王　華　喬　磊　沙南南　田樂園　王明霞　曲曉蘭

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安　271016)

泰山野生黃荊不同部位總黃酮含量的測定*1

王華喬磊沙南南田樂園王明霞曲曉蘭

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安271016)

摘要：目的測定泰山野生黃荊不同部位中總黃酮的含量。 方法采用紫外分光光度法測定總黃酮含量。結(jié)果泰山野生黃荊的葉、莖、果實中總黃酮含量分別為：7.82%、1.41%、4.55%。結(jié)論泰山野生黃荊不同部位中總黃酮的含量有明顯差異。

關(guān)鍵詞：泰山野生黃荊；總黃酮；含量測定

黃荊 (Vitex negundo L.)是馬鞭草科牡荊屬植物，別名黃荊條、布荊、五指柑、土常山、紫荊草等[1]。黃荊在我國有著悠久的用藥歷史，《本草綱目》《圖經(jīng)本草》《千金方》等古醫(yī)書均有記載?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明黃荊具有祛風(fēng)、除痰、行氣、止痛等作用[1]。黃荊在泰山地區(qū)資源豐富、分布廣泛。目前，對于黃荊化學(xué)成分的研究還處于初步階段，關(guān)于黃荊不同部位化學(xué)成分的研究尚未見報道。筆者采用紫外分光光度法，測定泰山野生黃荊葉、莖、果實不同部位中總黃酮的含量，以期能夠為泰山野生黃荊的開發(fā)利用和質(zhì)量評價提供科學(xué)依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器

S-54型紫外分光光度計(上海棱光技術(shù)有限公司)； FC104電子分析天平；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀； SHB-III循環(huán)水式多用真空泵；FW-135 粉碎機(jī)。

1.2試劑和藥品

蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號:100080-201008)；其他試劑均為分析醇。樣品采自泰山，經(jīng)泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院曲曉蘭老師鑒定為馬鞭草科牡荊屬植物黃荊(Vitex negundo L.)的葉、莖、果實。

2方法與結(jié)果

2.1溶液制備

2.1.1蘆丁對照品溶液準(zhǔn)確稱取105 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品0.0115 g置于50 ml容量瓶中，加入60%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為230 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，避光保存。

2.1.2供試品溶液稱取約3.0 g泰山野生黃荊不同部位(葉、莖、果實)干燥的粉末于500 ml圓底燒瓶中，加入60 ml 60%乙醇，85 ℃水浴加熱回流提取30 min，減壓抽濾，濾渣再用60 ml 60%乙醇85 ℃水浴加熱回流提取30 min，再次減壓抽濾，合并兩次濾液。取50 ml濾液轉(zhuǎn)移至100 ml容量瓶，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.1.35%亞硝酸鈉溶液稱取5.0 g亞硝酸鈉置于100 ml容量瓶中，加入適量蒸餾水溶解，定容，搖勻，避光保存。

2.1.410%硝酸鋁溶液 稱取10.0 g硝酸鋁置于25 ml容量瓶中，加入適量蒸餾水溶解，定容，搖勻，避光保存。

2.1.54%氫氧化鈉溶液 稱取4.0 g氫氧化鈉置于100 ml容量瓶中，加入適量蒸餾水溶解，定容，搖勻，避光保存。

2.2總黃酮測定方法的建立

2.2.1最大波長的確定準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液1.0 ml置于25 ml容量瓶中加入1.0 ml 5%亞硝酸鈉，放置5 min，再加入1.0 ml 10%硝酸鋁，放置5 min，然后加入10.0 ml 4%氫氧化鈉，最后用60%乙醇定容至刻度，搖勻，放置20 min，以空白為對照，于400～700 nm波段掃描，測定蘆丁的吸光度。經(jīng)掃描最終確定波長為520 nm。

2.2.2方法學(xué)考察

2.2.2.1線性關(guān)系考察分別準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.0.1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于25 ml容量瓶中，分別加入1.0 ml 5%亞硝酸鈉，放置5 min，再加入1.0 ml10%硝酸鋁，放置5 min，然后加入10.0 ml 4%氫氧化鈉，最后用60%乙醇定容至刻度，搖勻，放置20 min，分別測定吸光度值，以對照品濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸光度值(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=0.0086C+0.0011(R=0.9993)。表明蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在9.20~55.20 μg/ml與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2.2.2精密度試驗精密稱取泰山野生黃荊干燥的果實粉末3.0033g按“2.1.2”中方法制備成供試品溶液，并測定吸光度值，求得RSD為0.85%，表明本法精密度良好。

2.2.2.3重現(xiàn)性試驗稱取6份同批泰山野生黃荊干燥的果實粉末各3.0g按“2.1.2”中方法制備成供試品溶液，并測定吸光度值，測得各吸光度的RSD值為1.72%，表明試驗的重現(xiàn)性良好。

2.2.2.4穩(wěn)定性試驗取供試液2 ml，分別置于25.0 ml容量瓶中，按“2.2.2.1”方法加入顯色劑顯色后，每間隔30 min測定一次吸光度，連續(xù)6 h考察其穩(wěn)定性，結(jié)果RSD為1.94%(n=5)，表明供試品在 6 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.2.5加樣回收率試驗準(zhǔn)確稱取五份已知含量的野生泰山野生黃荊的干燥果實粉末供試品溶液每份1.0 ml置于25.0 ml容量瓶中，分別加入1.0 ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并測定吸光度值，計算平均回收率及RSD值。測得平均回收率為98.95%，RSD值為1.55%(n=5)。其結(jié)果見表1。

表1　加樣回收率試驗結(jié)果

2.3樣品測定

取制備好的供試品溶液，依標(biāo)準(zhǔn)曲線法在520nm下測定吸光度，再由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中總黃酮的含量。泰山野生黃荊葉、莖、果實中總黃酮含量分別為7.82%、1.41%、4.55%，結(jié)果見表2。

表2　泰山野生黃荊葉、莖、果實黃酮含量測定

3討論

本實驗采用了紫外分光光度計法測定了泰山野生黃荊葉、莖、果實中總黃酮的含量，含量高低順序為: 葉7.82%> 果實4.55%> 莖1.41%。該實驗方法操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

黃荊在泰山地區(qū)的分布很廣，野生資源極為豐富。但是國內(nèi)對其不同部位有效成分的研究還較少。目前很多研究表明，黃酮類物質(zhì)具有降血壓、降血糖和抗氧化[2-5]等多活性。因此為了充分利用野生植物資源，提高其藥用價值，本實驗以黃荊中黃酮類成分為指標(biāo)，考察不同部位黃酮類成分的分布情況。結(jié)果表明：不同部位的總黃酮含量有明顯的差別，葉中黃酮類成分含量最高。本實驗為科學(xué)開發(fā)利用黃荊提供了實驗依據(jù)，但本實驗只針對不同部位中的黃酮類成分進(jìn)行了考察，對于黃荊中的其它類成分以及其他因素對黃酮類成分的影響還有待進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)：

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基金項目：泰安市科技局大學(xué)生科技創(chuàng)新計劃(編號：2012D2049)。

作者簡介：王華(1992—)，女，河北人，2011級中藥學(xué)本科專業(yè)學(xué)生。

通訊作者：曲曉蘭(1980—)，quxiaolan@126.com,Tel:13954813004.

中圖分類號：R932

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1004-7115(2015)04-0382-02

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2015.04.007

(收稿日期2015-1-24)

Determination of the content of total flavonoids in different parts of Taishan wild Vitex negundo L.

WANGHuaQIAOLeiSHANan-nanTIANLe-yuanWANGMing-xiaQUxiao-lan

(Depat. of Pharmacy,Taishan Medical College,Taian 271016,China)

Abstract:Objective: Determination of total flavonoids in different parts of Taishan wild Vitex negundo L..Method: Determination of the Content of total flavonoids by spectrophotometry. Result: The content of total flavonids in leaf was the highest, in fruit was less than that in leaf, and stem was the least.Conclusion: The difference of total flavonoids content in different parts of Taishan wild Vitex negundo L. was significant.

Key words:Taishan wild Vitex negundo L.; total Flavonoids; Determination