控制通過樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)測定樣品的穩(wěn)定性；通過重復(fù)性試驗(yàn)和準(zhǔn)確度試驗(yàn)，樣品含量和加樣回收率進(jìn)行方法的質(zhì)控分析。

2 結(jié) 果

2.1檢測波長的確定從煙酸標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖(圖1)觀察發(fā)現(xiàn)，煙酸在263 nm處有最大吸收，參照《中國藥典》2010版一部，選取263 nm作為檢測波長。

圖1 煙酸標(biāo)準(zhǔn)品UV色譜圖

2.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)按色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照液進(jìn)樣，記錄色譜(圖2)。結(jié)果表明陰性對照液對煙酸含量測定結(jié)果無干擾，該方法適用于本研究。

2.3穩(wěn)定性測定試驗(yàn)在本試驗(yàn)條件下，分別取同一份在室溫放置0,4,8,12,24h后的供試溶液各測1次。結(jié)果，UV法測得其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=0.65%，HPLC法測得其RSD=0.50%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖2 HPLC色譜圖 a.對照品；b.供試品；c.陰性對照品

2.4精密度測定試驗(yàn)取同一份供試品溶液20 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果，UV法測得其RSD=0.35%，HPLC法測得其RSD=0.45%，表明儀器的精密度良好。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(批號140501)樣品6份，參照方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果，UV法測得其RSD=0.95%，HPLC法測得其RSD=0.86%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6樣品含量測定取3批樣品，按方法制備樣品溶液，用UV法及HPLC測定樣品中煙酸含量，計(jì)算RSD，結(jié)果見表1。

表1煙酸含量的測定結(jié)果(n=4)

批號UV法含量(mg/片)RSD(%)HPLC法含量(mg/片)RSD(%)14050149.540.5049.380.5514050250.380.4250.640.4814050350.660.6951.050.72

表2UV法加樣回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

樣品含量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)X(%)RSD(%)20.1210.0429.6898.4020.1210.6430.5699.3020.1215.1235.56100.9199.571.0820.1215.4335.87100.9020.1220.6240.3699.0720.1219.9839.6498.85

表3HPLC法加樣回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

樣品含量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)X(%)RSD(%)20.1210.0429.8598.9020.1210.6430.4599.0020.1215.1235.43100.5099.620.7420.1215.4335.77100.6020.1220.6240.4699.3020.1219.9839.8099.40

3 討 論

煙酸是人體和動物中不可缺少的營養(yǎng)成分，它參與組織的氧化還原過程，具有促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝和擴(kuò)張血管的功能，能促進(jìn)人體和動物的生長發(fā)育。煙酸廣泛應(yīng)用在醫(yī)藥、食品和飼料上，近年來，不斷開發(fā)出新的用途。因此對煙酸含量的檢測需要更加精細(xì)和靈敏。

目前煙酸含量檢測的方法有很多種，其中《中國藥典》2010版采用酸堿滴定法測定煙酸片的含量[7-9]，該方法操作繁瑣，誤差較大，檢測限較低，不能用來監(jiān)測人體內(nèi)血藥濃度的變化。而本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法聯(lián)合UV法測定煙酸含量，通過對含量測定方法的進(jìn)行了系統(tǒng)性研究，UV色譜圖中顯示不同濃度的煙酸在263nm波長處有特征吸收峰；而UV法檢測r=0.9959，平均加樣回收率為99.57%，RSD=1.08%(n=6)，HPLC法檢測r=0.9998，平均加樣回收率為99.62%，RSD=0.74%(n=6)；以上結(jié)果表明UV法具有很強(qiáng)的專屬性，HPLC法相對精確度高，兩種方法的聯(lián)合使用能夠更好地保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

總之，在本試驗(yàn)條件下，HPLC聯(lián)合UV法測定煙酸片中煙酸含量的方法操作簡捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，具有更好的專屬性，可用于煙酸片及相關(guān)藥物的質(zhì)量控制，具有很好的市場應(yīng)用前景。

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DeterminationoftheNicotinicAcidinNicotinicAcidTabletsbyHPLCCombinedwithUV

WU Guang

(DepartmentofPharmacy,theSecondAffiliatedHospital,UniversityofSouthChina,Hengyang,Hunan421001,China)

ObjectiveTo establish an accurate and reliable HPLC/UV method for the quantitative determination of nicotinic acid in nicotinic acid tablets.MethodsThe chromatographic separation conditions employed for HPLV method were chosen using Aglient C18 column.0.02 mol/L potassium dihydrogen phosphate (Ph 6.8)-acetonitrile (90∶10) were used as the mobile phase pumped at a flow rate of 1.0mL/min and a detection wavelength at 263 nm was used.UV method use potassium dihydrogen phosphate (Ph 6.8)-acetonitrile (90∶10) as solvent,and the detection wavelength were at 263 nm.The linearity,precision,accuracy,recovery rate and other content were tested to validate the method.ResultsThe linear range of nictinic acid was 5.0～100.0 μg/mL.With UV method (r=0.995 9),the average recovery is 99.57% (RSD=1.08%,n=6);with HPLC method (r=0.999 8),the average recovery is 99.62% (RSD=0.74%,n=6).ConclusionThe HPLC/UV method is simple,accurate,high-specificial and reproducible.This method can be used for the quality control nicotinic acid tablets.

HPLC; UV; content determination; quality control; nicotinic acid

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2015.03.024

2014-12-24；

2015-04-07

*通訊作者，E-mail：2814940758@qq.com.

R927.2

A

(此文編輯：秦旭平)